Digoxigenin标记核酸探针分子杂交技术探讨

Dig标记和检测试剂盒中的封阻试剂配制成0.05%、0.1%、0.3%、0.5%、0.7%、0.9%六种浓度,65～68℃温度时,溶解时间分别为10、15、20、35、40、45分钟;预杂交,在免疫测定中进行封阻,背景反应最小,其次是不预杂交,在免疫测定中进行封阻,再次是预杂交,在免疫测定中不封阻;标记探针保存在-20℃,至少可稳定18个月,同一探针重复使用三次可获得满意效果.以上结果表明,DigDNA标记和检测系统将代替~(32)p标记及其检测系统.     

烟草愈伤组织继代培养与分化期间核酸代谢的比较研究

Changes in the contents of DNA and RNA, RNA species, the synthesis rates of DNA and RNA, and the activity of DNase and RNase were investigated in the callus of tobacco (Nicotiana tabacum L. cv. Willow Leaf) during subculture and differentiation. The contents of DNA and RNA were higher in differentiating callus than that in subcultured callus. After day 12, the contents of DNA and RNA in differentiating callus rose continuously while the contents of DNA and RNA in subcultured callus remained constant. Changes in RNA species and its relationship to total RNA level were also analyzed. At the stage of shoot primordium formation in differentiating callus, the activity of RNase increased markedly and the synthesis rate of RNA increased continuously; while the RNase activity and the synthesis rate of RNA in subcultured callus were much lower during the same period. During the period of shoot growth, the synthesis rate of DNA in differentiating callus was elevated compared to that in subcultured callus. The results above suggested that the metabolism of nucleic acids in differentiating callus was more active than that in subcultured callus.     

小麦中T—2毒素的污染调查

采用酶联免疫吸附测定法(ELlSA),调查了我国部分地区1990年国产小麦T—2毒素的污染状况。调查结果表明,在330份样品中,有264份检出T—2毒素,占样品总数的80％。样品中毒素含量最高达1122．Oppb,平均含量为53．3ppb。在引起食物中毒的48份小麦样品中,检出高含量的T—2毒素(84．5—1064．4Ppb)。我国小麦中T—2毒素的污染水平与小麦赤霉病的流行密切相关。     

水稻普矮病毒基因组第十片段cDNA的克隆及其体外转录

由提纯的水稻普矮病毒(Rice Dwarf Virus,简称RDV)中分离出其基因组dsRNA,以人工合成的分别与RDV第十片段(RDV—S10)3’末端互补的两段核苷酸作为引物,合成并克隆S10全长sDNA,体外转录成RNA。用同位素标记的其cDNA作为探针,打点杂交,能检测出浓度为2xl0-11g的病毒核酸和直接测出1．25×10-4g染病水稻中的病毒核酸。     

以浮游植物评价巢湖水质污染及富营养化

对巢湖浮游植物在22个样点,四季采样,进行了种类组成、种群数量、优势种、污染指示种,多样性指数及硅藻指数等群落生态学的初步研究。选用其中种群数量、优势种、污染指示种、硅藻指数对巢湖水质污染及营养水平进行了总评与分区评价。就巢湖总体而论,藻量年均值达111×10~6个/升(细胞数,或个体数为14.7×10~6个/升),硅藻指数96.7,群落组成种类中,污染指示种占64.2％,除冬季外,各样点多以微囊藻、鱼腥藻为主的蓝藻占优势,其分布频度年平均达98.8％,多度年平均达79.7％,而在夏、秋季,两者则分别为100和99.7％,表明巢湖已受到中等程度的污染,属蓝藻型富营养湖泊;与过去巢湖浮游植物的调查资料对比,表明最近几年来,人为富营养化进程在加速。     

用核酸杂交法检查北京地区幼儿园正常儿童尿中人巨细胞病毒DNA

以克隆的人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus,简称HCMV)DNA片段做探针,用核酸杂交方法检查了50例北京地区幼儿园正常儿童的尿标本。查出HCMV DMA阳性者24例,占48％。在两个群体和两个年龄组之间,阳性检出率有显著性差异。利用探针可查出同源DNA5～10pg,而不与其它病毒或细胞DNA杂交。标记不同的探针,使用不同的固定方法,其敏感性不同。此法可在分子水平上查出HCMV基因,比分离病毒更迅速敏感。     

