人骨髓基质细胞输注裸鼠后的体内分布

采用密度梯度离心和差速贴壁法分离培养人骨髓基质细胞.对细胞进行形态观察、表型分析、细胞生长曲线和成骨分化潜能测定.然后将第4代细胞通过尾静脉输注到未经任何处理的裸鼠体内,移植1周和4周后,利用RT-PCR检测人Alu基因在裸鼠不同脏器组织中的表达以判断人源性供体细胞的植入情况.结果表明培养的人骨髓基质细胞为CD34 -CD45-成纤维样细胞,并具有向成骨分化的能力,但第1至第5代人骨髓基质细胞增殖速度无显著性差异(P＞0.05).经尾静脉输注后,人源性供体细胞可在肺、肝、脾、肾、肌肉、心、肠、脑等多种脏器或组织中均有不同程度的分布.     

minTBP-1/IGF-1融合蛋白钛涂层对高糖高脂环境下成骨细胞分化活性的影响

目的:评价自行设计的minTBP-1与IGF-1融合蛋白涂层修饰的纯钛表面对高糖高脂环境下成骨相关基因及蛋白表达的影响。方法:借助互联网Prot Param工具设计并筛选出亲水性较高的minTBP-1与IGF-1融合蛋白,用于修饰钛表面,分别将正常成骨细胞和高糖高脂环境下培养的成骨细胞接种于其表面,以钛表面无涂层的正常成骨细胞为对照组,通过碱性磷酸酶(ALP)、茜素红S染色及定量,比较成骨细胞的生物学特性;1周、2周时,Real-time PCR检测成骨细胞ALP、Ι型胶原、Runx2和OCN基因表达水平的变化;1周、2周和3周时,Western Blot分别检测成骨细胞ALP、OCN蛋白的表达量。结果:高糖高脂环境下培养的成骨细胞扁平、呈不规则多边形,其ALP的表达、钙化结节形成均低于正常成骨细胞(P0.05)。高糖高脂环境下,在目标融合蛋白修饰的钛表面接种成骨细胞1周时,ALP基因及蛋白均有明显表达,与正常成骨细胞相比无统计学差异(P0.05);2周时Ι型胶原、Runx2以及OCN的基因明显高表达,第3周时OCN蛋白显著表达,与正常成骨细胞相比无统计学差异(P0.05)。结论:minTBP-1与IGF-1融合蛋白涂层修饰的纯钛表面有利于改善高糖高脂环境下成骨细胞的生物学活性、促进了成骨相关基因及蛋白的表达,有望为2型糖尿病条件下钛-骨结合的种植体表面改性提供新策略。     

环磷腺苷葡胺联合培哚普利在慢性心力衰竭中的应用研究

目的:分析环磷腺苷葡胺联合培哚普利在慢性心力衰竭患者的应用价值。方法:以2013年1月至2015年12月新疆医科大学第五附属医院心血管内科诊治的慢性心力衰竭患者90例为研究对象,将其按照就诊病历顺序号分对照组、培哚普利组和联合组,每组30例。对照组患者接受常规治疗,培哚普利组患者在对照组的基础之上加用培哚普利,联合组患者在培哚普利组的基础之上加用环磷腺苷葡胺,三组患者均连续治疗2周,比较三组临床疗效及治疗前后患者的左心室重塑情况(左心室收缩末期内径(LVESD)和舒张末期内径(LVEDD))及左心室心功能(左心室射血分数(LVEF)),患者活动能力(6 min的步行距离)以及血浆脑钠利肽(BNP)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)、胱抑素(Cys-C)水平。结果:经过2周的治疗,培哚普利组和联合组的治疗总有效率分别为86.67%和96.67%,均显著高于对照组的66.67%(P0.05),但培哚普利组和联合组比较差异无统计学意义(P0.05);三组患者的LVEDD、LVESD、血浆BNP水平均较治疗前显著降低,且培哚普利组和联合组均显著低于对照组(P0.05),联合组LVESD、血浆BNP水平显著低于培哚普利组;三组患者的LVEF和6 min步行距离、血浆IGF-1水平均较治疗前显著升高,且培哚普利组和联合组均显著高于对照组,联合组血浆IGF-1水平、LVEF和6 min步行距离显著高于培哚普利组(P0.05);联合组和培哚普利组治疗后的Cys-C水平治疗前显著降低,且联合组和培哚普利组显著低于对照组,联合组血Cys-C水平较培哚普利组更低(P0.05)。结论:环磷腺苷葡胺联合培哚普利治疗慢性心力衰竭临床疗效显著,可较单药治疗显著改善患者左心室重构情况、心室射血功能和活动能力,可能与协同调节患者血浆BNP、IGF-1、Cys-C水平有关。     

胆管上皮细胞TLR3内源性活化在原发性胆汁性肝硬化中的作用

目的:探讨胆管上皮细胞中Toll样受体3(TLR3)内源性活化对原发性胆汁性肝硬化损伤的影响。方法:体外培养人肝内胆管上皮细胞(HiBEC),并通过冻融处理制备坏死HiBEC样本。将死亡样本与活样本混合培养6h,以制备TLR3内源性活化样本,将其标记为观察组;以核酸酶处理坏死细胞及活细胞,并混合培养6h,以制备对照样本,将其标记为对照组。检测2组细胞凋亡率、TLR3及β干扰素Toll样受体结构域衔接蛋白(TRIF)表达水平、Caspase-3活性。结果:观察组凋亡率明显高于对照组,TLR3及TRIF相对表达量明显高于对照组,细胞Caspase-3平均表达量明显高于对照组,上述差异均有统计学意义(P0.05)。结论:TLR3的内源性活化可导致HiBEC凋亡,在原发性胆汁性肝硬化的发生及发展中可能有一定促进作用。     

