AFLP─一种DNA分子标记新技术

AFLP──ANovelTechniqueforDNAMolecularMarkerWengYuejin(InstituteofCropGermplasmResourees,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Beijing100081)公司科学家ZabeauMarc和VosPieter发明创建的一种DNA分子标记新技术,它不仅具备了其它DNA分子标记技术所具有的特点,多态性丰富,共显性表达,不受环境影响,无复等位效应,而且还具有带组丰富,用样量少,灵敏度高,快速高效等特殊优点．一个0．5mgDNA样品,可做4000个反应,获得8万个标记,650万条带纹。美国加利福尼亚大学MackillDavid[7]利用14份水稻为材料,比较AF…     

分子生物学研究的好材料──大肠杆菌（下）（分裂繁殖和染色体复制）

由于大肠杆菌生长迅速,操作方便,使之成为分子生物学研究的好材料。大肠杆菌的分裂、复制、基因表达及调控、遗传重组等已研究得十分清楚,并已成为原核生物的模式。本文简要介绍大肠杆菌的分裂繁殖,染色体ＤＮＡ的双向复制及染色体复制与细胞分裂的关系。     

稻瘟病菌重复顺序PoR6和稻瘟病菌的分型

POR6是一具有高度多态性的稻瘟病菌(Pyricularia oryzae)重复顺序。利用脉冲电泳技术和Southern分析,表明它是非均匀地散布于基因组中的。经测定POR6的拷贝数约为30—40,序列测定未发现在内部有更小的重复单位。用POR6作探针对44株稻瘟病菌进行DNA指纹分析,分析的中国北方地区的22个菌株可根据相似率归并成8个谱系。对一些转管培养中致病型发生变化的菌株用POR6进行指纹分析,发现这些菌株在转管过程中基因组DNA是有变化的。     

大鼠卵巢促黄体激素/人绒毛膜促性腺激素受体cDNA的克隆和在昆虫细胞中的高效表达

促黄体激素/人绒毛膜促性腺激素受体(LH/hCG receptor)是一种与G-蛋白偶联的糖蛋白。本文报道了从大鼠卵巢cDNA库中筛选LH/hCG受体cDNA及其在昆虫细胞中的高效表达。LH/hCG受体cDNA全长2403bp,编码受体信号肽和成熟受体674个氨基酸。用多角体病毒表达载体pVL1393,LH/hCG受体cDNA在昆虫细胞中得到高效表达。在非还原和还原条件下的SDS-PAGE分析显示,用亲和层析分离纯化的受体表观分子量分别为120Kd和92Kd。经配基结合和Scatchard Plot分析表明,其与hCG反应的Kd为8.4×10~(-9)mol/L,与CHO细胞表达产物相似。     

小鼠SFA DNA片段的克隆

本工作将富集小鼠着丝粒DNA克隆于载体EMBL3,得到约2000个克隆,建立了着丝粒基因文库。从中随机挑取20个克隆,鉴定其克隆片段平均分子量大小约为14kb。     

应用流式细胞仪研究抗IL-8单抗对IL-8激活人颗粒细胞活力的中和作用(英文)

以IL-8免疫的BALB/C小鼠脾细胞与Sp2/0或653小鼠骨髓瘤细胞融合构建了淋巴细胞杂交瘤克隆I8-S2和I8-63。ELISA叠加试验(ELISA Additivity Test)表明这两杂交瘤克隆分泌的单抗分别识别IL-8分子的不同表位。IL-8能激活人颗粒细胞,引起细胞内Ca~(2 )浓度([Ca~(2 )]_i)上升。通过流式细胞仪分析[Ca~(2 )]_i的变化,发现两个克隆单抗对IL8激活细胞的活力具有不同的中和作用。克隆I8-S2具有很强的中和作用,而克隆18-63则不然。上述结果提示IL-8的激活细胞活力局限于该分子的某表位。     

豌豆外源凝集素基因的克隆及序列分析

从豌豆幼叶分离基因组ＤＮＡ,设计特异引物,用聚合酶链式反应方法扩增出豌豆外源凝集素基因并克隆到Ｅ．ｃｏｌｉ质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（＋）的ＥｃｏＲＶ位点。进一步亚克隆至ｐＵＣ１９。序列分析表明,克隆到的片段大小为８３２ｂｐ,包含了豌豆外源凝集素基因完整的编码序列。该基因无内含子,同报道的已知序列相比,其核苷酸序列及推测的氨基酸序列的同源率分别为９９．６％和９８．９％。     

钙调素对细胞周期的调节

RC3细胞是一种用真核表达载体1~(CaM)转染NIH 3T3细胞建成的可调钙凋素(Calmodulin,CaM)高表达细胞模型。通过分子杂交及蛋白免疫印迹方法证实在地塞米松(Dexamethasome,DXM)作用下,RC3细胞可高表达CaM。CaM的过表达使G_1期细胞减少,S期细胞增加;CaM拮抗剂三氟拉嗪(trifluoperazine,TFP)则使G_1期细胞增加,S期细胞减少。高表达CaM使细胞分裂指数提高,G_2期细胞减少,有丝分裂前期细胞增加,M中期细胞比例下降。而TFP处理则使分裂指数下降,G_2期细胞增加,M前期细胞减少,M中期细胞增加。实验结果表明CaM在G_1/S、G_2/M和M中期/M后期3个位点上对细胞周期进行调控;通过加速G_1至S期,G_2至M期和M中期至M后期的进程,使细胞倍增时间缩短,促进细胞增殖。本工作表明,RC3细胞作为CaM表达可调细胞模型,是研究细胞周期调控的有力工具。     

DNA免疫及其在微生物学中的应用

ＤＮＡ免疫是直接将目的基因注入机体以表达目的抗原,并诱生免疫应答的一项新技术。本文对ＤＮＡ免疫技术的起始、目前的应用及发展前景作了综述及评价。     

博安霉素与DNA相互作用的分子机理研究

通过光谱分析,粘度测定及＾１ＨＮＭＲ研究证实,博安霉素（ＢｌｅｏｍｙｃｉｎＡ６,ＢＬＭＡ６）是通过双噻唑其嵌插入碱基对之间与ＤＮＡ结合,同时测定了ＢＬＭＡ６与ＤＮＡ的结合常数,结合位点数并与博霉素Ａ２（ＢＬＭＡ２）,Ａ５（ＢＬＭＡ５）进行了比较,证实了末端胺基对ＢＬＭＡ６与ＤＮＡ结合的贡献,琼脂糖凝胶电泳对ＢＬＭＡ６及其Ｃｕ（Ⅱ）,Ｆｅ（Ⅱ）络合物断裂ＤＮＡ的研究表明,在ＤＮＡ断裂中某种氧自由基的