小鹅瘟病毒核酸链型与结构蛋白分析

采用简易方法从鹅胚中分离纯化的小鹅瘟病毒(GPV)样品相当纯净,以致在电镜下呈晶格排列。用负染色技术观察病毒的形态结构,病毒直径为18～20nm,无囊膜。病毒颗粒含有4种结构蛋白,其分子量分别为88、78、66和51kd。根据病毒的核酸链型分析,小鹅瘟病毒含有单链核酸。此结果支持了小鹅瘟病毒属于细小病毒属的结论。     

胶州湾污染海域半知菌群体结构多样性时空动态变化及与生境的关系（英文）北大核心CSCD

【目的】揭示胶州湾典型污染海域半知菌群体结构多样性动态变化与生境的关系。【方法】根据以往对近岸污染调查记录,分别确定胶州湾海泊河、李村河入海口为中度、重度污染采样站位,石老人潮间为轻度污染对照站位,利用PCR-DGGE指纹图谱方法,研究该生境半知菌群体结构多样性季节动态变化与污染的关系。【结果】结果证明,污染指标除总氮含量外,其他各项指标含量在三站位的变化趋势为石老人潮间带最低,海泊河居中,李村河含量最高;与石老人站位相比,海泊河、李村河站位污染指标在四季变化较显著。首次证明在重金属和氮磷严重超标的海域,仍存在数量和种类较多的半知菌。PCR-DGGE指纹图谱结果显示,同一站位相似污染程度采样点之间DGGE指纹图谱比较一致,不同站位、不同季节之间指纹图谱存在明显的差异。优势条带割胶测序分析显示,3个站位存在大量的不可培养真菌,青霉属为半知菌优势种,重度污染的李村河入海口除半知菌外,存在较大量的阿米巴虫、腐霉等动物病原菌。【结论】污染海域的半知菌群体结构与生境污染程度及季节具有较密切的联系。     

降钙素原在鉴别诊断新生儿凝固酶阴性葡萄球菌血流感染与污染的应用价值

目的探讨血清降钙素原(PCT)对新生儿凝固酶阴性葡萄球菌(CoNS)血流感染与污染的临床鉴别诊断价值。方法回顾性分析东南大学附属中大医院2012年2月至2015年2月血培养CoNS阳性新生儿的临床资料,比较血流感染组和污染组患儿病例的一般人口学特征、PCT、C-反应蛋白(CRP)和血培养阳性报警时间(TTP)等结果,并根据ROC曲线分析PCT和CRP对两者的鉴别诊断价值。结果共112例CoNS阳性患儿纳入研究,其中血流感染组52例和污染组60例,两组患儿胎龄和性别差异均无统计学意义(P0.05);血流感染组患儿PCT和CRP水平明显高于污染组(Z=-7.135,P=0.000和Z=-3.065,P=0.002),血流感染组TTP平均值低于污染组(Z=-6.899,P=0.000);早发型败血症患儿人数明显多于晚发型败血症患儿(P=0.04);CoNS阳性血流感染组和污染组各菌种分布之间无统计学差异(P0.05);以PCT0.52ng/mL作为鉴别新生儿CoNS阳性血流感染及污染的最佳截断值时,其敏感性、特异度、阳性预期值和阴性预期值分别为84.9%、88.5%、86.5%和90.0%,ROC曲线下面积(AUC)为0.893[95%CI(0.82,0.95)];以CRP8.0mg/mL作为鉴别诊断新生儿CoNS阳性血流感染与污染的临界值时,其准确度较低。结论 PCT不失为一项值得推荐的鉴别诊断新生儿CoNS血流感染与污染的指标。综合分析新生儿PCT和其他临床特征,将有助于更好地指导临床医生合理使用抗菌药物。     

核酸适配体技术及其在肿瘤诊断和治疗中的应用

核酸适配体是一类通过指数富集的配体系统进化（SELEX）技术获得的具有独特三维构象的小分子RNA 或单链DNA。核酸适 配体能高亲和力和高特异性与靶点结合,同时具有自身分子质量小、免疫原性低、热/化学稳定性高、靶标分子范围广等特点,广泛应用 于疾病诊断、治疗、生物传感器、生物标志物筛选、新药研发等领域。综述近年来核酸适配体在肿瘤诊断和治疗方面的应用,并对核酸 适配体的临床研究现状、市场前景及面临挑战和发展趋势作简要分析。