桔小实蝇幼虫总蛋白双向电泳技术体系的建立和优化

【目的】建立和优化桔小实蝇幼虫Bactrocera dorsalis(Hendel)总蛋白的双向电泳条件。【方法】使用BPP法和3种TCA-丙酮法(TCA-丙酮-A法:直接加入裂解液磨样;TCA-丙酮-B法:样品提取液中加入40 mmol/L DTT;TCA-丙酮-C法:样品提取液中加入0.07%β-巯基乙醇)提取桔小实蝇幼虫总蛋白;使用13 cm和24 cm p H 4~7的IPG胶条分离桔小实蝇幼虫总蛋白;使用考马斯亮蓝法及硝酸银染色法对双向电泳凝胶进行染色;使用5800 MALDI-TOF-TOF MS/MS质谱分析仪对BPP法获得的特异蛋白进行质谱鉴定,并将检索数据库物种分别设为Metazoa(Animals)与Drosophila(Fruit flies)进行数据库检索。【结果】TCA-丙酮法中,TCA-丙酮-C法提取效果最好,BPP法优于所有TCA-丙酮法;使用考马斯亮蓝染色与硝酸银染色效果相当;使用24 cm胶条的蛋白分辨率明显高于13 cm胶条;检索数据库物种设为Metazoa(Animals)可获得比Drosophila(Fruit flies)更加全面的信息。【结论】使用24 cm p H 4~7的IPG胶条对BPP法提取的桔小实蝇幼虫总蛋白进行双向电泳,采用考马斯亮蓝法对双向电泳凝胶进行染色,可得到更好的双向电泳图谱,检索数据库时检索物种可优先设为Metazoa(Animals)。     

3种杀虫剂对不同密度、日龄和性别橘小实蝇成虫的毒力

为了明确成虫密度、日龄和性别对应用药膜法测定杀虫剂毒力结果的影响,本文测定了敌百虫、高效氯氰菊酯和阿维菌素三种药剂对不同密度、不同日龄条件下雌雄橘小实蝇Bactrocera dorsalis (Hendel)雌雄成虫的毒力。结果表明,3种杀虫剂处理后不同密度桔小实蝇成虫的死亡率最高为62%-72%,之后逐渐下降低至10%以下,并趋于稳定;阿维菌素处理死亡率总体呈高-低-高-低的S形变化,以30-50头/瓶最高;高效氯氰菊酯处理后死亡率5头/瓶使最低,其他9个密度稳定在35.5%-46.4%;建立了描述3种药剂处理后死亡率和成虫密度之间关系的模型。同一种药剂处理不同日龄成虫,其死亡率变化规律明显。敌百虫处理4日龄、74日龄雌虫死亡率最高,14日龄最低;4、54、64日龄雄虫死亡率较高,14日龄最低;其雌雄虫死亡率与日龄件均符合Johnson Schumacher模型。高效氯氰菊酯处理雌雄虫的死亡率均以4日龄最低,之后明显增大,24日龄后趋于稳定;死亡率与日龄间的关系均符合Quardratics Ratio模型。同一日龄雌雄虫死亡率比较,敌百虫处理无明显差异,高效氯氰菊酯处理雌虫大多高于雄虫。根据以上研究,提出测定杀虫剂毒力时桔小实蝇的合适密度为0.04-0.06头/mL（容器体积）或者27.4-18.2 c㎡/头（药膜面积）。     

近红外窄带光照下不同水果背景中桔小实蝇的图像分割

【目的】为了增强水果背景中桔小实蝇Bactrocera dorsalis Hendel（双翅目实蝇科）的识别效果,研究了该种昆虫与不同水果之间的反射光谱差异。【方法】采用紫外 可见光 近红外分光光度计测量了桔小实蝇与16种水果在400~2 500 nm波段的反射光谱。在中心波长为565 nm和827 nm的窄谱带光源及日光3种光源分别照射下,分别拍摄各种水果背景中的桔小实蝇照片,并用大津Otsu算法对照片进行二值化处理。【结果】发现桔小实蝇的反射率随波长增加而缓慢地增大,最大反射率小于40%。而16种水果的最强反射峰全部或部分落在在777～896 nm。不同水果平均最大反射率为41.10%～97.89%,与桔小实蝇在此波段的低反射率（约30%）形成强烈的反差。在827 nm中心波长窄带光源照射下拍摄的照片中,发现桔小实蝇为黑色,而背景水果呈现大面积的白色,形成高反差,桔小实蝇很容易被辨识。相反,在日光和565 nm中心波长窄带光源照射的照片中,水果背景存在较多的黑色斑块,容易与桔小实蝇的黑区混淆;或者该虫形成白斑,从而无法识别。【结论】选用近红外波段的窄带光源照射能明显提高桔小实蝇与水果图像的对比度,增强桔小实蝇的分割效果。     

杨桃园桔小实蝇的防治适期研究

杨桃园桔小实蝇种群数量动态具有明显的规律,且与杨桃果实的成熟期密切相关。通常3月实蝇种群数量开始上升,4月～10月为发生盛期,其间出现3—4个发生高峰,11月次至年2月虫量较低。桔小实蝇对杨桃果实的成熟度具明显选择性,偏好硬度（成熟度）在89度以下的果实。单个果实中约有6个产卵孔、30头幼虫,杨桃从被害到落果时间长度一般为9d。经分析,发现产卵孔数和落果中的幼虫数量、产卵孔数与落果时间长度之间显著相关,建立了两者间关系方程。在以上研究基础上,确定了杨桃园桔小实蝇防治的一些关键时期。     

