定量蛋白质组学分析方法及应用

蛋白质组学经历了近10年的发展,现在已经初具规模。但是由于它是动态地观察生物体不断变化的所有蛋白质,所以技术难度非常之大。为使研究简化并更具针对性,人们着重进行比较蛋白质组学的研究。为了具体量化这些蛋白质的变化产生了定量蛋白质组学,近几年各种标记技术的进步使得该学科得以迅猛发展。     

二次中和法制取菜籽复合氨基酸新工艺研究

为得到高质量的菜籽复合氨基酸,以脱皮菜籽粕为原料,研究了硫酸水解制备复合氨基酸的新工艺一二次中和法,解决了氨基酸脱色和副产品植酸的利用问题。水解的最佳工艺参数是3mol·L-1的H2SO4水解18h;ca(OH)2作中和剂,第一次中和和脱色的最佳pH为2-4,第二次中和的最佳pH为6.5-7.0,中和后的溶液经减压浓缩,喷雾干燥,制得菜籽复合氨基酸。复合氨基酸得率≥40％,纯度≥40％;副产品植酸钙得率10％左右,纯度40％-50％。     

一色齿毛菌CB1对活性染料的脱色研究

前期工作中采用组织分离法分离、纯化得到一白腐真菌CB1,本研究进一步观察菌株CB1形态特征和培养特性,克隆菌株CB1的ITS基因序列,对菌株CB1的ITS序列进行同源性比对和系统进化分析,完成菌株CB1综合的鉴定。同时对菌株CB1脱色两种活性染料进行了研究,探讨菌株CB1脱色活性染料的能力。结果表明,菌株CB1形态特征和培养特性与一色齿毛菌Cerrena unicolor特征基本吻合,菌株CB1的系统进化分析表明菌株CB1的ITS序列与一色齿毛菌的ITS序列有较近的进化关系,形态学和分子生物学综合鉴定菌株CB1为C.unicolor CB1。染料脱色结果表明,菌株CB1可以明显脱色活性黑和活性红染料,与脱色活性黑相比,菌株CB1可以更有效地脱色活性红染料,在脱色12d时,菌株CB1对浓度为10、50、100、250、500mg/L的活性黑脱色率分别为96%、93%、65%、55%、40%,菌株CB1对浓度为10、50、100、250、500mg/L的活性红在12d时的脱色率分别为98%、95%、91%、87%、83%。     

基于PCR技术的miRNA定量检测方法

microRNA(miRNA)是一类广泛存在于真核生物中,不编码蛋白质的短序列RNA,它广泛参与真核生物的生长发育、新陈代谢和应激反应等生命活动。但绝大多数miRNA的生物学功能还不清楚,通过灵敏的定量检测方法,了解miRNA在不同组织部位的时空表达,是探究其功能的重要环节。现着重介绍了2类7种基于PCR技术的miRNA定量检测方法的基本原理和实验流程,并分析了这些定量检测技术间的异同和适用范围。     

褐变蚕蛹分离蛋白脱色与改性研究

研究了褐变蚕蛹分离蛋白脱色方法及其酸酐、硫酸锆改性。用酸性乙酸酐法处理蚕蛹分离蛋白质 ,可获得白色脱色物 ,其最佳条件是 ,蚕蛹分离蛋白∶乙酸酐∶H2 O2 =1∶1.2 5∶1.5、温度≥ 80℃、时间≥ 30min。过氧乙酸的作用可能是使参与褐变的赖氨酸ε 氨基重新游离并断开胱氨酸之间的二硫键。乙酸酐或顺丁烯二酸酐修饰赖氨酸ε 氨基的最适条件是 :脱色蛋白∶乙酸酐 (或顺丁烯二酸酐 ) =1∶0 .3(或 0 4 )、pH 9.0～ 9.5、温度≤ 4 5℃、时间 6 0min。硫酸锆修饰氨基和羧基的最适条件是 :脱色蛋白∶硫酸锆 =1∶0 .0 4、pH≤ 3.0、温度≥ 80℃、时间 10min。脱色蛋白经过乙酸酐或顺丁烯二酸酐、硫酸锆修饰 ,其白色可稳定 ,在pH 2～ 12及 80℃条件下均不变色。在碱性条件下 ,H2 O2 可部分氧化蚕蛹分离蛋白褐色 ,获得乳黄色脱色物 ,其最适条件是 ,蚕蛹蛋白∶H2 O2 =1∶1.5、pH 9.0～ 9.5、温度≥ 80℃、时间≥30min。蚕蛹蛋白褐变的原因可能主要是其赖氨酸ε 氨基与氨基葡萄糖在碱性加热条件下发生Marl laid反应所致。此外 ,蛋白质中游离α 氨基、谷氨酸γ 羧基及天门冬氨酸β 羧基可能也参与了褐变反应     

