固有免疫与HIV-1相互作用的研究进展

世界卫生组织最新公布的AIDS疫情报告首次显示,新发感染HIV-1的人数出现下降趋势,然而在部分地区与特定的高危人群(如亚洲的男男性接触人群)AIDS疫情依然居高不下,甚至有愈演愈烈的趋势,全球公共卫生仍然面临巨大挑战,亟待研发出有效的生物预防策略[1]。目前,HIV-1疫苗的研     

核心蛋白聚糖基因过表达对5/6肾切除大鼠肾间质纤维化的影响和机制

目的探讨腺相关病毒介导的核心蛋白聚糖(decorin,DCN)基因过表达对5/6肾切除大鼠肾间质纤维化的影响和机制。方法将DCN基因和绿色荧光蛋白基因(GFP)基因克隆入重组腺相关病毒(rAAV)载体中,在HEK293细胞中包装成rAAV-GFP和rAAV-DCN病毒。健康雄性wistar大鼠32只,随机分为假手术组(sham,n=8),手术组(operation,n=8),手术+rAAV-GFP病毒尾静脉注射组(GFP组),手术+rAAV-DCN基因尾静脉注射组(DCN组)。携带相应基因的病毒注射后3周行5/6肾切除术构建肾间质纤维化模型。术后第12周处死动物,肾组织切片行HE染色,天狼星红(Sirius red)染色和Masson染色。免疫组化方法检测TGFβ1和α-SMA。Western Blot检测肾组织TGFβ1、α-SMA、E-cadherin、p-smad2、smad2、samd7和p-P38 MAPK表达水平。结果DCN基因过表达显著抑制了5/6肾切除术所致血压升高和肾功能下降(P<0.05),明显减轻了5/6肾切除大鼠肾小球萎缩与代偿性肥大,肾小管扩张及管型形成。Sirius red和Masson染色表明DCN过表达明显抑制了5/6肾切除大鼠肾脏胶原沉积(P<0.05)。免疫组化结果显示DCN过表达明显减少了肾组织TGFβ1和α-SMA的表达(P<0.05)。Western blot结果显示DCN过表达明显下调了TGFβ1、α-SMA、p-smad2、p-P38 MAPK的表达,显著上调了E-cadherin and samd7的表达(P<0.05)。结论腺相关病毒介导的DCN基因过表达显著抑制5/6肾切除大鼠肾间质纤维化而保护肾功能,其机制与下调TGFβ1、α-SMA、p-smad2、p-P38 MAPK表达和上调E-cadherin和samd7表达有关。     

锰作用下PC12细胞的氧化应激机制研究

目的:以鼠嗜铬神经瘤细胞(PC12)为模型,筛选锰对神经细胞增殖抑制作用的时间及剂量,观察锰作用下PC12细胞的氧化应激反应与细胞形态学、生化指标改变和丝裂原活化蛋白激酶pp38(p38MAPKs)的活化表达。方法:用200,400,600,800μmol/LMnCl2的培养液,分别作用对数生长期PC12细胞1,2,3,4d后,用MTT筛选锰的细胞毒性剂量;测定200-600μmol/L MnCl2作用4d后,PC12细胞还原型谷胱甘肽和丙二醛含量;透射电镜观察细胞形态学变化;琼脂糖凝胶电泳检测MnCl2对PC12细胞基因组DNA的影响。western-blot法检测p-p38。结果:MTT实验显示200~800μmol/LMnCl2作用1,2,3,4d对PC12有显著的抑制作用,呈剂量和时间依赖趋势,600μmol/LMnCl2作用4d对PC12的抑制率可达50%以上。200-600μmol/LMnCl2作用于细胞4d后,随着浓度的升高,还原型GSH逐渐降低,MDA的含量逐渐升高;600μmol/LMnCl2作用4d电镜可见细胞凋亡,同样条件下细胞DNA碎片化。Western-blot实验显示600μmol/LMnCl2作用1,2,3,4dp-p38逐渐升高,3d时较对照组增加6.6倍(n=3,p<0.05),200,400,600μmol/L MnCl2作用4d时,磷酸化蛋白38(p-p38)也逐渐升高,400μmol/L MnCl2作用4d时较对照组升高了4.7倍(n=3,p<0.05)。结论:PC12细胞在锰作用下发生氧化应激反应,上调p-p38,诱导细胞凋亡,细胞增殖抑制。     

