体内遗传标记成团肠杆菌固氮质粒pEA9

用卡那霉素抗性（Kanr）基因对成团肠杆菌固氮质粒pEA9进行活体遗传标记。将来自质粒pEA9的3.0 kb片段（nif ENX）克隆到pBR322载体中,再将卡那霉素抗性（Kanr）基因插入到3.0 kb的片段中,构建成供体质粒pST5。将该质粒转化到含有待标记质粒pEA9的E.a.339菌株中,然后在AP培养基中消除供体质粒,筛选得到40个失去了pST5并保持卡那霉素抗性的克隆,分析表明它们不是质粒pEA9和pST5的共整合体,而是卡那霉素抗性基因通过两个质粒在nifENX区域内的DNA间的同源重组整合到了质粒pEA9上。 Abstract:The authors describe the in vivo labelling of the plasmid pEA9 in Enterobacter agglomerans 339 with a kanamycin resistance gene.For labelling purposes the donor plasmid pST5 was constructed.This plasmid contains the nif ENX region from pEA9,in which a kanamycin resistance gene is cloned.pST5 was transformed into E.a.339 and subsequently cured from the host.Curing was achieved with AP medium.Fourty strains that had lost pST5,but retained the kanamycin resistance,could be isolated.It showed that none of these clones contained co-integrates of pST5 and pEA9.This is evident that in all clones the kanamycin resistance gene was integrated into pEA9 by homologous recombination.     

普通小麦7B染色体两类低拷贝专化DNA序列的特性

研究表明, 多倍体小麦基因组中存在一类低拷贝、染色体专化的DNA序列, 其在多倍体形成时常表现出不稳定性.这类序列被认为在异源多倍体的建立和稳定中起着关键作用.为进一步研究这一问题, 对通过染色体显微切割从普通小麦( Triticum aestivum L.)中分离的5个7B染色体专化DNA序列的特性进行了研究.以这些序列为探针对大量的多倍体小麦和它们的二倍体祖先物种进行了Southern杂交分析.结果表明, 这些序列可被分为两种类型:其中的4个序列与所有的多倍体物种均杂交, 但是在二倍体水平上, 它们却只与和多倍体小麦B基因组紧密相关的物种杂交, 这说明这些序列是在二倍体物种分化以后产生的,然后垂直传递给多倍体; 其中的1个序列与所有的二倍体及多倍体物种均杂交, 暗示在多倍体形成后这些序列从A和D基因组中消除了. 用这一序列分别与一个人工合成的六倍体和四倍体小麦进行Southern杂交的结果表明, 序列消除是一个迅速的事件而且很可能与这些序列的甲基化状态有关. 认为这些低拷贝的染色体专化序列对于多倍体形成后部分同源染色体之间的进一步分化起着重要作用.     

马齿苋提取液对铜绿假单胞菌R质粒消除作用的研究

据报道,铜绿假单胞菌R质粒携带者达叨．24％［1］,这是该菌对多种抗生素多重耐药的重要物质基础、用人工方法使R质粒从宿主菌中消除,使其恢复对抗生素的敏感性,是临床治疗多重耐药菌感染的新思路。本实验用马齿觅提取液做消除剂,对铜绿假单胞菌P29株R质粒进行体内、体外消除试验,现报告如下。1材料与方法1．1材料1．1．1菌种铜绿假单胞菌P29株（本室保存）,从长春市烧伤医院患者分离并鉴定。1．1．2马齿觉提取液马齿觅购手吉林大药房,由我校药物研究室李平亚副教授鉴定。按文献［2］方法提取。1．1．3试剂GM、KM、SM、TC均为…     

体内遗传标记成团肠杆菌固氮质粒pEA9

用卡那霉素抗性（Kan^r)基因对成团肠杆菌固氮质粒pEA9进行活体遗传标记。将来自质粒pEA9的3.0kb片段(nif ENX)克隆到pBR322载体中,再将卡那霉素抗性(Kan^r)基因插入到3.0kb的片段中,构建成供体质粒pST5。将该质粒转化到含有待标记质粒pEA9的E.a.339菌株中,然后在AP培养基中消除供体质粒,筛选得到40个失去了pST5并保持卡那霉素抗性的克隆,分析表明它们不是质粒pEA9和pST5的共整合体,而是卡那霉素抗性基因通过两个质粒在nifENX区域内的DNA间的同源重组整合到了质粒pEA9上。     

