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11.
分离了大麦条纹花叶病毒(BSMV)新疆株基因组的3个RNA组份。以RNA2为模板,3′端互补寡核苷酸为引物,合成了第一条cDNA链和第二条cDNA链,将ds-cDNA重组在pUC9质粒中,转化大肠杆菌细胞,获得含RNA3′端的克隆,并证明所选克隆的cDNA含有新疆株几近全长的RNA2组份。对于插入片段为3.3kbp的112号克隆进行了酶谱分析,得到了与国外典型株类似的结果;用双脱氧终止法分析了相当于RNA 2 5′端250bp的cDNA酶切片段,表明与国外典型株有十分相似的一级结构。 相似文献
12.
13.
N-ras is one of the transforming genes in human hepatic cancer cells.It has been found that N-ras was overexpressed at the mRNA and protein level in hepatoma cells.In order to explore the biological roles of N-ras in human hepatic carcinogenesis and the potential application in control of cancer cell growth,a preudotype retrovirus containing antisense sequence of human N-ras was constructed and packaged.A recombinant retrovirus vector containing antisense or sense sequences of N-ras cDNA was constructed by pZIP-NeoSV(X)1.The pseudotype virus was packaged ang rescued by transfection and infection in PA317 and ψ 2 helper cells.It has been demonstrated that the pseudotype retrovirus containing antisense N-ras sequence did inhibit the growth of human PLC/PRF/5 hepatoma cells accompanied with inhibition of p21 expression,while the retrovirus containing sense sequence had none.The pseudotype virus had no effect on human diploid fibroblasts. 相似文献
14.
三种鱼类生长激素cDNA基因的结构比较研究 总被引:3,自引:0,他引:3
从厦门海区选取3种生长速度不同的鱼类,真鲈、高体Shi、褐菖You,由它们的脑下垂体中分别提取出总RNA,用逆转录PCR方法(RT-PCR)扩增出生长激素cDNA,克隆到pBluescript载体上的EcoRI位点,并分别测定了这3种鱼的成熟生长激素cRNA序列。将由这3种序列推导出的氨基酸序列同已知的8种不同科鱼类的生长激素氨基酸序列进行比较,分析它们序列的同源性,结果表明它们间的同源性与这些鱼 相似文献
15.
用重组痘苗病毒表达pGHcDNA的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
构建了含有pGHcDNA的重组痘苗病毒,用ELISA证明该重组病毒在被感染的h143细胞中,可表达出猪生长激素并将之分泌到培养基中,表达量约为1.05μg/10^6细胞(24h),用定位免疫化学法进一步证明该病毒可感染小鼠并在小鼠体内表达pGHcDNA,同时还构建了含双拷贝pGHcDNA的重组痘苗病毒,并证明其pGH表达量比单拷贝重组病毒有明显提高,约为1.50μg/10^6细胞(24h) 相似文献
16.
人脑髓鞘碱性蛋白cDNA体外扩增、克隆和鉴定 总被引:3,自引:0,他引:3
采用聚合酶链反应(PCR)从人脑cDNA文库中扩增出600bp的髓鞘碱性蛋白(MBP)cDNA片段,与载体pGEM-3Zf(+)平端连接.重组质粒DNA转化宿主菌JM109,在含X-gal和IPTG的平板上直接筛选阳性克隆.限制性内切酶分析和成套引物扩增鉴定证明,该克隆含有7个外显子的21.5kD人脑MBP全长编码序列. 相似文献
17.
18.
19.
20.
用RT-PCR方法快速克隆了Wistar大鼠脑神经元特异性烯醇化酶(NSE)的cDNA,将此包括编码全长NSE433个氨基醚的DNA片段重组入pUC质粒,并用PCR方法测定了全部顺序,经重复实验,发现Wistar大鼠与Forss-Petter报导的SD大鼠NSE基因顺序,有两外单碱基的差别,其中一个涉及氨基酸的改变。同时还对RNA的提取及长片段DNA的RT-PCR扩增进行了方法学的探讨。 相似文献