粗毛栓菌产漆酶对考马斯亮蓝的脱色降解

粗毛栓菌粗酶液经聚丙烯酰胺凝胶电泳,在CBBG－250染色后,漆酶带处有一透明圈,经纯化漆酶和CBBG－250溶液直接作用以及菌体的培养结果证实,漆酶对CBBG－250具有一定的脱色降解作用,在漆酶活力达118u/ml时,CBBG－250溶液在595nm波长的光吸收60min内下降了32．4％。该粗毛栓菌产漆酶对工业染料废水也具有一定的降解脱色作用。     

漆酶高产工程菌构建及漆酶对RBBR的脱色作用

研究提取产漆酶白腐菌 (Fomelignosus)的总RNA ,利用RT PCR克隆到漆酶的cDNA ,并将其克隆到表达载体pGAPZA ,重组质粒经线性化、电激转化PichiapastorisGS115、通过底物显色反应筛选漆酶生产工程菌株 ,在最适培养条件下该菌株产酶活力高达 9 0 3U·mL-1。纯化得到漆酶对RBBR(RemazolbrilliantblueR)有很好的脱色作用 ,该酶的最适脱色pH为 5 0 ,最适脱色温度为 30℃。当溶液中漆酶活力为 1 0U·mL-1,在最适脱色条件下作用12h ,10 0mg·L-1RBBR溶液脱色率可达 90 %以上。     

染料木素体外抑制人低密度脂蛋白氧化修饰作用

为探讨染料木素对人低密度脂蛋白(LDL)氧化修饰的影响,采用铜离子(10 umol/L)体外氧化LDL的方法,观察大豆异黄酮主要成分染料木素(genistein)对LDL氧化过程中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量和维生素E(VitE)水平的影响。结果:10 umol/LCuSO4与100 mg/L LDL共同孵育18 h,MDA含量明显升高,VitE含量明显降低,染料木素(0.25、1.25、2.5、12.5、25、50、125、250 umol/L)能显著降低MDA含量,升高VitE含量(P<0.01,P<0.05,P<0.02),且呈剂量依赖性。提示一定浓度范围的染料木素体外有抗LDL氧化修饰作用。     

白腐真菌对染料废水脱色及降解的研究

染料废水是最难处理的工业废水之一,近年来许多学者就白腐真菌对染料废水的脱色进行了广泛的研究,系统介绍了白腐真菌对染料脱色和降解作用的研究进展,脱色机理及其影响因素,旨在为以后真菌对染料废水的脱色及降解提供参考和依据。     

温特曲霉HD1的鉴定及其对氧蒽类染料脱色特性的研究*

从土壤中分离到I株染料脱色真菌,经鉴定命名为温特曲霉HD₁(aspergillus wentiiWehmer HD₁)。该菌对氧蒽类染料虎红具有很强的脱色能力。温度在28～40℃之间,HD₁对虎红的脱色率为93～99％,最适脱色温度为33℃;pH值在4.0～8.0之间,其脱色率为89．3～98．8％,最适脱色pH值为6.0。培养基、碳源、氮源及接种量对其脱色率均有影响。该菌对虎红的脱色酶为组成酶,主要分布在细胞内。染料的加人能改变脱色酶在胞内外的分配比例,加速胞内脱色酶的合成。虎红脱色产物的紫外可见光光谱分析表明,可见光区544.8nm处的吸收峰完全消失,而紫外光区的吸收峰则减弱、移位、消失(244～277nm)或稍有增加(242nm以下)。