高效氯氰菊酯不同汰选频度条件下桔小实蝇高抗品系抗药性发展动态

为了研究高效氯氰菊酯不同施用强度对桔小实蝇Bactrocera dorsalis(Hendel)高抗品系抗药性发展动态的影响,为指导田间科学合理使用高效氯氰菊酯防治该虫提供理论依据,本文以室内培育的桔小实蝇对高效氯氰菊酯高抗品系成虫为研究对象,以高效氯氰菊酯对敏感品系的毒力作为毒力基准线,按高效氯氰菊酯汰选间隔时间长短设置30 d、60 d、90 d、120 d 4个处理,以在不接触药剂常规条件下饲养的高抗品系作对照,采用药膜法进行抗药性汰选和毒力测定,每30天试验1次,共计试验10次,获得致死中浓度(LC_(50))和抗性倍数(R_m),分析抗性发展动态与汰选间隔时间的关系。研究结果表明270 d后,不同间隔时间长度汰选处理,桔小实蝇高抗品系对高效氯氰菊酯的抗药性发展动态存在明显差异,总体表现为汰选间隔时间越短,抗性增长越快。30 d汰选1次处理,高效氯氰菊酯对桔小实蝇成虫的致死中浓度从第1次的582.7 mg/L上升到1133.6 mg/L,抗性倍数从98.0倍上升到190.7倍;60 d汰选1次处理,致死中浓度上升为828.0 mg/L,抗性倍数上升为139.3倍;90 d汰选1次处理,致死中浓度为529.2 mg/L,抗性倍数为89.0倍;120 d汰选1次处理,致死中浓度、抗性倍数分别为511.3 mg/L、86.0倍;未进行汰选的抗性品系致死中浓度由582.7 mg/L下降到368.1 mg/L,抗性倍数也从98.0倍下降到61.9倍。建立了270 d后高效氯氰菊酯汰选间隔时间与桔小实蝇成虫抗药性增长比率之间的关系方程为Y=11.427X~(-0.529)。由实验室模拟实验结果预测当果园中连续两次使用间隔时间在99 d以上时,应可降低桔小实蝇对高效氯氰菊酯的抗性继续上升的风险。     

一种桔小实蝇蛹白化突变体的遗传分析

在实验室饲养野生型桔小实蝇Bactrocera dorsalis(Hendel)过程中发现了一种蛹色为白色的桔小实蝇突变品系。根据孟德尔遗传规律,设计野生型与突变型杂交(正交和反交)、F_1代与突变型回交、F_1代自交以及F_2代突变型自交等实验,对蛹白化突变性状的遗传规律进行研究。结果显示野生型与突变型杂交F_1代蛹色全部为野生型;F_2代野生型和突变型的性状分离比为2.98∶1,回交实验野生型与突变型性状分离比为1.19∶1;而突变体自交后代(F_3代)全部为突变体。结果表明桔小实蝇蛹色白化突变品系的遗传规律符合孟德尔遗传规律,属于常染色体上单基因控制的隐性遗传性状。     

桔小实蝇抗敌百虫品系的实验种群生物学比较研究

【目的】研究明确桔小实蝇 Bactrocare dorsalis (Hendel) 抗药性品系与敏感品系的基本生物学特征以及相对适合度、内禀增长率等种群生物学参数差异。【方法】实验室条件下筛选出对敌百虫具中抗和高抗的桔小实蝇品系,观察记录其与敏感品系的生物学特性,比较三者之间的主要生物学参数。【结果】桔小实蝇敏感品系与2个抗性品系的卵、幼虫和蛹的发育历期、化蛹率、产卵前期、雌雄虫寿命、存活时间及雌虫比率均无显著差异。中抗品系卵孵化率和成虫羽化率分别为68.33%和93.73%,均显著低于敏感品系（分别为88.33%和97.93%）和高抗品系（分别为86.67%和98.21%）。与敏感品系的产卵量864.61粒/雌和高抗品系的产卵量750.70粒/雌相比,中抗品系的产卵量降低至630.87粒/雌。3个品系雌虫日产卵量动态规律比较一致,均呈开始产卵后短时间内进入产卵盛期,继而产量达到高峰,之后产卵量波动下降。但是与敏感品系相比,2个抗性品系雌虫较早进入产卵高峰。对成虫存活率动态拟合方程参数c值均大于1,符合I型存活曲线基本模型,表明在实验室理想条件下3个品系成虫均能达到其平均寿命。敏感品系种群趋势指数（I）最高,为339.41,其次为高抗品系（I =307.82）,最小为中抗品系（ I =175.79）,表明对敌百虫产生抗性抑制了桔小实蝇种群的增长,中抗品系抑制程度更大。敏感和高抗品系实验种群净增殖率较高,分别为327.89和284.29;中抗品系显著较低,为217.49。2个抗性品系内禀增长率（r_m）和周限增长率（λ）间无显著差异,且均显著大于敏感品系,世代历期（T）则显著缩短。基于种群净增殖率获得的敌百虫高抗和中抗品系相对适合度分别为0.8670和0.6633。【结论】在敌百虫的选择压力下,桔小实蝇抗药性品系的世代周期、中抗品系卵的孵化率和蛹的羽化率显著降低,其他多项生物学特征无显著变化。抗性品系的繁殖力和种群世代增长量受到抑制,以中抗品系更为明显;但与敏感品系相比,抗性品系种群增长潜力更大。     

引诱剂在综合防治桔小实蝇作用中的评估

以使用引诱剂为主,坚持在杨桃园挂引诱笼2-3年后,大量降低田间桔小实蝇Bactrocera dorsalis Hendel雄虫数量和卵的受精率,配合其它的综防措施,防效逐年提高.三个综防点试验实践表明:杨桃每果虫口数,卵孵化率及受害果率大大降低,防效达92.5%.对桔小实蝇的防治初见成效.