特异亲和活性蓝染料的小分子RNA的SELIEX筛选

化学合成含有２０个核苷酸随机序列,长度为７３个核苷酸的单链ＤＮＡ随机 ;ＰＣＲ扩增和双链化后,Ｔ７ ＲＮＡ聚合酶体外转录得到单链ＲＮＡ随机库,以活性蓝染料凝胶柱为筛选介质,体外进化方法筛选特异亲和活性蓝染料的ＲＮＡ分子。经８轮循环筛选,ＲＮＡ群体亲和染料的比例从小于０．０３％上升至２２．４％。     

琼脂糖凝胶电泳

Ⅰ琼脂糖凝胶 琼脂糖凝胶电泳是在卧式电泳装置上进行的,因为:(1)它为低浓度的琼脂糖凝胶提供了较好的支持体系,(2)在电泳过程中较少发生扭曲,(3)所得的DNA带比较直。最容易操作的凝胶体系,是将琼脂糖凝胶完全浸没在电泳缓冲液之下约1毫米     

抑制RANKL诱导破骨细胞分化的DNA适配子的筛选

目的:筛选能高特异性、高亲和力结合RANKL蛋白并有效抑制RANKL对破骨细胞诱导分化作用的DNA适配子。方法:首先,采用原核系统表达并纯化RANKL蛋白,通过SELEX(Systematic evolution of ligands by exponential)技术从人工合成的单链随机寡核苷酸文库中筛选能高特异性、高亲和力结合RANKL蛋白的DNA适配子。然后,用RNAfolding sever software分析适配子空间结构,以ELISA检测DNA适配子和RANKL亲和力大小并筛选出亲和力最高的一组DNA适配子用以验证DNA适配子对RANKL诱导破骨细胞分化的抑制作用。结果:(1)成功在原核系统表达并纯化RANKL蛋白;(2)筛选出能高特异性、高亲和力结合RANKL蛋白的12个DNA适配子。(3)与对照组相比,不同浓度DNA适配子能明显抑制TRAP阳性破骨细胞数量(P0.05),且浓度越高抑制效果越明显。结论:成功筛选出的DNA适配子能特异性结合RANKL蛋白并有效抑制RANKL对破骨细胞的诱导分化功能。     

实时定量PCR技术的介绍

实时定量PCR(real-timePCR)技术是近几年发展起来的新技术 ,既保持了PCR技术灵敏、快速的特点 ,又克服了以往PCR技术中存在的假阳性污染和不能进行准确定量的缺点。另外 ,还有重复性好、省力、低费用等优点。实时定量PCR技术是从传统PCR技术发展而来 ,其基本原理是相同的 ,主要不同之处是其定量的体系。下面简单介绍一下该技术定量的原理。1　荧光染料的应用荧光染料的应用是实时PCR技术能够进行定量检测的一个重要部分 ,在PCR反应体系中应用荧光标记物 ,通过监测荧光信号的累积实现对整个PCR循环进程的观察。目前主要有四种方法…     

影响琼脂糖凝胶电泳条带扭曲程度的因素

在不同的电压与载样量下,分别使用溴化乙锭（EB）与新型核酸染料GoldViewna II及GoldView对凝胶中的DNA进行染色,观察电泳条带扭曲程度,了解电压、载样量与核酸染料对琼脂糖凝胶电泳条带扭曲程度的影响.使用GoldViewna II染色,当电压≥10V/cm时,DNA条带的扭曲程度随载样量增大而加剧;当DNA载样量≥10ng时,DNA条带的扭曲程度随电压升高而加剧. 使用EB染色,仅当载样量≥50ng时,条带出现轻微扭曲,扭曲程度与电压无明显关系.结果表明使用GoldView染色,当电压不超过20V/cm或载样量不超过100ng时,DNA条带不扭曲.在琼脂糖凝胶电泳中,若要避免DNA条带扭曲干扰实验结果,使用GoldViewna II染色,若DNA载样量≥10ng,应控制电压≤5V/cm;使用EB染色,载样量应≤50ng;使用GoldView染色,可以使用20V/cm的电压缩短实验时间.     

