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王棣 《微生物学免疫学进展》2012,(2):94-94
<正>为开发肠道病毒71(EV71)疫苗,我们先前构建了重组杆状病毒(Bac-P1-3CD)共表达EV71 P1(在多角体病毒启动子控制下)和3CD(在P10启动子控制下)蛋白。这些蛋白由3CD蛋白酶引起P1的分解,并在Sf-9细胞里自装配成病毒样颗粒(VLPs)。假定降低3CD的表达可减少在P1表达的竞争并提高VLPs的收率,因此我们构建了表达3CD的Bac-P1-C3CD和Bac-P1-I 3CD(分别受控 相似文献
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以黑曲霉(A.niger)TCCC41013的总RNA作为模板,通过RT-PCR扩增出含自身信号肽的脯氨酸蛋白内肽酶基因,将其插入pUCm-T载体上,经PCR和酶切鉴定后进行测序并分析.所克隆的PEP基因全长为1 581bp,编码526个氨基酸残基,成熟肽为504个氨基酸残基.与GeneBank中已报道的A.niger CBS513.88的PEP序列同源性最高,达到99.75%.脯氨酸蛋白内肽酶是一种新型的丝氨酸蛋白酶,黑曲霉PEP与已克隆的其他菌种的PEP同源性不高. 相似文献
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为明确Cry2Ab和Cry1Ac2种Bt杀虫蛋白单用与混用对棉铃虫Helicoverpa armigera(Htibner)中肠主要蛋白酶活性的影响,本文测定了取食含不同Bt蛋白人工饲料后棉铃虫中肠总蛋白酶、类胰蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶活性的差异。结果发现:Cry2Ab处理12h后对棉铃虫中肠总蛋白酶影响不大;对类胰蛋白酶的影响最大,除最高浓度处理外,其他浓度处理后棉铃虫类胰蛋白酶的活性明显高于对照;但对类胰凝乳蛋白酶活性的影响呈倒“V”字型,只有6.67ug/gCry2Ab处理后的棉铃虫酶活力显著高于对照,其他浓度处理与对照差异不显著或略低于对照;随着取食含Cry2Ab饲料时间的增加,棉铃虫中肠类胰蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶的活性比对照显著增加;与对照相比,处理36h后类胰蛋白酶活性最高可增加到6.43倍。Cry1Ac处理棉铃虫12h后总蛋白酶、类胰蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶活性都明显增加,而且与处理浓度呈正相关;但是24h后,处理后棉铃虫的总蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶活性明显降低,只有类胰蛋白酶活性仍高于对照,但活性增长倍数低于12h时的处理。Cru2Ab和Cry1Ac2种蛋白混用处理棉铃虫后,2种酶的酶活力基本低于Cry1Ac和Cry2Ab单用的酶活力之和;只有2种蛋白浓度均为2.22ug/g混用时,处理12h后类胰蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶的活性高于2种蛋白单用时酶活力之和,且都显著的高于对照。 相似文献
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曲酶F_(23)是一株角质蛋白酶分泌型菌株。我们研究了各种发酵条件如碳源、氮源等对产酶能力的影响,确定了适宜的发酵条件。摇瓶发酵培养基以1%的玉米浆为氮源,1%的玉米粉为碳源,0.3%的羽毛粉为诱导物及各种无机盐和维生素等。最适发酵pH范围为6.5~7.5,最适发酵温度为28℃~32℃,转速为180rpm,发酵102h左右酶活性达238ku/ml。 相似文献
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丝氨酸蛋白酶是昆虫体内一类重要的消化酶, 为了了解该类酶的分子特性及功能, 本研究利用粉纹夜蛾Trichoplusia ni围食膜蛋白多克隆抗体筛选华北大黑鳃金龟Holotrichia oblita中肠cDNA表达文库, 首次得到编码华北大黑鳃金龟丝氨酸蛋白酶cDNA序列, 命名为HoSP1(GenBank登录号为FJ573146)。序列分析表明, 该基因长902 bp, 开放阅读框(ORF)长783 bp, 编码260个氨基酸, 推测分子量和pI值分别为26.7 kDa和4.19, 不含有N-糖基化位点, 但在Thr157处有一个O-糖基化位点, 含有6个保守的半胱氨酸残基, 组成3对二硫键, 对于维持蛋白质的三级结构起着重要的作用。通过与几种丝氨酸蛋白酶的比对发现, 该酶具有组氨酸(His)、 天冬氨酸(Asp)、 丝氨酸(Ser)催化中心, 与褐新西兰肋翅鳃金龟Costelytra zealandica的14种丝氨酸蛋白酶有明显的相似性, 其中与CzSP3的序列一致性最高, 为52.47%。把该基因与pET21b载体重组后, 进行体外表达, 以BTEE为底物, 测得该酶的活力为0.0378 μmol/mg·min。HoSP1基因的克隆及体外表达为进一步研究该酶在华北大黑鳃金龟体内的表达及功能提供了依据。 相似文献
60.
S-PI对纯化的香菇酸性蛋白酶具有强烈的抑制作用,10μmol/L的S-PI可使酶活降低77%,这种抑制属于可逆竞争抛物线型抑制。经25μmol/L酸性蛋白酶水解6小时后,香菇胞外酸性磷酸酶的活性从24.6单位降低到20.8单位,同时C1酶和Cx酶的活性分别比对照降低了76%和58%,这表明香菇酸性蛋白酶不仅直接左右着香菇发育的氮代谢,同时也间接地影响着碳代谢及能量转换。 相似文献