维吾尔族妇女妊娠期并发DVT患者外周血中vWF、TXB2、GMP-140表达的研究及意义

目的:探讨血管内皮损伤及血小板激活因子在维吾尔族妊娠期妇女合并DVT患者中的表达。方法:对入选对象血液中的血管性假血友病因子(vWF)、血栓烷B2(TXB2)、血小板a颗粒膜蛋白(GMP-140)进行测定和比较。结果:妊娠合并DVT组、正常妊娠组、正常非孕组各组间三种因子的表达均存在差异,并具有统计学意义(P<0.05)。结论:①妊娠合并DVT的维吾尔族患者存在血管内皮的损伤;②血小板的活化和妊娠期凝血状态的改变对其深静脉血栓形成有着一定的关系;③为临床工作中维吾尔族妊娠期妇女DVT的预防和治疗提供了理论依据。     

CREB 和NF-κB在p38MAPK所致脊髓星形胶质细胞活化中的作用

目的:探讨CREB和NF-κB在p38MAPK所致脊髓星形胶质细胞活化中的作用,明确脊髓星形胶质细胞活化中p38MAPK细胞信号转导途径的作用。方法:分离培养SPF大鼠脊髓星形胶质细胞,设正常组、SP刺激组(SP组,10-7mol/L)、SP刺激+SB203580(10μmol/L)阻断p38MAPK组(SP+SB组)、SP刺激+PD98059(10μmol/L)阻断CREB组(SP+PD组)、SP刺激+SN50(10μmol/L)阻断NF-κB(SP+SN组)。WB法、免疫荧光法、ELISA法检测12 h和24 h时p-p38、p-CREB、NF-κBp65水平及GFAP、TNF-、IL-1β水平变化。结果:SP组脊髓星形胶质细胞p-p38、p-CREB、NF-κBp65显著升高,GFAP水平显著增高,同时TNF-和IL-1β水平显著增高。与SP组比较,用SB203580阻断p38MAPK通路后,SP+SB组p-p38、p-CREB、NF-κBp65显著降低,GFAP、TNF-和IL-1β水平显著降低。用PD98059阻断CREB通路后,SP+PD组p-p38、NF-κBp65无显著变化,p-CREB显著降...     

Non-neuronal muscarinic receptor activation prevents apoptosis of endothelial cells induced by homocysteine

Objective Endothelial apoptosis plays an important role in the initiation of atherosclerosis. It would be useful to clarify whether activation of non-neuronal muscarinic receptor （NNMR） could prevent endothelial apoptosis and atherosclerosis. We investigated the effects of NNMR activation on regulating rat aortic endothelial cells （RAECs） apoptosis induced by homocysteine, an independent risk factor of atherosclerosis, and further studied its molecular mechanism. Methods RAECs were incubated using homocysteine at the concentration of 2.7 mmol/L for 36 h. RAECs were also pre-treated with carbachol or arecoline to examine their effects. RT-PCR was used to assess changes in the gene expression related to cell apoptosis. Results Incubation of RAECs with homocysteine at the concentration of 2.7 mmol/L resulted in morphologic changes, such as cellular shrinkage, membrane blebbing, chromatin condensation and margination. These could be attenuated by pretreatment with carbachol and arecoline at the concentration of 10 μmol/L for 12 h. Homocysteine induced apoptosis in RAECs and the molecular mechanisms were associated with the regulation of fas, fas-L and caspase-8 in the death receptor pathway, bcl-2, bcl-xL and bax in the mitochondrial pathway, caspase-22 in the endoplasmic reticulum pathway and caspase-3, caspase-6 and p53 as downstream effectors. Carbachol and arecoline attenuated the effects of homocysteine on genes in the death receptor pathway, in the mitochondrial pathway and in the downstream pathway. Atropine could reverse all of the effects of arecoline. Conclusion Activation of NNMR by carbacol and arecoline inhibits homocysteine-induced endothelial cell apoptosis mainly through regulation of death receptor pathway, mitochondrial pathway and downstream effectors.     

