杂交鲟海豚链球菌的分离、鉴定及药物敏感性

【目的】2012年7月,北京市怀柔区一家养殖场的杂交鲟爆发疾病,陆续死鱼。为确定病原,【方法】从具有典型症状的患病鱼的肝、肾和脾中分离获得3株分离菌,编号HRS12718L、HRS12718K和HRS12718S。采用形态特征、理化特性、16S rDNA和海豚链球菌特异性基因逐步鉴定病原菌的种类。取HRS12718K分离株进行人工感染实验,确认病原菌的致病性。开展药物敏感性实验筛选分离株的敏感药物。【结果】结果显示3株分离菌的形态特征和理化特性与从中国其它鱼类分离的海豚链球菌一致。采用16S rDNA序列构建的进化树与海豚链球菌聚为一支,与海豚链球菌的同源性在99.1%以上。HRS12718K分离株对杂交鲟的半致死量LD50为4.42×105CFU/mL,试验感染鱼出现与自然发病鱼相似临床症状。分离株对诺氟沙星、嗯诺沙星、硫酸新霉素、盐酸多西环素和盐酸四环素敏感,尤其对嗯诺沙星敏感。【结论】最终确认引起该养殖场杂交鲟发病的病原为海豚链球菌,建议使用嗯诺沙星进行治疗。     

红拟石首鱼海豚链球菌分离、鉴定及致病性研究

2001年9月-12月,浙江舟山部分网箱养殖红拟石首鱼发生了陆续死鱼,发病鱼表现为眼球突出、浑浊,失去方向性,皮肤溃疡等症状。从病鱼的肾脏和肝脏中分离到菌株SO-2和SO-3,对两分离株进行了致病性试验,发现两者对红拟石首鱼、罗非鱼及小白鼠均有致病力,SO-2和SO-3对红拟石首鱼、罗非鱼及小白鼠的LD50分别为4.8×108CFU/尾和1.9×107CFU/尾2、.8×108CFU/尾和8.3×107CFU/尾及9.6×106CFU/只和4.2×106CFU/只,试验感染鱼出现眼球突出、浑浊及失去方向性等与自然发病相似症状,确定该两株菌为致病菌。两分离株为革兰氏染色阳性,呈链状球菌,β溶血,10℃生长,45℃不生长;接触酶阴性,水解七叶灵、精氨酸;VP试验、脲酶和马脲酸试验阴性,发酵葡萄糖、水杨苷、蔗糖和淀粉,不发醇阿拉伯糖、菊糖、乳糖、蜜二糖、棉子糖和山梨醇。分离株对氨卞青霉素、万古霉素和先锋Ⅴ等高度敏感,对庆大霉素、复方新诺明、林可霉素、氟哌酸等不敏感。应用16SrRNA基因进行的菌株PCR鉴定,确定该两株菌为海豚链球菌。       

斑点叉尾鲖源海豚链球菌Srr蛋白海藻酸钠-壳聚糖口服疫苗的制备及其免疫效果研究

制备海藻酸钠-壳聚糖-海豚链球菌Srr蛋白微球疫苗, 并检测其对斑点叉尾鲙的免疫效果。采用乳化法利用海藻酸钠-壳聚糖包被Srr蛋白, 测定其包封率、载药率及包被蛋白的抗原性; 通过拌饲投喂免疫斑点叉尾鲙, 分为Srr组、Srr微球组、空微球组以及对照组, 间接ELISA法检测免疫后斑点叉尾鲙的血清抗体水平, 试剂盒检测多项血清非特异性指标; 于免疫后第4周利用海豚链球菌攻毒, 计算各组相对保护率, 并通过实时荧光定量PCR检测相关基因的表达量。结果显示, 通过乳化法制得形态为圆形或椭圆形、大小较为均一的微球疫苗, 粒径为(4.26±1.13) μm, 包封率为92.38%, 载药率为19.41%, Western-blot分析表明Srr蛋白微球具有较好的抗原性; Srr微球组的抗体效价峰值出现在第4周, 明显高于其他组, 血清总蛋白、T-SOD以及溶菌酶活力均显著或极显著高于其他实验组, 并获得60%的相对保护率。荧光定量分析结果显示, Srr微球组攻毒后24h和48h各免疫基因表达量均有所上调。Srr蛋白微球疫苗能够提高斑点叉尾鲙抵抗海豚链球菌的能力, 对海豚链球菌起到了一定的预防作用。     

