儿茶素类化合物的抗结核活性研究进展

近年来,耐多药结核病(multidrug-resistant tuberculosis,MDR-TB)的出现及人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)与结核分枝杆菌合并感染日益增多,使结核病的防治面临更加严峻的挑战,人们急需开发新型抗结核药物及天然低毒的辅助治疗药物。绿茶中的儿茶素类化合物具有多种生物活性,对多种疾病有一定的辅助疗效。多项研究显示,儿茶素类化合物也具有抗结核活性,其机制包括抑制二氢叶酸还原酶活性、影响分枝菌酸及细胞壁的合成、下调富含色氨酸天冬氨酸的膜蛋白(tryptophan-aspartate containing coat protein,TACO)基因表达以抑制结核分枝杆菌的胞内寄生,降低氧化应激水平,下调结核分枝杆菌85B蛋白和宿主肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)表达,从而改善炎症水平。有研究显示,喝绿茶可降低结核分枝杆菌感染风险,儿茶素类化合物可辅助治疗结核病并与抗结核药物有协同治疗作用,但目前对其作用机制的研究还不够深入,需进一步探讨。     

转录激活因子5参与表没食子儿茶素没食子酸酯诱导的胰腺癌SW1990细胞凋亡

目的:研究转录激活因子5(ATF5)是否参与中国绿茶有效成分——表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)诱导的人胰腺癌SW1990细胞凋亡。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的EGCG作用SW1990细胞不同时间后细胞的增殖情况;以100 mg/L EGCG作用SW1990细胞不同时间,观察细胞的形态学变化,并采用SR-VAD-FMK/7-AAD双染法,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;采用RT-PCR检测100 mg/L EGCG作用不同时间后ATF5mRNA的表达变化。结果:EGCG可抑制胰腺癌SW1990细胞增殖,引起细胞皱缩,诱导细胞凋亡。随着EGCG作用时间的延长,细胞凋亡率显著提高(P<0.05),ATF5 mRNA的表达明显增强(P<0.05)。结论:胰腺癌SW1990细胞中存在ATF5的表达,在EGCG诱导的细胞凋亡过程中,ATF5表达量上升,提示ATF5参与EGCG诱导的细胞凋亡。     

EGCG对LPS刺激人肺腺癌A549细胞凋亡及CUGBP1蛋白表达的影响

目的：研究表没食子儿茶素-3-没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate,EGCG）对炎性刺激的人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响及与CUGBP1表达的关系。方法：MTT法检测EGCG和LPS刺激A549细胞增殖活性的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡;免疫细胞化学检测EGCG对LPS刺激人肺腺癌A549细胞内CUGBP1蛋白的表达。结果：与对照组相比,LPS体外显著促进A549细胞增殖,其胞核胞质内CUGBP1表达明显增强（P〈0.01）。加入EGCG可拮抗LPS促A549细胞增殖的作用,促进其凋亡,明显抑制LPS刺激的A549细胞内CUGBP1的表达（P〈0.01）。CUGBP1蛋白定量分析可知EGCG和LPS共同孵育A549细胞4h、24h时,细胞中的CUGBP1蛋白表达量较单纯LPS作用时降低。但EGCG和LPS共同孵育A549细胞24h,A549细胞中胞核CUGBP1蛋白表达量（1210.565±3.46）较4h时胞核CUGBP1蛋白表达量（67.344±3.68）高,差异有统计学意义（t=927.164,P〈0.001）。结论：EGCG可能通过干扰CUGBP1基因的表达抑制炎症刺激人肺腺癌细胞A549的增殖,促进其凋亡。     

花叶中的新没食子酰黄酮甙和没食子丹宁

从花叶(Loropetalum chinense Oliv.)的70％Me_2CO提取物中经Toyopearl HW-40凝胶反复柱层析,得到3种没食子酰黄酮甙(LC-3,LC-13和LC-16),3种没食子丹宁(LC-20,LC-21和LC-22)和一种黄酮甙元(LC-14)。经化学和波谱分析,确定它们分别为黄芪甙-2’’-0-没食子酸酯(astragalin-2’’-0-gallate,LC-3,1)、黄芪甙-6’’-0-没食子酸酯(astragalin-6’’-0-gallate,LC-13,2)、黄芪甙-2’’,6’’-二-0-没食子酸酯(astragalin-2’’,6’’-di-0-gallate,LC-16,3)、八没食子酰葡萄糖(octagalloyl-glucose,8GG,LC-20)、六没食子酰葡萄糖(hexagalloyl-glucose,6GG,LC-21)、七没食子酰葡萄糖(heptagalloyl-glucose,7GG,LC-22)和木犀草素(luteolin,LC-14)。其中LC-16为一同时具有可水解丹宁和黄酮甙双重性质的新化合物,命名为花丁素(Loropetalin D,3)。上述成分均为首次从该植物中得到。     

