沙门菌、志贺菌、副溶血性弧菌多重PCR检测方法的研究

建立快速检测沙门菌、志贺菌和副溶血性弧菌的多重PCR方法[1-4].根据沙门菌hilA基因、志贺菌ipaH基因及副溶血性弧菌TDH基因设计特异性PCR引物[5-6],被检样品经4 h振荡培养后金属浴裂解制备DNA模板,使用全自动毛细管电泳核酸检测系统分析PCR扩增产物.在580、423和245 bp处分别出现预期的特异性DNA条带,且无非特异扩增条带出现.敏感性试验显示沙门菌在模拟标本中的检测灵敏度为101-2cfu/mL、志贺菌为101cfu/mL、副溶血性弧菌为102cfu/mL.该方法操作方便、分析时间短、特异性和灵敏度高,可用于公共卫生突发事件食源性病原菌的快速检测.     

毛细管电泳在基因研究中的应用

讨论用于基因研究的各种方法,并指出毛细管电泳技术的优点。评述毛细管电泳(CE)用于基因分析的原理,详细介绍毛细管电泳在基因研究中的应用新进展。展望CE及其在基因研究的应用前景。     

鸡传染性支气管炎病毒变异株（793／B）核蛋白基因的克隆与序列分析

根据GenBank已经发表的传染性支气管炎病毒(IBV)N全基因组序列设计引物,对IBV793/B分离毒株N基因进行克隆与序列分析。结果表明,IBV793/B的N基因由1229bp组成,与GenBank已发表的11株IBV的N基因相比较,IBV793/B的N基因共有88处点突变,在第991位发生了一个核苷酸的缺失。N基因的核苷酸同源性为86.9%～91.4%,氨基酸同源性为75.8%～77.5%。表明IBV93/B的N基因存在着较大的变异性。     

茶树挥发油化学成分的研究

采用毛细管气相色谱-质谱(CGC-MS)联用技术对茶树挥发油的化学成分进行研究,经毛细管气相色谱分离出47个峰,共确认了其中39种成分,占总油量的97％。其主要成分是4-甲基-1-(1-甲乙基)-3-环己烯-1-醇、1-甲基-4-(1-甲乙基)-1,4-环己烯、桉叶油素、( )-4-蒈烯等。     

氧气驱动雾化吸入异丙肾上腺素治疗小儿毛细支气管炎临床疗效观察

急性毛细支气管炎是一种婴儿较常见的下呼吸道感染 ,仅见于 2岁以下婴幼儿 ,多数是 1～ 6个月的小婴儿 ,发病与该年龄支气管的解剖学特点有关 ,因微小的管腔易由粘性分泌物、水肿及肌收缩而发生梗阻并可致肺气肿及肺不张。其临床症状如肺炎且喘憋更著 [1 ]。解除呼吸道阻塞 ,改善通气 ,控制喘憋是提高毛细支气管炎疗效的关键。我科2 0 0 0年 1月至 2 0 0 2年 1 2月用氧气驱动雾化吸入异丙肾上腺素辅助治疗毛细支气管炎 64例 ,疗效显著。现报告如下。1　临床资料1 .1　一般资料　患儿 64例 ,均符合毛细支气管炎的诊断标准。发病 5天内入院 ,…     

利用胶束电动毛细管电泳比较五种提取鲫鱼总蛋白方法研究

毛细管电泳又称高效毛细管电泳(High-performance capillary electrophoresis,HPCE),是 20 世纪 80 年代问世的一种高效液相分离法.     

几种鸡传染性支气管炎病毒活疫苗对中国流行毒株CK/CH/LDL/97I的保护作用评价

选择我国应用的五株鸡传染性支气管炎活疫苗毒株(JAAS、IBN、Jlin、J9和H120)和当地流行毒株(CK/CH/LDL/97 Ⅰ)作为研究对象,对其S1基因进行序列比对分析,结果表明疫苗株与流行毒株的核昔酸序列及推导的氨基酸序列同源性分别不超过76.4%和78.7%.S1基因的核苷酸系统发育树显示,疫苗株与流行毒株分属不同进化群,亲缘关系较远,属于不同的基因型.用这五株活疫苗进行针对强毒株CK/CH/LDL/97Ⅰ株的免疫保护实验,可见临床发病率为30%～100%;攻毒5d后每组随机扑杀10只鸡,采集器官,应用RT-PCR法检测病毒,气管样品病毒检出率为50%～90%,肾脏样品病毒检出率为10%～30%.由此可见:我国目前使用的主要活疫苗对异种IBV分离株的感染不能提供完全的保护作用.     

喘息性支气管炎患儿急性期血小板参数的实验观察

目的:测定喘息性支气管炎惠儿急性期血小板参数并分析其可能的临床意义.方法:用血细胞分析仪测定喘息性支气管炎患儿血小板4项参数,并随机选择30例上呼吸道感染患儿为对照.结果:与对照组相比,重症组、轻症组血小板数升高,但差异无统计学意义(P＞0.05);平均血小板体积、血小板分布宽度、大血小板比率也升高,且差异均具显著性(P＜0.01).结论:喘息性支气管炎发作时,存在血小板的活化、聚集和释放,其在炎症的发生发展中起重要作用.     

高效毛细管电泳法直接测定红豆杉悬浮培养细胞中游离芳香族氨基酸

建立了红豆杉悬浮培养细胞中游离芳香族氨基酸的高效毛细管电泳的分离直接紫外吸收测定方法。在优化的实验条件下 ,以间苯二酚为内标 ,未涂层融硅毛细管 (75 μmi.d .,总长 37cm ,有效分离长度 30cm)为分离通道 ,40mmol/L磷酸缓冲液 (pH10 .46 )为电泳介质 ,3sec(0 .5 psi)压力进样 ,15kV恒压电泳 ,2 0 0nm检测 ,在 9min内三种氨基酸得到分离测定。色氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸的线性范围分别为 2 .5 0～ 2 5 0 μmol/L(r =0 .996 2 ,RSD =2 .5 2 % )、1.2 5～ 2 5 0 μmol/L(r =0 .996 6 ,RSD =2 .12 % )和 2 .5 0～ 2 5 0 μmol/L(r=0 .9940 ,RSD =2 .93% ) ,苯丙氨酸回收率为 96 .8%± 1.37% ,酪氨酸回收率为 99.2 %± 3.0 4%。     

传染性支气管炎病毒核衣壳蛋白基因克隆及在E.coli中的表达

核衣壳蛋白基因 (N基因 )是传染性支气管炎病毒的重要结构基因 .根据已报道的序列设计引物 ,利用RT PCR技术从病毒RNA中扩增和克隆到了N基因的cDNA ,并测定了核苷酸序列 .克隆的N基因片段ORF全长 12 30bp ,编码 4 0 9个氨基酸 .将该片段序列与其他IBV病毒株比较 ,核苷酸的同一性为 87 0 %～ 98 6 %,氨基酸的同一性为 91 0 %～ 98 1%.将该cDNA亚克隆到pBV2 2 0表达载体 ,转化大肠杆菌DH5α菌株 ,Western印迹检测 ,获得了分子量约 4 5kD表达蛋白