植物核仁小分子RNA及其研究进展

自从６０年代末Ｗｅｉｎｂｅｒｇ等在哺乳动物中发现了第一个核仁小分子ＲＮＡ（ｓｍａｌｎｕｃｌｅｏｌａｒＲＮＡ,ｓｎｏＲＮＡ）Ｕ３以来,这一领域的研究特别是９０年代以来的进展引起了人们的广泛关注。这些富集于核仁区的代谢稳定的ｓｎｏＲＮＡ暗示了它们在核糖体...     

snoRNP的生物发生

核仁小核糖核蛋白体颗粒(small nucleolar ribonucleoproteins partical,snoRNP)是一种定位于核仁的复合物,它由一系列核仁小RNA(small nucleolar RNA,snoRNA)和核心蛋白质结合而成。这些snoRNP指导核糖体RNA(rRNA)前体的加工修饰,在核糖体的生物发生中起着重要的作用。研究显示大多数snoRNP加工和组装的早期阶段发生在核浆,在Cajal小体(Cajal body,CB)中组装成熟之后,在PHAX、p50、p55、SMN和Nopp140等蛋白质的帮助下穿越各种不同的核间隔转运至核仁,并在核仁中发挥功能。本文对snoRNP的生物发生过程作一综述。     

3D-PDUS对成人常染色体显性遗传多囊肾病肾脏血流动力学变化的研究

目的:应用三维能量多普勒超声技术探讨成人常染色体显性多囊肾病(ADPKD)患者肾脏血流灌注的改变与血压的关系。方法:选取79例ADPKD患者;对照组86例,其中包括62例原发性高血压(EH)患者以及24例血压正常的健康成年人。使用三维能量多普勒超声采集肾脏三维能量图像并应用VOCAL分析软件得出相关参数指标:血管指数(VI)、血流指数(FI)、血管血流指数(VFI)及肾脏总体积。结果:(1)与同级别血压水平的对照组比较,在ADPKD患者血压正常时VI就开始减低、肾脏总体积就开始增大(P0.05);(2)ADPKD合并高血压1级、2级、3级患者与同级别血压水平的对照组相比,其VI明显下降、肾脏总体积显著增大(P0.01),预示着ADPKD疾病的进展,ADPKD血流动力学变化与血压的变化关系密切。结论:ADPD患者血流动力学的变化比血压的变化更敏感。故早期对多囊肾患者肾脏血流动力学进行监测,对于评估病情、判定疗效、指导临床治疗具有重要意义。     

X射线和ENU诱变的Adh基因对黑腹果蝇醇耐受性的杂合效应

为研究部分显性的机制,用１２个黑腹果蝇醇脱氢酶（ＤＡＤＨ）基因内无效突变（Ａｄｈ＾ｎ）体作为材料。这些已知序列伯突变体「包括单碱基置换或基因内小段缺失（９￣１６个碱基）」,用来分析肽的合成,二聚体的形成和杂二聚体酶活性。杂合体中酶的部分表达和很广范围显性表达（从几乎完全陷性到高度显性）具多重机制。在１０％乙醇的高度胁迫下,所有１２个Ａｄｈ＾ｎ型果蝇中都观察到醇耐受性的部分显性表达。无效「突变表达的     

Midkine, a cytokine that inhibits HIV infection by binding to the cell surface expressed nucleolin

The growth factor midkine （MK） is a cytokine that inhibits HIV infection in cell cultures in an autocrine and paracrine manner by blocking the attachment of HIV particles to permissive cells. MK mRNA is systematically expressed in adult peripheral blood lymphocytes from healthy donors, while its expression becomes markedly but transiently increased upon in vitro treatment of lymphocytes with IL-2 or IFN-7 and activation of T lymphocytes by PHA or through the engagement of the CD28 antigen. The binding of MK to cells occurs specifically at a high and a low affinity binding site. This low affinity-binding site is the cell-surface expressed nucleolin, which is implicated in the mechanism of the initial attachment of HIV particles to cells. Accordingly, the nucleolin-binding HB-19 pseudopeptide has no effect on the MK binding to the high affinity binding site, whereas it prevents the binding of MK to the low affinity binding site, thus suggesting the low affinity receptor of MK is the cell-surface-expressed nucleolin. Confocal immunofluorescence laser microscopy revealed the colocalization of MK and the cell-surface-expressed nucleolin at distinct spots. The use of various deletion constructs of nucleolin then indicates that the extreme C-terminal end of nucleolin, containing repeats of the amino acid motif RGG, as the domain that binds MK. The specific binding of MK to the surface nucleolin is independent of heparan sulfate and chondroitin sulfate proteoglycans. After binding to cells, MK enters cells by an active process in which nucleolin and lipid rafts appear to be implicated. The potent and the distinct anti-HIV action of MK along with its enhanced expression in lymphocytes by various physiological stimuli, point out that MK is a cytokine that could be involved in HIV pathogenesis.     

