在大肠杆菌中反义RNA抑制乙型肝炎病毒核心抗原的表达

将乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)基因的DNA序列分别按正、反方向置tac启动子的控制下,并克隆进入同一个质粒中,转化大肠杆菌JM103后,观察到HBcAg和HBeAg的合成均明显低于仅含有HBcAg基因的细菌,最大抑制率可达70％～80％,分子杂交可见反义RNA存在。     

中国香菇交配型和基因型的分析

自1987—1990,在长江以南九省(区)采集52个香菇品系,43株制作了孢子印用以检测交配型,又以检测A.B因子位点的等位基因方法测定了担孢子的基因型,保藏了以A_xB_x(或A_xB_y……)标记的标准单核菌丝体,这是建立中国香菇种质库的第一步,将为香菇杂交育种提供有效亲本。结果表明:每一菌株的四个交配型呈随机分配。具有四个交配型的菌株百分率是79%,有二个交配型的香菇菌株百分率是21%。有9个菌株的单核菌丝的基因型从A_1B_1……A_(18)B_(18)不同,A.B因子等位基因差异明显,这些菌株显示了A.B因子的很低的地区性重复频率。本项研究中建立了区分同宗A同宗B以及四个交配型的试验方法,遵循着核移动的规律,这个方法能够重复。     

通过乙型肝炎病毒核心基因5''''端的修饰使核心抗原在大肠杆菌中高效表达

为了使乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)在大肠杆菌中获得高效表达,本文首次采用一种新方法对核心基因前区进行改造与修饰,即用限制性内切酶Taq I从核心基因内部5′端切开,去除核心基因起始信号ATG及ATG 5′端上游的全部前核心区(Precore),再化学合成一段既包含核心基因起始信号又具有多种功能的DNA片段。将两者拼接重组到表达载体pUC9上,转化受体菌,成功地获得高效表达HBcAg的菌株。用ELISA法检测,表达滴度为1:80000。表达产量占菌体总蛋白的16％。其菌体裂解液经免疫电镜观察,可见到成堆聚集的典型HBcAg颗粒。抗原单体分子量约为22000道尔顿,双体为44000。与目前国内外所普遍采用的方法比较,本文的方法有许多明显的优点,可用于其它基因改造。     

大肠杆菌表达的乙型肝炎病毒核心抗原的某些理化特性

1979年Pasek等用大肠杆菌表达乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)成功以来,国内外也有类似的报道,但对其理化特性的报道不多。为了更有效地保存和应用此抗原,本文研究了从表达HBcAg的大肠杆菌菌液中纯化抗原的方法,以及抗原的某些特性。 HBcAg是由pHBV-1的C基因与pTL载体重组后在大肠杆菌BMH71-18内表达的,     

葡萄初级核心种质资源MybA基因型分析

探究MybA类基因在不同类型葡萄品种中的分布,可为葡萄品种鉴定,以及有色葡萄育种的亲本选择提供依据。本研究以欧亚种、欧美杂种、法美杂种、山欧杂种以及美洲种在内的118个葡萄初级核心种质为材料,对其MybA基因型进行分析。结果表明:欧亚种及其杂种普遍具有VvmybA1基因的等位基因VvmybA1a,仅10个欧亚种及其杂种品种中没有检测到VvmybA1a基因;欧亚种、欧美杂种以及法美杂种中普遍同时具有VvmybA1、VvmybA2和VvmybA3基因,仅少数品种未检测到VvmybA2或VvmybA3基因;山欧杂种中北玫、公酿1号和熊岳白葡萄同时具有VvmybA1、VvmybA2和VvmybA3基因,北醇和北红中仅检测到VvmybA1和VvmybA3基因;仅在具有美洲种血缘的葡萄品种中检测到VlmybA2基因,而5个认为是美洲种的品种未检测到VlmybA2基因,且检测到了欧亚种特有的VvmybA1a等位基因,推测它们为含美洲种血缘较多的欧美杂种,而非纯美洲种。     

结球甘蓝根肿菌鉴定和种质抗性评价

采集湖北省长阳县火烧坪乡根肿病重发区的病土和病根,通过病原菌形态和PCR鉴定,确定是芸薹根肿菌,然后利用欧洲ECD鉴别系统确定生理小种为ECD17/31/13,此病原菌致病力极强。采用田间苗期人工接种鉴定,与田间成株期自然诱发鉴定相结合,对88份甘蓝种质进行抗性评价和筛选,结果表明:苗期获得1份高抗,7份抗病,17份耐病材料;成株期获得4份高抗,4份抗病,15份耐病材料。2个时期88份材料群体抗性鉴定级别基本一致,93.18%材料成株期病指比苗期高。CR21在2个时期均为高抗,抗性最强,表现稳定;CR55在苗期发病最严重,病指达到76.19,成株期为74.10;CR54在成株期发病最严重,病指达到81.54,苗期为75.97,2个时期发病率均达到100%。根肿病菌的鉴定和致病力的确定,及甘蓝种质抗性评价为抗病品种选育和抗病机理的研究奠定基础。     

黄瓜核心种质芽期低温耐受性鉴定评价

以15℃为胁迫温度,以相对发芽率、相对发芽势、相对发芽指数、相对胚根长度、相对鲜重、相对干重为评价指标,对65份黄瓜核心种质进行芽期低温耐受性鉴定评价,结果显示,参试材料的6项指标差异显著,变化范围分别为1.00%~123.00%、0~112.00%、0~70%、13.00%~109.00%、0~100.00%、0~101.00%。表明大部分参试材料在不同程度上受到低温条件的影响,发芽时间推迟、种子活力降低、种芽生长量减少,而少部分材料的种子活力在15℃低温条件下与对照相比差异不明显。利用6项指标的平均隶属度、聚类分析进行综合评价,共筛选出7份芽期强耐冷的黄瓜材料,来源于印度、日本、匈牙利、土耳其及我国的吉林省、河北省、重庆市。     

小麦抗茎腐病种质筛选及鉴定新方法的建立

为筛选针对我国黄淮麦区小麦茎腐病抗病新种质,建立可区分小麦其他茎基部病害的茎腐病抗性鉴定方法,本文采用室内苗期鉴定方法对主要来自黄淮麦区的108份小麦品种和高代品系进行茎腐病抗性评价,对其中45份小麦材料同时采用荧光定量PCR方法测定基部茎秆的禾谷镰刀菌DNA含量并与其茎腐病平均病级进行相关分析。共筛选到中抗茎腐病材料22份,未发现高抗和免疫品种(系);相关分析结果表明,小麦基部茎秆禾谷镰刀菌DNA含量与其茎腐病平均病级呈极显著正相关(r=0.73**),小麦基部茎秆禾谷镰刀菌DNA含量可以作为小麦茎腐病抗性的重要参考。抗病新种质的筛选和荧光定量PCR抗性评价方法的建立将为今后黄淮麦区小麦抗茎腐病品种的培育提供帮助。