转基因植物中标记基因的消除

随着转基因植物的商业化,植物遗传转化技术将为农业生产带来一场新的革命,新的基因转化程序要求转基因为单拷贝,不带有标记基因,并在不同的转化体中表达一致,稳定遗传,本文讨论了转基因植物中有关标记基因及其安全性和标记基因消除的方法等问题。     

消除共生质粒的费氏中华根瘤菌HND29SR在大豆根圈的定殖动态

比较研究了费氏中华根瘤菌（Sinorhizobium fredii)HN01(出发菌）、发光酶基因标记菌HNO1L（参照菌）、消除HN01共生质粒的菌株HND29SR在无菌砂培条件下的大豆根圈定殖动态。供试菌单独接种时：HN01、HN01L和HND29SR的定殖动态基本一致,其早期定殖密度下降较快,播种后第16天时HN01和HN01L分别达到较高的定殖水平6.49logcfu/g鲜根和6.78logcfu/g鲜根,然后维持相对稳定的定殖水平。但HND29SR的定殖密度持续下降到播种后第16天时才开始上升,至第35天时仍维持相对稳定的定殖密度6.94logcfu/g鲜根。等量混合接种时供试菌在根圈定殖群体中各自定殖密度在测定过程中基本相等。结果表明消除HN01的共生质粒对其在大豆根圈中定殖能力无显著影响。     

五倍子对铜绿假单胞菌R质粒消除作用的实验研究

探讨中药五倍子提取液对铜绿假单胞菌R质粒的消除作用。对老年呼吸系统感染患者痰中分离的铜绿假单胞菌R质粒进行了检测 ,并选用中药五倍子提取液对该质粒进行了体外体内消除试验。结果可见 ,体外药物作用 2 4 ,4 8,72hR质粒消除率分别为 0 ,10 .2 % ,3.4 % ,SDS对照组分别为 0 ,0 .8% ,1.6 %。体内药物作用 2 4 ,4 8,72h ,R质粒消除率分别为 0 ,2 % ,13.6 % ,对照组均为 0。可见 ,中药五倍子提取液对铜绿假单胞菌R质粒在体外、体内均具有消除作用 ,体内消除作用强于体外。     

质粒消除对冠菌素产生菌T1828生物学效应的影响

采用十二烷基硫酸钠（SDS）和提高生长温度结合法消除T1828菌株质粒后,筛选到无质粒突变株ZWL-15。以原始亲株T1828和无质粒突变株ZWL-15为出发菌株,考察了两者部分生物学特性。结果表明,菌株ZWL．15生长速率快于T1828,进入对数期和稳定期的时间分别提前1h和4h。在菌株ZWL-15发酵过程中添加0．01％的SDS有利于冠菌素的合成,最适发酵温度比T1828升高5℃,达到35℃,发酵周期提前4h,COR相对值是T1828的两倍左右。ZWL-15传代实验表明该突变株很稳定,且对氨苄青霉素敏感,氨苄青霉素基因初步定位于该菌属质粒上。     

植物转基因沉默与消除

植物基因工程研究是希望获得高稳定表达的转基因植株,而转基因沉默现象却限制了转基因植物的应用前景,基因沉默的机制是多方面的,包括转基因多拷贝之间的异位配对,转基因序列的甲基化,插入位点在染色体结构上的改变及转录后的衰退调控等,研究外源基因的失活原因及寻找相应的策略控制失活,对于植物基因工程的发展有着重要的意义。     

RNA干涉的研究进展

生物体内导入双链RNA后会引起体内同源基因特异性的沉默,这种现象称为RNA干涉,本主要介绍RNA干涉的研究历史,作用机制和应用等方面的情况。