线粒体DNA 序列分析在中国水域真海豚物种鉴定中的初步应用

真海豚包括长喙真海豚( Delphinus capensis) 和短喙真海豚( D. delphis) 2 种, 而中国水域的真海豚到底是哪一个种或是否同时有两个种的存在, 并不清楚。本研究测定了12 头中国水域真海豚mtDNA 控制区(control region) 366 bp 和细胞色素b (cytochrome b , cyt b) 基因336 bp 的序列, 并与已发表的其它真海豚的序列合并分析,初步鉴定中国水域真海豚的分类地位。结果表明, 中国水域的真海豚与东太平洋的长喙真海豚有相同的鉴别位点, 且两者之间的核苷酸歧异度(控制区: 1.93 ±0.22 % , cyt b 基因: 0.68 ±0.19 %) 显著低于与短喙真海豚之间的差异(控制区: 2.92 ±0.41 % , cyt b 基因: 0.95 ±0.27 %) 。通过MEGA (molecular evolutionary genetic analysis) 软件中的邻接法(neighbor joining) 进行的系统发生分析中, 中国水域的真海豚与长喙真海豚聚成一支, 有明显较近的亲缘关系。因此, 中国水域的真海豚在分类上应归属于长喙真海豚。     

条纹原海豚mtDNA控制区序列变异分析

条纹原海豚( Stenella coeruleualba )是一种暖水性的小型鲸类,在50°N～40°S之间有分布,在其分布区内的许多水域,均受到渔业误捕或直接捕捞的影响(Jefferson et al .,1993).但由于缺乏该物种全面而系统的种群生物学知识,IUCN红皮目录将其保护生物学地位定为"不清楚"(Hilton-Taylor,2000),需要进一步开展保护生物学研究.     

中国水域真海豚头骨特征的初步研究

测定了 8个真海豚 (Delphinussp .)头骨的 3 5个形态学指标 ,并与其它水域真海豚的相应数据比较。结果表明 ,在喙的相对长度和绝对长度、颅基长、喙端至外鼻孔和内鼻孔的长度、上齿列长以及下颌骨长等方面 ,中国水域的真海豚与东北太平洋水域的长喙真海豚 (D .capensis)非常接近。中国水域真海豚的喙长与颧宽之比为 1 68～ 2 0 3 ,平均 1 85± 0 1 0 ;喙长与喙宽之比为 3 5 6～ 4 0 3 ,平均 3 79± 0 1 7,也完全符合长喙真海豚的鉴别特征。因此 ,中国水域的真海豚在分类上应属于长喙真海豚。     

台湾海峡厦门-东山水域瓶鼻海豚的种群密度、分布和误捕研究

台湾海峡厦门东山水域瓶鼻海豚 ( Tursiopsaduncus)的种群密度约为 0 .0 4 36± 0 .0 2 86头 /km2 ,该水域南部瓶鼻海豚的发现率高于中部和北部。问卷调查和随船出海调查表明围网作业发现和误捕小型鲸类的频率要高于拖网 ,同时拖网又高于刺网。调查期间从东山港记录到的误捕致死的 2 0头小型鲸类中 ,6头 (占 30 % )为瓶鼻海豚 ,分别由拖网和围网捕获。需要开展对当地渔民的宣传教育和加强台湾海峡瓶鼻海豚等小型鲸类的种群生物学和保护生物学的研究。     

100种中草药对无乳链球菌和海豚链球菌体外抑杀研究

无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)和海豚链球菌(Streptococcus iniae)给罗非鱼(Oreochromis sp.)养殖带来了严重的经济损失, 而抗生素等药物的使用会造成细菌的耐药性和环境污染, 因此, 研究了100种中草药对罗非鱼链球菌体外抑杀效果, 以筛选出替代抗生素的绿色中草药。其中16种中草药具有较好的抑菌作用, 但将其pH 值调至7.0±0.04后, 大部分中草药的抑菌效果会显著下降(P<0.01), 只有桑白皮(Morus alba)、藿香(Agastache rugosa)、豨莶草(Siegesbeckia orientalis)、槐角(Sophora japonica)的抑菌效果比较明显。将pH 值调至7.0±0.04后, 采用二倍梯度稀释法测定这4种中草药的最低抑菌浓度(Minimal Inhibitory Concentration, MIC)和最小杀菌浓度(Minimal Bactericidal Concentration, MBC), 结果显示, 桑白皮抑杀无乳链球菌的效果最好, MIC和MBC均为0.3906 mg·mL-1; 豨莶草抑杀无乳链球菌的效果次之, MIC为0.3906 mg·mL-1, MBC为0.7813 mg·mL-1; 藿香、豨莶草、槐角抑杀海豚链球菌的效果最好, MIC和MBC均为0.3906 mg·mL-1。     

海豚独行侠“56号”

<正>海豚喜欢群居。大家伙儿凑在一起聊天、觅食多热闹。但凡事总有个例外,有的海豚偏不这么想。它们喜欢过独来独往、行踪不定的生活,就像神秘的侠客。56号就是其中最为知名的一位。     

血色海豚湾

电影《海豚湾》是一部生态环保题材的记录片,影片为我们揭示了一些不为人知的真相。在这片风光旖旎的海湾背后笼罩着血腥的杀戮,这里不但是海豚的地狱之门,同时也是关注保护海洋鲸类人们的梦魇。这不是一个轻松的故事,因为,每年的9月直到次年的3月,日本太地町的这个小小海湾里,总量有超过2.3万条海豚被宰杀。