甘珀酸对大鼠大脑中动脉缺血再灌注后星形胶质细胞增殖及活化的影响

目的探讨缝隙连接阻断剂甘珀酸对大鼠大脑中动脉(Middle Cerebral Artery,MCA)缺血再灌注模型半暗带区星形胶质细胞增殖及活化的影响。方法成年雄性SD大鼠80只,随机分为生理盐水组(n=35)、CBX干预组(n=35)和假手术组(n=10)。CBX干预组术前1h右侧侧脑室注射CBX,生理盐水组右侧侧脑室注射生理盐水,建立标准大脑中动脉梗死模型,缺血1h后再灌注6h、1d、3d、7d,免疫荧光及免疫印迹的方法观察GFAP,Ki67,PCNA的表达情况。结果与对照组比较,CBX干预组大鼠术后半暗带区GFAP的表达量减少,Ki67与GFAP双阳性细胞减少(P0.05),PCNA的表达量没有明显的变化。结论甘珀酸可以抑制缺血引起的星形胶质细胞的活化增殖。     

芸苔属脱外壁花粉作为研究花粉萌发的新实验系统

脱外壁花粉的分离与人工萌发已在芸苔属(Brassica L.)中取得成功。由于其缺乏外壁与萌发沟这一特点,脱外壁花粉是研究花粉萌发的有用的实验系统。作者重点研究了脱外壁花粉分离与萌发过程中有关极性形成、萌发位点预定及新壁的合成等问题。结果表明在外壁脱离之前花粉已经活化并预先建立了极性;脱外壁后的萌发位点仍位于原萌发沟处;在萌发位点处合成的新壁可能起限定花粉管直径的作用。由此推论,脱外壁花粉可在花粉生物学研究中广泛加以应用。     

白藜芦醇甙对糖尿病小鼠心肌损伤的保护作用及机制研究

目的:探讨白藜芦醇甙对小鼠小鼠心肌损伤的影响及其可能的调控机制。方法:采用腹腔注射链脲霉素的方法建立1型糖尿病小鼠模型模型,随机将雄性C57/BL6J的正常小鼠和糖尿病小鼠分为3组(每组18只):对照组、糖尿病组、糖尿病+白藜芦醇甙组。其中糖尿病+白藜芦醇甙组给予白藜芦醇甙7.5 mg/kg/d腹腔注射治疗,对照组和糖尿病组给予同体积盐水腹腔注射。药物治疗12周后,小动物心脏超声检测小鼠的心功能;天狼星红染色观察胶原变化并进一步计算胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF);柠檬酸合酶检测试剂盒和ATP生物荧光试剂盒分别检测检测心肌柠檬酸合酶活性和ATP含量;Western blot检测Sirt3和p-AMPK的蛋白表达情况。结果:与对照组相比,糖尿病组LVEDD和LVESD均明显增加(4.823±0.103 mm和3.701±0.121 mm,P0.05),LVEF和LVFS值均明显降低(37.121±4.298%和21.023±2.187%,P0.05),CVF显著增高(20.102±1.155%,P0.05),心肌柠檬酸合酶活性和ATP含量显著降低(5.267±0.202 nmol/g和105±7.638 U/g,P0.05),Sirt3和p-AMPK蛋白表达显著降低(P0.05);与糖尿病组相比,糖尿病+白藜芦醇甙组LVEDD和LVESD均显著降低(4.354±0.113 mm和3.056±0.130 mm,P0.05),LVFS和LVEF值均显著增加(58.435±8.143%和29.071±2.232%,P0.05),CVF显著降低(10.343±0.882%,P0.05),心肌柠檬酸合酶活性和ATP含量显著增加(6.233±0.176 nmol/g和132.7±5.774 U/g,P0.05),Sirt3和p-AMPK蛋白表达显著增加(P0.05)。结论:白藜芦醇甙可改善糖尿病小鼠心肌损伤,其机制可能与白藜芦醇甙激活Sirt3/AMPK信号通路有关。     

p38 MAPKs在细胞周期调控中的作用

p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)作为MAPK家族的成员,传统认为它主要参与调控细胞应激反应和免疫反应。近年来发现它还参与调控细胞的增殖、凋亡和分化。在不同应激刺激下,p38 MAPKs通过多条信号转导通路作用于细胞周期的各个检验点,抑制细胞增殖,阻滞细胞于不同周期。