基因工程

<正> 用给体一受体原生质体融合技术研究了叶绿体和线粒体控制的性状在种间的转移。野生烟草或普通烟草白化系(V BW)用作受体原生质体,下一射线照射的花烟草、印度烟草和波状叶烟草原生质体用作细胞器给体。融合细胞经培养后再生成胞质杂种植株。     

转Zm13—Barnase基因玉米的获得及其花粉育性研究

研究了Z31×Q31、H×Z3、A188×B73三种玉米 (ZeamaysL .)基因型的愈伤组织对除草剂Bialaphos的耐性 ,从而确定 5mg·L-1为适宜的选择压。用基因枪将Zm13_Barnase基因转化玉米Q31×Z3、Z31×Q31的胚性愈伤组织 ,经 6轮的除草剂筛选获得 32块抗性愈伤组织 ,再生得到 2 4个植株。经PCR检测 ,18个植株PCR反应呈阳性。I_KI染色和花粉离体萌发观察发现 ,5个植株的花粉为部分不育。Southernblot分析证明 ,这 5个植株中整合有Bar nase基因。     

欧芹叶片衰老过程中的核糖核酸酶类型与活性变化

以凝胶电泳检测核糖核酸酶 (RNase)活性的结果表明 ,欧芹叶片中至少有 6种分子量各不相同的RNase显示出活性。其中一种aRNase活性在衰老过程中逐渐下降 ,赤霉素可延缓其下降 ,b、cRNase活性在衰老过程中显著增加 ,乙烯加速 ,而赤霉素则抑制这两种RNase活性上升。另一种dRNase活性虽然在赤霉素处理与否的叶片中均显著增加 ,但受乙烯抑制。e、fRNase活性在各种处理的叶片中均略呈上升趋势。b、cRNase活性变化与叶片衰老进程的关联最显著     

邻啡罗啉-Cu对DNA的损伤及其化学核酸酶活性

邻啡罗啉-Cu是一种具有核酸酶活性的配合物,可产生多种形式的DNA损伤,包括碱基修饰、异常碱基位点、链断裂及交联等.近年来,邻啡罗啉-Cu因其切割核酸的性质及作为一种可产生活性氧的模型,引起了学者们浓厚的兴趣,在自由基生物学与医学及核酸化学领域受到广泛的关注.     

基于趋化因子受体5靶点的HIV-1治疗研究进展

随着人类免疫缺陷病毒(HIV-1)感染在全球的蔓延及耐药株的出现,寻求有效的治疗方法成为当务之急。趋化因子受体5(Chemokine receptor 5,CCR5)是HIV-1侵入靶细胞的主要辅助受体之一。目前已发现许多CCR5拮抗剂,其中一些化合物已进入临床试验或应用;以CCR5为靶点的基因治疗亦取得了一定的进展。本综述以CCR5为靶点的药物和基因治疗两方面的研究进展进行总结。     

核酸酶BN及SN基因的克隆和序列分析

分别从解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aurcus)中提取染色体DNA,经HindⅢ酶解后PCR扩增获得Barnase(核酸酶BN)基因和Staphylococcal Nuclease(核酸酶SN)基因,并克隆到质粒pGEMTZ-f(+)上。序列分析表明,核酸酶BN的核苷酸序列与已发表的序列有99.3%的同源性,而与据此推测的氨基酸序列完全一致。核酸酶SN基因的核苷酸序列与已发表     

核酸酶P1的原核表达、纯化及酶学特性分析

为了建立一种核酸酶P1(Nuclease P1,NP1)的原核表达纯化系统,首先采用重叠延伸PCR将22段寡核苷酸拼接,获得人工合成的NP1基因。将其克隆至分泌型表达载体pMAL-p4X获得重组质粒pMAL-p4X-NP1,然后将重组载体转化T7 Express和Origami B(DE3)菌株诱导表达,利用Amylose亲和层析柱纯化获得重组蛋白,并对其活性、热稳定性和金属离子依赖性进行系统分析。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白MBP-NP1(Maltose binding protein-NP1)在T7 Express和Origami B(DE3)菌株中均可表达,且以可溶性形式存在。活性检测表明Origami B(DE3)菌株中获得的重组蛋白活性高于T7 Express菌株(75.48 U/mg:51.50 U/mg);利用蛋白酶Factor Xa切除MBP标签后,两种重组蛋白的比活力均有提高,分别为258.13 U/mg和139.20 U/mg。重组NP1表现出良好的热稳定性,80℃温浴30 min后重组酶仍具有90%以上的活力。2.0 mmol/L Zn2+对NP1有比较明显的激活作用,相同浓度的Cu2+则对该酶有强烈的抑制作用。该研究实现了NP1在大肠杆菌系统中的功能性表达,为NP1纯酶的制备提供一个替代途径。     

瓣状内切核酸酶1与肿瘤

瓣状内切核酸酶1(flap endonuclease 1,FEN1)是一种结构特异性核酸酶,由一个核心结构域和一条尾链组成。FEN1在DNA修复过程中冈崎片段成熟时RNA引物的切除,长片段碱基切除修复中瓣状结构的切除等过程中发挥着重要作用。FEN1与不同的蛋白质相互作用,在不同的DNA复制和修复途径中发挥着重要作用。FEN1在肿瘤中有着异常的表达,这表明它可能是一种潜在的肿瘤标记物。     

用S1核酸酶作图法测定蓖麻蚕18S rRNA基因的5′端位置

测定基因5′端位置是研究基因转录调控的一个重要前提。本文将蓖麻蚕18S rRNA基因DNA的5′端用~(32)P标记,然后与18S rRNA杂交,再用S1核酸酶水解掉非杂交区的DNA和RNA。分析放射自显影的结果,测出18S rRNA基因5′端的位置。在18S rRNA基因的BglⅡ_2位点向EcoRⅠ,方向延伸约220bp处,从这一结果,可知道蓖麻蚕rRNA基因的转录方向是5′EcoRⅠ_2→BglⅡ_23′。     

核酸酶保护试验在黄瓜花叶病毒株系鉴定中的初步应用

采用黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）亚组Ⅰ株系Ｆｎｙ－ＣＭＶＲＮＡ＿２的１２０９～１６２６核苷酸片段和亚组Ⅱ株系Ｌｓ－ＣＭＶＲＮＡ＿２的２００２～２４３３核苷酸片段的ｃＤＮＡ克隆,体外转录,同时掺入￣（３２）Ｐ获得负链ＲＮＡ探针,与纯化的番茄和甜椒上的ＣＭＶ中国分离物的ＲＮＡ杂交,结果表明：ＣＭＶ番茄和甜椒中国分离物与Ｆｎｙ－ＣＭＶ的核苷酸有高度同源性,隶属于Ｆｎｙ－ＣＭＶ为代表的亚组Ⅰ株系。并利用Ｋ－ＣＭＶ株系（亚组Ⅰ,源于中国）的ＲＮＡ＿２全长ｃＤＮＡ克隆的两个ＥｃｏＲＩ位点间的核苷酸序列（１６５７～２１２５ｎｔ）作探针,与上述两种ＣＭＶ中国分离物的ＲＮＡ杂交,进一步比较分析了这两个分离物和Ｋ－ＣＭＶ株系的关系。讨论了核酸酶保护法在ＣＭＶ株系鉴定中的作用。