中国红豆杉紫杉烯合酶cDNA的分离、表达和鉴定

紫杉烯合酶是一种二萜环化酶,催化牛儿基牛儿基焦磷酸形成紫杉醇生物合成过程中的中间体紫杉烯.利用PCR扩增同源探针筛选cDNA文库,克隆了一个编码中国红豆杉(Taxus chinensis (Pilg.) Rehd.)紫杉烯合酶3′端的2 151 bp的cDNA片段,也通过PCR扩增得到了该基因5′端的611 bp的cDNA片段,将这两个cDNA片段拼接在一起,得到长2 712 bp的cDNA片段,具有一个2 586个碱基的开放阅读框架(ORF),编码包括质体转移肽在内的共862个氨基酸残基;该酶与太平洋红豆杉紫杉烯合酶有97%的同源性(identity),与其他植物萜类环化酶也有较高的同源性.利用融合表达载体pET-32a在大肠杆菌BL21trxB中表达,所表达的融合蛋白以包含体形式存在.包含体经过变性、复性和再折叠,利用His残基亲和凝胶柱层析得到融合的紫杉烯合酶.用毛细管气相色谱-质谱联用对酶促反应产物进行分析,结果表明,融合的紫杉烯合酶能催化产生4(5),11(12)-紫杉烯.     

天然橡胶的生物合成机制

综合介绍了近年来有关橡胶生物合成机理研究方面的进展 ,包括橡胶分子结构 ,橡胶颗粒结构 ,橡胶生物合成途径、酶系及调控等问题     

拟南芥花药不开裂基因（DAD1）编码一个新的磷脂酶A1、其催化茉莉酸生物合成的最初步骤，并与花粉成熟，花药开裂和开花同步进行

通过筛选 6 0 0个拟南芥Ｔ＿ＤＮＡ插入突变株系 ,得到 1个雄性不育系 ,其雌蕊发育正常 ,回交后Ｆ2 代中出现 3∶1分离 ,是隐性孢子体突变型。其花药不能正常开裂 ,被命名为ｄｅｆｆｅｃｔｉｖｅｉｎａｎｔｈｅｒｄｅｈｉｓｃｅｎｃｅ 1 (ｄａｄ 1 )突变体。它的大部分表型与野生型 (ＷＴ)相同 ,只在花粉粒发育到三核期时突然发生衰变并失去活性 ,同时花蕾开放也被延迟。经检测ｄａｄ1花蕾内茉莉酸 (ＪＡ)及其甲酯 (ＭｅＪＡ)含量只有ＷＴ的 2 2 % ,而外源施用适量ＪＡ或ＪＡ合成前体亚麻酸ＬＡ ,可以治愈其病症 ,恢复正常形态。分子生物学…     

构巢曲霉奎尼酸脱氢酶基因qutB在大肠杆菌中的克隆与表达

从莽草酸途径合成奎尼酸（QA）,奎尼酸脱氢酶（QDHase)是必须的,大肠杆菌基因组不含有该酶的编码基因,在构巢曲霉（Aspergillus nidulans)中存在qutB基因编码此酶。以构巢曲染色体DNA为模板,采用PCR扩增得到qutB基因,在大肠杆菌中进行了克隆表达。结果表明,该基因在λ噬菌体的PRPL串联启动子驱动下实现了QDHase的表达。SDS－PAGE显示,重组菌热诱导后出大小约36000的特异蛋白,表达量占菌体总蛋白的19．81％。经酶活性测定,表达产物具有生物学活性,与对照菌株相比,其酶活性提高了27．8倍,为进一步奎尼酸生物合成研究了奠定了基础。     

苯丙氨酸生物合成的研究进展

代谢工程是利用分子生物学原理系统分析代谢途径,设计合理的遗传修饰策略从而优化细胞的生物学特性,本对代谢工程及其在氨基酸生产上的应用进行了简单的回顾,比较了苯丙氨酸的几种合成途径,重点综述了苯丙氨酸生物合成的代谢途径,相关酶及其调控方式,代谢流和转运系统的分析研究,并对苯丙氨酸生产策略的优化及未来发展进行了展望。     

左旋麻黄素半生物合成的研究：固定化酵母细胞生物合成Ｌ—ＰＡＣ（Ｌ—苯基

本文对影响酵母菌生物合成Ｌ－ＰＡＣ的主要因素进行了研究,结果表明：酵母菌株Ｓc-5按２g鲜细／３．２％５０ml海藻酸钠凝胶固定化后,所获固定化凝胶珠置于装有４倍体积反应液的容器中,在振荡频率２２０转／分、温度２８－３０℃、添加０．２％的Ｖc时,批次生物合成Ｌ－ＰＡＣ产量最高,达２．０g/L。     

胡萝卜茄红素β—环化酶cDNA的分离及其在肉质根中的差异表达

利用5'和3'RACE技术从胡萝卜（Daucus carota L.）肉质根中分离了茄红素β-环化酶基因的全长cDNA。该cDNA长2089bp,包含一个1515bp的开放阅读框架,所编码的肽链长505个氨基酸,其一级结构与番茄（Lycopersicumn esculentum Mill.）、烟草（Nicotiana rustica L.）和辣椒（Capsicum frutescens L.）等植物的茄红素β-环化酶高度同源。茄红素β-环化酶在胡萝卜肉质根中的表达受品种特异性的调控,在CA201胡萝卜肉质根中表达十分活跃,而在“齐头红”胡萝卜肉质根中该基因的表达受到了强烈的抑制,导致茄红素在细胞中大量积累。     

微生物合成中链聚羟基烷酸酯研究进展

某些微生物细胞在特定营养限制的条件下会产生聚羟基烷酸酯作为碳源储备。和短链聚羟基烷酸酯(PHB)一样 ,中链聚羟基烷酸酯由于具有更优良的性能、更高的附加值和更广泛的用途而受到人们的关注 ;此外 ,中链聚羟基烷酸酯还可以被人工合成为具有功能性侧链的半合成高聚物 ,并因此能够具有更好的弹性和更理想的结晶性能等优点 ,从而成为近年来对环境友好的生物可降解材料的研究重点。在能够合成中链聚羟基烷酸酯的微生物中 ,食油假单胞菌是最典型 ,也是研究得最多的一种。本文对由食油假单胞菌合成中链聚羟基烷酸酯的特点、代谢机制、发挥过程等内容进行了综述 ,并提出了这一研究领域未来可能的研究方向     

花色素苷生物合成的遗传和发育调控

概述了高等植物花色素苷生物合成过程的遗传和发育调控的研究进展。重点介绍花色素苷生物合成的结构基因和调控基困的分子克隆,调控基因对结构基因的调控功能。     

核黄素产生菌阿舒假囊酵母(Eremothecium ashbyii)抗反馈抑制突变株的选育

在调查阿舒假囊酵母(Eremothecium ashbyii)营养要求的基础上,设计了适合该菌生长的合成培养基,在合成培养基上诱变筛选得到了数株抗嘌呤拮抗物8-AG的突变株。选择其中三株U_(95-1)、U_(95-2)和U_(95-3)进行传代和摇瓶发酵试验,U_(95-3)的核黄素发酵单位低于出发菌,未经传代的U_(95-1)、U_(95-2)比出发菌株的发酵水平分别提高15.5％和9.8％,经5～10代传接,其产核黄素的遗传性状稳定。该研究表明,从代谢控制角度通过减轻核黄素合成途径中重要调节酶的反馈抑制对提高E. ashbyii的核黄素产量和稳定性是可行的,为该菌的菌种改良提供了一条遗传育种途径。