帕金森病和正常人外周血单个核细胞的蛋白质组差异分析

目的:通过研究帕金森病和正常外周血单个核细胞(PBMC)的蛋白质组差异,初步探讨外周免疫系统与帕金森病的病理联系.方法:用固相pH梯度双向凝胶电泳分离人帕金森病和正常单个核细胞总蛋白质,考马斯亮蓝染色,PDQuest 2-DE软件分析,对部分差异蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定其胶内酶解后的肽质指纹图谱,用Mascot查询系统查询SWISS-PROT数据库.结果:获得了分辨率和重复性均较好的双向电泳考染图谱,对其中的21个差异蛋白质点分别进行肽质指纹分析,经数据库查询,初步鉴定为一些与蛋白降解、抗氧化应激、信号转导、细胞骨架、细胞周期调控等有关的蛋白质.结论:建立了帕金森病PBMC的双向凝胶电泳图谱,提示帕金森病和正常的PBMC的蛋白质表达具有差异.     

中药指纹图谱的研究进展

中药指纹图谱已日渐应用于中药鉴定与质量评价。本文综述了近来的薄层色谱指纹图谱,高效液相指纹图谱,核磁共振指纹图谱,质谱指纹图谱,X-射线衍射指纹图谱,色谱联用指纹图谱及DNA指纹图谱等的研究进展。     

人肺腺癌细胞A—549和正常细胞HBE的蛋白质组差异分析

为了研究人肺腺癌细胞A 5 49和正常细胞HBE的蛋白质组差异 ,用固相pH梯度双向凝胶电泳分离人肺腺癌细胞系A 5 49和正常细胞HBE的总蛋白质 ,银染显色 ,PDQuest 2 DE软件分析 ,对部分差异蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)测定其胶内酶解后的肽质指纹图谱 ,用PeptIdent软件查询SWISS PROT数据库。结果获得了分辨率和重复性均较好的双向电泳银染图谱 ,图象分析探测到A 5 492 DE图谱的平均蛋白质点数为 (890± 38)个 ,HBE的平均蛋白质点数为 (75 7± 2 7)个 ,不同胶间蛋白质点的位置偏差在IEF方向为 (2 .85± 0 .48)mm ,在SDS PAGE方向为 (2 .6 9± 0 .37)mm。差异表达分析发现A 5 49和HBE图谱有5 35个蛋白质点相互匹配 ,其中A 5 49有 35 5个未被匹配 ,HBE中有 2 2 2个未被匹配 ;对A 5 49和HBE中的 18个差异蛋白质点分别进行肽质指纹分析 ,经数据库查询 ,初步鉴定为一些与物质代谢、细胞因子、信号转导有关的蛋白质。提示人肺腺癌细胞A 5 49和正常细胞HBE的蛋白质组具有差异 ,这种蛋白质组的差异分析有助于进一步研究肺腺癌的相关蛋白质及分子标记物     

中国黑木耳主要栽培菌株ISSR指纹分析及SCAR标记

采用ISSR标记技术对来自全国的黑木耳34个主要栽培菌株进行DNA指纹分析,初步构建其标准化DNA 指纹图谱;在ISSR指纹分析基础上进行聚类分析,并将黑木耳两个栽培菌株173和186中扩增获得的ISSR特异性DNA带转化为可以直接用于菌株快速鉴定的SCAR标记。研究表明,我国黑木耳栽培菌株遗传背景差异不大,存在同物异名现象,而采用ISSR指纹及其SCAR标记鉴定黑木耳栽培菌株具有重要意义。     

高效液相色谱建立掌叶大黄指纹图谱

采用高效液相色谱法建立不同来源掌叶大黄的指纹图谱,为其质量控制提供依据。本实验方法采用Nucleodur C18（4．6mm×250mm,5μm）色谱柱,流动相以甲醇：0．5％磷酸水溶液（1：9,V／V）作为A相,乙腈作为B相进行梯度洗脱（流速0．8mL／min,检测波长280nm）。通过聚类分析和相似度分析处理,14个不同来源的掌叶大黄样品被初步分为两大类：正品掌叶大黄和非正品。实验方法简便、可靠,可成为掌叶大黄质量评价的有效手段。     