通过微切一扩增建立植物(蚕豆Vicia faba)染色体区段特异性基因文库研究初探

以蚕豆（Viciafaba,2n=12）根尖为材料,采用改良方法制备染色体标本,在光镜下切割分离一段大M染色体核仁组织区（NOR）特定区段（约合0．9pgDNA）,通过单一引物一聚合酶链式反应法（SingleUniquePrimer-PCR）随机扩增微切DNA后,获得近60μgDNA。经琼脂糖电泳分析测定扩增产物分子片段大小介于200-900bp。以地高新（Digoxigenin）标记蚕豆总体DNA,作为探针与扩增产物进行Southern杂交,证实扩增得到的DNA与蚕豆DNA同源,来自做切染色体。部分扩增产物经ECORI酶切后,连人经同酶切割后的pUC18载体质粒,转化大肠杆菌（EcoliJM109）。琼脂糖电泳分析得到的部分克隆,得知插人子长度介于0．25-0．9kb。本文将用于动物材料的单一引物一聚合酶链式反应法应用于植物染色体的微切微扩增,并作了一定程度简化,初步建立起一套包括微切、扩增、检测和克隆的便捷、经济的实验室制备植物染色体区域特异性基因文库的方法。     

黑麦染色体银染的初步研究

本文对黑麦染色体的银染条件进行了探索,并对黑麦染色体上银染正反应分布区进行了研究。首次发现黑麦染色体的核仁组成中心区、着丝点和端粒均能用硝酸银染色。对此现象的原因进行了讨论。     

加性-显性-母体效应及GE互作效应遗传模型的模拟比较

运用蒙特卡罗方法比较了8个亲本正反应的加性－显性－母体效应的全模型及缩减模型,当σ^2M和σ^2ME存在时,检测各项遗传方差分量的功效高达97％以上,如何存在σ^2M和σ^2ME而缩减模型未包括这两项效应时,除显性效应以外的各项方差分量都被高估。对于加性－显性模型,如果忽略了基因型与环境互作,σ^2ε和σ^2A将被高估。当母体效应和基因型与环境互作被忽略时,将显著地增加遗传效应预测值的方差。     

工业酵母菌株转化体系的建立

本文通过敏感度实验测定了工业酵母菌株SK—1、SPSC—1、NAN—27在不同的培养基上对G418及Cu^2 的敏感浓度,确定了3株工业菌株转化子的筛选方法。针对它们各自的生理生化、遗传特性,用改进的醋酸锂完整细胞转化和原生质体转化两种方法,分别建立了3株菌的转化系统,初步解决了工业酵母菌株转化的问题,并为下一步工业酵母菌株的代谢工程改造奠定了基础。     

豌豆间期细胞核内核仁组织者区排列的非放射性原位杂交定位

以异羟基洋地黄毒甙(digoxigenin)标记的rRNA为探针与多聚甲醛固定的植物根尖振动切片原位杂交。结合免疫荧光检测分析了豌豆(Pisum sativum)间期细胞核内核仁组织者区的数目、分布和排列。研究结果发现豌豆根尖分生组织间期细胞核内有1—6个被探针分子强烈标记的位点。这些位点呈大小不等(0.24-1.98μm~3)的斑点状,分布在核仁的周边,并且与核仁相连。探针标记位点在核仁周边的排列方式随标记位点的数目不同而异。在具有四个标记位点的细胞核内,它们呈四面体,梯形或平行四边形排列。在显示原位杂交阳性的细胞核中,59.5%显示4个标记位点,少于或多于4个标记位点的细胞分别占35.7%和4.76%。探针标记位点的数目与标记位点本身的大小无明显联系,而与核仁的体积大体上呈负相关趋势。文章讨论了这些被rRNA探针标记的位点与核仁组织区及核仁形成的关系。