大黄鱼耐低温性状相关微卫星标记的筛选

鱼类的耐低温性状是一种重要的经济性状。为了初步分析大黄鱼的耐低温性状, 文章采用15对荧光微卫星标记, 以SSR-PCR方法对大黄鱼低温耐受组和正常对照组F₁代共40个个体进行了耐低温性状遗传差异分析。结果显示, 标记LYC0002在两组样品中共扩增出5个等位基因(片段大小分别为112 bp、110 bp、108 bp、106 bp和104 bp), 其中LYC00021_{12 bp}等位基因在低温耐受组的出现频率达60%, 而在正常对照组中的频率为零, 表明该等位基因对大黄鱼的温度敏感特性有较明显的偏好性, 可能与某种耐低温基因存在一定的连锁关系。此外, 对LYC0002_{106 bp、}LYC0002_{108 bp}、LYC0002_{110 bp} 和 LYC0002_{112 bp} 4个等位基因分别进行了回收、克隆及测序。序列比对结果显示, LYC0002_{112 bp}等位基因含有10个(CA)重复单元, 而其他3个等位基因依次缺失1个(CA)重复单元, 说明LYC0002在本研究样本中的突变方式为微卫星逐步突变模型(Stepwise mutation model, SMM)。     

假单胞菌S-59对多种染料的脱色和降解

从受染料长期污染的污泥样品中分离到28株对多种染料具有脱色能力的细菌,其中一株假单胞菌S-59号菌对79种染料均有脱色作用。该菌对酸性红B 2GL (简称酸性红B)和活性桔K₂GV的脱色活力高达4.48—4.43mg(染料)·g^-1(细胞湿重)·h^-1。对阳离子红2GL和酸性红B在浓度为1×10^-1mol/L时其半脱色时间只有0.5小时。染料浓度在100 mg/L以上时会抑制菌的脱色率,而对菌生长的抑制作用则取决于不同     

高分辨率熔解——SNP及突变研究的最新工具

随着分子生物学技术的不断发展,人们得以不断深入的研究单核苷酸多态性（SNP）以及突变与表型和疾病的相关性;相应的,人们对SNP及突变研究的关注也推动了相关研究手段的不断发展,使其在方法学上得以不断推陈出新。高分辨率熔解（high resolution melt,HRM）是近年来发展出的最新的SNP及突变研究工具,HRM因其高通量、低成本、不受检测位点的局限,且真正实现SNP的闭管检测而广受国外科研工作者的关注。该文对HRM技术与其他相关研究手段进行了比较,并对HRM技术的特点、应用进行了阐述。     

一种pH稳定的黄色漆酶的快速纯化和性质特征

通过丙酮沉淀和 DEAE- cellulose DE52 柱层析, 快速、有效地从一株白腐菌 Trametes sp. SQ01 的发酵液中纯化了漆酶。纯化的漆酶并非传统漆酶那样呈现蓝色, 而是一种黄色蛋白。以 ABTS 为底物时, 该酶的最适 pH 和温度分别是 pH 4.5 和 70°C, Km 为 0.029 mmol/L。T. SQ01 漆酶在 pH 3.0~11.0时, 酶活相对稳定, 在 pH 5.0 时最为稳定, 是目前报道的 pH 稳定性最好的漆酶。低浓度的金属离子(1 mmol/L) Cu2+、Mg2+ 、Ca2+ 和Co2+ 对漆酶有促进作用, 而高浓度(5 mmol/L)的Co2+、Zn2+、 Mn2+、Mg2+ 却抑制漆酶酶活。SDS 对该酶有激活作用, 当其浓度为1 mmol/L时, 漆酶相对酶活达到128%。DTT对漆酶强烈抑制, 即使是浓度为1 mmol/L, 亦可完全抑制漆酶酶活。纯化后的漆酶对亮蓝(RBBR) (100 mg/L)的脱色能力显著, 0.5 U/mL 的漆酶在 10 min内即可达到 80%的脱色率。T. sp. SQ01 漆酶的快速纯化以及高效脱色的能力表明该酶在染料脱色降解方面有着广阔的应用前景。     

一株脱色真菌的鉴定及脱色特性的初步探讨

从废水环境中分离筛选到一株高效染料脱色真菌, 根据形态学及显微特征初步鉴定为泡盛曲霉(Aspergillus awamori), 命名为Asaw117; 从偶氮类、蒽醌类和氧醌类中选取8种不同染料进行脱色分析表明, 该菌株对0.1 g/L蒽醌类染料还原蓝RSN的脱色率可达100%; 采用不同培养基及不同种类碳氮源进行试验比较, 菌株在查氏培养基中生长慢, 但脱色效果最好, 在马铃薯培养基中生长旺盛, 脱色效果次之。此外, 菌株Asaw117能利用还原蓝RSN作为氮源, 但不能利用其为碳源; 几种碳氮源组合实验中, 菌株在蔗糖、硝酸铵组合的査氏培养基脱色效果为好。因此对处理印染废水具有较好的应用潜力。