双向凝胶电泳-飞行时间质谱技术鉴定小鼠胚泡黏附时子宫内膜nm23-M2／NDPK B的表达

运用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2DPAGE)分析未交配小鼠子宫内膜和妊娠第五天(D5)小鼠子宫内膜胚泡黏附时植入位点及其旁组织蛋白质组。差异蛋白质组学显示,等电点(isoelectric point,pI)约7．1、分子量(molecular weight,Mw)约18kDa的蛋白质点在D5小鼠子宫内膜特别是植入位点表达上调。对此蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption／ionization time of flying mass spectrometry,MALDI—TOF—MS)测定其胶内酶解后的肽质量指纹谱(Peptide Mass Fingerprint,PMF),经Mascot：Peptide Mass Fingerprint中SWISS-PROT数据库查询后,鉴定该蛋白质为鼠源性nm23-M2／NDPKB。RT—PCR和免疫组织化学结果也显示D5小鼠子宫内膜nm23-M2／NDPK B mRNA和蛋白表达明显增加。提示nm23-M2／NDPKB参与胚泡着床这一重要生命活动过程。     

天麻AFLP分析技术体系的建立

目的:建立一个适于天麻研究用的AFLP分析技术体系。方法:以11份天麻种质资源为试材,构建供试天麻的AFLP指纹图谱,同时对AFLP分析过程中DNA提取、酶切、连接、预扩增、引物筛选、选择性扩增、电泳和银染等多种因素进行分析。结果:AFLP分析体系要求DNA模板质量高,酶切连接可同时进行,37℃、9h效果较好,预扩增要求高质量DNA聚合酶,产物15倍稀释作为选择性扩增模板效果好,制胶前玻璃板的处理和银染时间的掌控对获得较好结果非常关键。P-GGA/M-GT引物构建的指纹图谱拥有可清晰辨认的扩增条带45条。结论:AFLP指纹技术具有稳定性高、重复性好等优点,可用于天麻DNA分析。     

不同人群感染结核杆菌的遗传多样性研究

世界范围内结核杆菌具有基因多态性 ,建立在结核杆菌遗传多样性基础上的基因分型对于结核病的基础研究、传染病学机理的探讨以及临床早期诊断和有效防治均具有重要意义。通过对不同人群感染的结核杆菌进行DNA指纹、AFLP等方法及分子基础的分析和研究可以反映出结核杆菌遗传多样性 ,充实并完善常规结核杆菌分类研究内容。本文对目前国际范围内结核杆菌基因分型及遗传多样性研究进展作了扼要的综述 ,指出不同研究方法各具特点 ,这对结核杆菌的全面深入研究及其有效防治具有重要意义。     

用gFM31探针进行谷子品种的指纹分析

用高度多态性探针ｇＦＭ３１对５９个谷子（ＳｅｔａｒｉａｉｔａｒｌｉｃａＢｅａｕｖ．）品种（包括地方品种、育成品种及品系）进行ＤＮＡ指纹分析,共鉴别出５８种类型,而黑谷和黑粒１５１６给出完全相同的带型,二者有可能是同一材料。通过对ｇＦＭ３１ＤＮＡ序列分析,未发现其中有小卫星ＤＮＡ和微卫星ＤＮＡ序列。该探针虽在谷子品种中显示很高的多态性,但与禾谷类的其他物种的ＤＮＡ杂交信号微弱,表现出较强的谷子基因组特异性。     

幽门螺杆菌的分子指纹法研究进展

分子指纹法包括：细菌全细胞蛋白ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱分析法,染色体ＤＮＡ限制酶酶切图谱分析法,ｒＲＮＡ基因限制酶酶切图谱分析法。分子指纹法能敏感表达幽门螺杆菌（ＨＰ）基因变异,从菌株水平准确鉴定ＨＰ,并应用于ＨＰ感染复发,耐药性,致病机理和分子流行病学等重要问题的研究中。