抑制水稻细菌性条斑病菌的没食子酸分离及其对水稻细菌性条斑病的防治作用

通过液—液萃取、硅胶和凝胶柱层析法,从佛甲草(Sedum lineare)分离出一种可以抑制水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,Xoc)生长的单体化合物,经质谱分析,确定该化合物为没食子酸(gallic acid,GA)。在30 mg·m L-1浓度下,GA能抑制一些植物病原细菌如桃细菌性穿孔病菌(X.campestris pv.pruni)、水稻细菌性条斑病菌(X.oryzae pv.oryzicola)、水稻白叶枯病菌(X.oryzae pv.oryzae)、柑橘溃疡病菌(X.axonopodis pv.citri)、大豆细菌性斑点病菌(Pseudomonas syringae pv.glycinea)、番茄细菌性斑点病菌(P.syringae pv.tomato)和胡萝卜软腐果胶杆菌(Pectobacterium carotovora subsp.carotovora)的生长;GA还对11种植物病原真菌如烟草疫霉(Phytophthora nicotianae)、指状青霉(Penicillium digitatum)、滇刺枣褐腐病菌(Streptobotrys streptothrix)、瓜果腐霉(Pythium aphanidermatum)、芒果拟盘多毛孢(Pestalotiopsis mangiferae)、新月弯孢霉(Curvularia lunata)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、(Fusarium oxysporum f.sp.niverum)、西瓜专化型尖孢镰刀菌(F.oxysporum f.sp.nicotianae)、番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)和齐整小核菌(Sclerotium rolfsii)的生长具有一定的抑制作用。在300 mg·m L-1浓度下,GA对水稻细菌性条斑病的田间防治效果达到64.62%。该研究结果表明没食子酸具有开发成为一种防治水稻细菌性条斑病的杀菌剂的潜力。     

表没食子儿茶素-3-没食子酸酯抑制TNF-α和IL-β在小鼠皮肤烫伤修复期间的表达

肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)在创伤修复中起着至关重要的作用.本研究利用小鼠皮肤深II度烫伤模型,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测烫伤部位组织Tnf-αmRNA和Il-1βmRNA的表达水平以及TNF-α和IL-1β的含量,探讨表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)对小鼠皮肤烫伤修复期间TNF-α和IL-1β表达的影响.结果显示,用0.2 mg/g EGCG膏剂涂敷烫伤皮肤,处理12 h可致组织Tnf-αmRNA表达水平和TNF-α含量下降,处理24 h可致组织Il-1βmRNA表达水平和IL-1β含量下降.上述结果提示,0.2 mg/g EGCG处理能抑制烫伤组织TNF-α和IL-1β的表达,减弱创伤组织的炎症反应,有助于创伤组织的修复.     

保健食品中番茄红素测定方法的建立

本实验对保健品中番茄红素的提取净化及液相色谱检测方法进行研究。样品用没食子酸叔丁酯（TBG）-二氯甲烷溶液溶解,超声波辅助提取,用PTFE滤膜过滤。采用C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分离,以乙腈和甲醇溶液洗脱测定,外标法定量。番茄红素在5.00-200 μg/mL浓度范围的相关系数为0.993,检出限为0.5μg/mL,方法的回收率为81%-96%,相对标准偏差为3.1%-5.9%。该方法简便、准确,适用于保健品中番茄红素的检测。     

吸附柱层析法制备纯化茶多酚中EGCG单体

以茶多酚为原料,采用吸附树脂柱层析法制备表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)单体。考察树脂对儿茶素的吸附容量、吸附率、解吸率及吸附选择因数,选择LX-8树脂初步纯化后采用HP-20树脂二次纯化。经LX-8两步柱层析,1.5 BV/h流速洗脱,25%乙醇洗脱组分上柱后经40%乙醇洗脱5 BV可得到纯度为73.06%的EGCG产品。以20 mg/mL浓度的LX-8柱40%乙醇产品上HP-20柱,1.5 BV/h洗脱,5%乙醇洗3 BV,15%乙醇洗6 BV,80%乙醇洗3 BV后,可制得纯度为93.16%,总收率为49.50%的EGCG产品。     

白蔹单宁化学成分的研究

从白蔹Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ ｊａｐｏｎｉｃａ（Ｔｈｕｎｍｂ．）Ｍａｋｉｎｏ的乙酸乙酯提取物中分离出５个单宁化合物。经光谱分析和化学方法鉴定,它们为没食子酸（ｇａｌｌｉｃ ａｃｉｄ,１）,１,２,６－三氧－没食子酰基－β－Ｄ－吡喃葡萄糖（１,２,６－ｔｒｉ－Ｏ－ｇａｌｌｏｙ１－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ,２）,１,２,３,６－四氧－没食子酰基－β－Ｄ－吡喃葡萄糖（１,２,４,６－ｔｅｔｒ     

烟梗中鞣质的含量测定

目的:建立测定烟梗中鞣质含量的方法。方法:样品经浸泡超声提取后,采用干酪素法测定烟梗中鞣质的含量。结果:通过方法学验证表明该方法测定烟梗中的鞣质含量具有较好的稳定性,没食子酸在25.65μg/ml~256.5μg/ml浓度范围内,浓度与吸光度之间呈良好的线性关系。加样回收率达到98.65%,结论:该方法能快速、简便、准确、稳定地测定烟梗中鞣质的含量,可用于烟梗质量的监控。