灰树花多糖对体外胃粘膜创伤的修复作用

本文采用MTS[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium]法检测灰树花多糖(GFP)对人胃正常粘膜上皮细胞(human gastric epithelial cell,GES-1)细胞增殖影响;使用毛细管对单层融合的GES-1细胞进行划痕,模拟胃粘膜创伤,观察并计算GFP作用后GES-1细胞创伤区域迁移及修复损伤的面积;ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)方法测定培养基上清液中表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF),转移生长因子(transforming growth factor-β₁,TGF-β₁)和三叶因子2(trefoil factors 2,TFF2)的含量变化;荧光定量PCR(RT-PCR)检测其mRNA的变化.实验结果表明:GFP通过上调EGF,TFF2,下调TGF-β₁ 表达而促进GES-1细胞增殖,促进其向创伤区域迁移,可以完全覆盖创伤区域达到修复胃粘膜作用.     

尖顶羊肚菌胞外多糖提取物对皮肤成纤维细胞增殖和衰老的影响

不同浓度尖顶羊肚菌胞外多糖提取物作用人皮肤成纤维细胞（human skin fibroblasts,HSF）,检测对HSF细胞形态、细胞增殖、衰老相关β-半乳糖苷酶活性、羟脯氨酸含量的影响,探究尖顶羊肚菌胞外多糖提取物对HSF增殖和衰老的影响。结果显示,125μg/mL尖顶羊肚菌胞外多糖提取物使HSF细胞活力增加了25.2%,羟脯氨酸含量增加了12.1%,β-半乳糖苷酶活性降低了48.1%。说明适宜浓度尖顶羊肚菌胞外多糖提取物具有促进HSF细胞增殖、胶原蛋白合成,延缓细胞衰老的作用。     

一株乳酸菌胞外多糖产生的影响因素及其提取

应用苯酚一硫酸法对乳酸菌胞外多糖产生的影响因素进行了研究,表明该菌株在培养温度为30℃,培养时间为4048h,pH值降到4时,胞外多糖的产量最大。葡萄糖是乳酸菌产生多糖的良好碳源。在对乳酸菌的培养物进行离心、透析、脱蛋白、脱色,最后用乙醇沉淀,得到粗品多糖,粗品多糖至少含有两种分子量和含量相差很大的多糖。经过SephadexG-200凝胶柱得到多糖精品EPS—Ⅱ,薄层层析结果显示其为一纯化的样品。     

杀虫剂胁迫下嗜卷书虱和嗜虫书虱能源物质的代谢比较

采用比色法测定嗜卷书虱（Liposcelis bostrychophila）和嗜虫书虱（L．entomophila）体内甘油三酯、多糖和可溶性蛋白的贮存量。结果表明,嗜虫书虱体内3种物质的贮存量均显著高于嗜卷书虱。在毒死蜱和丁硫克百威的胁迫下,嗜虫书虱体内3种物质的变化幅度均大于嗜卷书虱,其中甘油三酯的含量先增高后降低,整体呈现下口抛物线趋势;多糖和可溶性蛋白的消耗率增加。这些说明在毒死蜱和丁硫克百威的作用下,书虱更多地启动了多糖和可溶性蛋白的代谢,降低了对甘油三酯的利用,以应对杀虫剂的胁迫。     

海蒿子多糖DEⅠ、DEⅡ组分分离纯化、结构及抗癌活性研究

海蒿子干粉经热水抽提、乙醇沉淀、DEAE-Sephadex A-25柱层析分离,得到多糖DEⅠ、DEⅡ,总糖含量分别为52.40%、38.8%.经酸降解、薄层层析、气相色谱-质谱分析,证明其单糖组成均为木糖、岩藻糖、半乳糖、果糖、甘露糖、葡萄糖.其中岩藻糖含量最高.多糖DEⅠ、DEⅡ对P388肿瘤具有抑制活性.     

几种植物多糖结构特征与预防肥胖活性

探究白茶多糖（white tea polysaccharide,WTP）、枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharide,LBP）、桑叶多糖（mulberry leaf polysaccharide,MLP）结构与预防高脂饮食小鼠肥胖活性的关系。方法：对多糖理化成分、分子质量、单糖组成、紫外以及红外光谱进行分析;通过高脂饲料喂养同时配合灌胃处理构造小鼠预防肥胖模型,以Orlistat为对照,研究预防肥胖活性,q PCR测定小鼠肝脏中脂质代谢相关基因表达水平,同时测定血清转氨酶水平。结果：WTP、LBP、MLP重均分子质量分别为18 180、22 410、34 430U;紫外及红外光谱显示,3种植物多糖为半乳糖吡喃环蛋白缀合物,在预防肥胖方面具有明显优势,可将高脂饮食引起的体重增长分别降低26.63%、13.05%、11.52%,且WTP、LBP优于Orlistat。3种植物多糖均能降低脂肪湿重,WTP、LBP均能降低脂肪细胞直径,但MLP对于脂肪细胞直径的降低效果并不明显。三者均上调脂质分解基因的表达,下调脂质合成基因的表达,脂质代谢紊乱状态得到有效改善。结论：本实验剂量下,WTP、LBP、MLP均具有良好的预防肥胖功效,且WTP预防肥胖效果优于LBP和MLP。WTP对于高脂饮食引起的脂肪肝具有良好的预防效果。     

黄芪多糖免疫草鱼母本对子代IgM、C3和LSZ表达特性研究

为探究黄芪多糖免疫草鱼母本所产子代早期发育阶段体液免疫因子IgM、C3和LSZ的表达特性及代间传递效率。采用ELISA、RT-qPCR等方法分析了饲喂黄芪多糖草鱼母本血液及其子代早期发育阶段3种免疫因子的蛋白质活性及mRNA水平。结果显示,黄芪多糖免疫草鱼母本血液中IgM、C3和LSZ蛋白活性均显著高于对照组。在子代早期阶段中,3种免疫因子蛋白活性呈先下降后上升趋势,实验组IgM蛋白活性在各阶段均显著高于对照组,在卵子、5d和28d仔鱼中分别提高了2.2倍、1.7倍和1.8倍。实验组C3活性在卵子、24h胚胎分别提高了1.9倍和1.6倍。实验组LSZ活性在卵子、5d和28d仔鱼中分别提高了2.4倍、2.0倍和1.9倍;在卵子和受精卵时期3种免疫因子mRNA水平显著高于对照组。在24h胚胎至5d仔鱼没有检测到IgM和LSZ mRNA,而在14d后3种免疫因子的mRNA均呈上调表达,但Ig M和C3 mRNA水平与对照组无显著差异。GCRV攻毒后,实验组2月龄草鱼脾脏和头肾中IgM mRNA水平显著高于对照组。结果表明,黄芪多糖能够提高草鱼母本免疫能力并向子代垂直传递,在应对GCRV感染时发挥一定免疫保护作用。     

海藻多糖通过下调肝癌细胞Hep3B糖酵解途径抑制细胞增殖和迁移

目的:探讨海藻多糖(algal polysaccharides,AP)对肝癌细胞Hep3B的增殖和迁移的影响及其可能的作用机制,为治疗肝癌提供新的思路。方法:(1)比较正常细胞与癌细胞中糖酵解(embden-meyerhof-parnas,EMP)途径的表达差异,用紫外分光光度计比色法检测EMP限速酶酶活力:己糖激酶(hexokinase,HK)、丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK),用乳酸测定试剂盒测定EMP产物:乳酸。(2)AP处理Hep3B后,检测EMP表达水平变化。(3)AP处理细胞后,检测肝癌细胞Hep3B的增殖和迁移能力及对上皮细胞-间充质转化(EMT)的影响,方法包括MTT、q PCR和Transwell小室实验。(4)MTT、Transwell和q PCR检测HK抑制剂3-溴丙酮酸(3-bromopyruvate,3-BrPA)对肝癌Hep3B细胞的活力和迁移能力及EMT的影响。(5)Western blot和相关试剂盒检测AP与3-BrPA分别处理细胞时,对EMP水平及Akt通路的影响。(6)AP联合3-BrPA处理Hep B3后,检测HK和Akt信号通路表达水平及细胞活力和迁移的变化。结果:(1)癌细胞(Hep3B、He La、SW480)EMP代谢水平均高于正常肝细胞(HL02),其中Hep3B差异最为显著。(2)AP能抑制Hep B细胞EMP代谢水平,且抑制程度随着AP浓度升高而升高,存在浓度依赖性。(3)AP可抑制肝癌细胞Hep3B的增殖和迁移,且抑制EMT的发生。AP浓度为200mg/ml,处理时间为48h时,生长抑制率达(55±2.8)%,细胞迁移数为对照组的(32±2.9)%;(4)3-BrPA可下调Hep3B细胞HK活性,并抑制细胞活力与迁移,且抑制EMT的发生。200μmol/L 3-BrPA作用细胞48h后,与对照组相比,细胞活性下降了(52±5.8)%(P0.001),细胞迁移数下降了(48±6.1)%(P0.01)。(5)AP和3-BrPA均下调EMP代谢水平,且抑制Akt信号通路。(6)AP与3-BrPA联合处理Hep3B后,HK表达下降,显著抑制Akt信号通路,细胞活性和迁移能力均较AP单用组显著下降(P0.05)。结论:肝癌细胞Hep3B EMP代谢水平高于正常肝细胞,AP可下调Hep3B细胞EMP代谢水平,低EMP代谢水平可能通过下调EMT和Akt信号通路抑制Hep3B的增殖和迁移。当AP和3-BrPA联合应用时,抑制肝癌迁移和增殖效果更明显。     

基因工程技术优化透明质酸生产的研究进展

透明质酸是由葡萄糖醛酸和N-乙酰葡萄糖胺组成的双糖单位聚合而成的直链酸性粘多糖,在医药、化妆品、食品等领域拥有庞大的市场。传统研究通过优化发酵参数改善透明质酸的生产虽然取得了显著成效,但也趋于上限,加之天然生产菌株固有的发酵培养基成本高、具有一定致病性等等的劣势也日益显著。随着分子生物学技术的迅速发展以及对透明质酸合成相关基因研究的不断深入,研究重点逐渐转向利用基因工程技术构建高产、安全、具有特定分子量的透明质酸工程菌株。以下就有关透明质酸生产菌株基因工程改造的策略及研究进展进行概述和展望。     

卡介菌多糖核酸对慢性阻塞性肺疾病患者炎症因子水平及免疫功能的影响

目的:分析卡介菌多糖核酸对慢性阻塞性肺疾病患者炎症因子水平及免疫功能的影响。方法:随机将110例慢性阻塞性肺疾病患者分为对照组与观察组,每组55例。对照组采用常规治疗,观察组在常规治疗基础上加用卡介菌多糖核酸治疗,比较两组临床疗效,血清单核细胞样受体4(TLR4)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、脂质过氧化物(LPO)、超氧化物歧化酶(SOD)、金属蛋白抑制1(TIMP-1)及金属蛋白酶-9(MMP-9)水平,CD4~+、CD4~+/CD8~+、CD8~+水平,第1秒用力呼气容积(FEV1)、肺活量(FVC)。结果:观察组总有效率为96.86%,显著高于对照组81.82%,差异有统计学意义(P0.05)。治疗后,观察组血清TLR4、IL-8、TNF-α、LPO、TIMP-1、MMP-9、HMGB1水平、FEV1、FVC及CD8~+低于对照组,SOD水平、CD4+、CD4+/CD8~+高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:卡介菌多糖核治疗慢性阻塞性肺疾病的临床疗效肯定,可选择性减轻炎症反应并改善免疫功能。