家族性高胆固醇血症样表型遗传异质性的分子基础

家族性高胆固醇血症(FH)是由于低密度脂蛋白受体(LDL—R)基因突变,致使细胞表面LDL-R蛋白功能缺陷,导致血浆低密度脂蛋白(LDL)大幅度增高,并可导致早发冠心病。“FH”已经成为携带LDL-R基因突变患者的同意词,但日益增多的研究证实,其他6种基因突变也可通过不同机制导致FH样表型。这些致病基因的发现．促进胆固醇代谢的研究进入新领域,有助于深入探讨胆固醇代谢的调节机制,并将为FH样表型的诊断和治疗提供新的理论依据。文章就有关FH样表型遗传异质性的分子基础研究的近况作一简要综述．以引起人们的关注。     

A virus-type specific serological diagnosis of flavivirus infection using virus-like particles

Many flaviviruses are emerging and reemerging pathogens, such as West Nile virus (WNV), dengue virus (DENV), yellow fever virus (YFV), and Japanese encephalitis virus. Serological assay is the dominant method for diagnosis of flavivirus infections in human. Because antibodies generated during flavivirus infections cross-react with other flavivirus members, plaque reduction neutralization test (PRNT) is the only available assay to determine the infecting flavivirus type.Since PRNT requires culturing raw viruses, it must be performed in biosafety level-3 or level-4 containment for many flaviviruses, and takes more than ten days to complete. To overcome these problems, we have developed flavivirus viral-like particles (VLPs) that could be used to replace raw viruses in the neutralization assay. The VLPs were prepared by trans packaging a luciferase-reporting replicon with viral structural proteins. This novel assay involves three simple steps: (ⅰ) VLPs from a panel of flaviviruses are incubated with flavivirus-infected sera at 37℃ for 1 h; (ⅱ)the neutralized VLPs are used to infect Vero cells; and (ⅲ) the infected cells are measured for luciferase activities at 22 h post-infection. The virus type whose VLP is most efficiently neutralized by the serum specimen (as quantified by the luciferase activities) is the etiologic agent. As a proof-of-concept, we show that a WNV-infected mouse serum neutralized the WNV VLP more efficiently and selectively than the DENV and YFV VLPs. Our results demonstrate that the VLP neutralization assay maintains the "gold standard" of the classic PRNT; importantly, it shortens the assay time from ＞10 days to ＜1 day, and can be performed in biosafety level-2 facility.     

云南大中山黑颈长尾雉栖息地选择周年变化

采用比较利用和可利用栖息地的方法,分别对云南大中山黑颈长尾雉秋冬季、春季和夏季栖息地展开调查。检验和Bonferroni置信区间分析结果表明,黑颈长尾雉不同季节均偏向选择常绿阔叶林,偏向选择或回避选择的乔木、灌木和草本的种类不尽相同。利用和可利用样方差异性检验显示,不同季节对地形因素的选择性不明显,仅夏季距水源距离一个因子差异显著;植被因子中,春季差异显著的仅有乔木层盖度因子,夏季有乔木密度、乔木层盖度、落叶层盖度和草本层盖度等4个因子,秋冬季有乔木层盖度、草本层盖度和藤本密度等3个因子。主成分分析表明,不同季节利用样方负荷绝对值较大的因子在各主成分中的序位不尽相同,即栖息地选择的主要生态因子随季节发生变化。单因素方差分析和逐步判别分析表明,秋冬季与春季栖息地特征较接近,而与夏季差别较大。χ2     

不同提取方法及上样量对牡丹试管苗茎基部蛋白双向电泳的影响

为建立一套适合于牡丹试管苗茎基部蛋白的双向电泳技术,以便更好地利用蛋白质组技术研究牡丹试管苗不定根的发生机理,本研究比较了三种不同蛋白质提取方法对双向电泳结果的影响,并在蛋白质上样量方面进行了比较。结果表明,乙酸铵/甲醇酚提取法所得2-DE图谱的蛋白点很少,仅检测到45个,且较模糊,有明显的拖尾现象,分辨率很低;乙醇/乙醚丙酮法所得的蛋白点也较少(101个),较模糊,且横竖纹干扰较大;三氯乙酸/丙酮法所得蛋白点数较多,可检测到434个清晰的蛋白点,且形状规则,重复性好,适合后续分析,操作也较为简便。用三氯乙酸/丙酮法提取蛋白,采用800μg、1000μg和1200μg三个不同的上样量进行双向电泳,在上样量为1200μg时(IPGpH3～10,24cm),蛋白质在12%SDS-PAGE胶上得到了较好的分离,在2-DE图谱上可分辨出562个蛋白点。因此,三氯乙酸/丙酮法是较适合于牡丹试管苗茎基部蛋白质提取的方法,1200μg是较为合适的上样量。     

丛枝菌根共生的信号转导及其相关基因

大多数植物根系能够与某些真菌形成相互依存、互惠互利的菌根共生关系.植物在提供给丛枝菌根真菌赖以生存的碳源的同时,也通过真菌从土壤中吸取矿质营养.丛枝菌根能够促进植物生长,提高植物抗逆性和抵御外界不良环境,对提高农林业生产效率、增强生态系统稳定性及维护生物多样性具有重要的意义.菌根的形成是一系列信号分子交换传递和共生相关基因表达调控的结果.在信号转导途径中,共生受体样蛋白激酶、离子通道和钙/钙调依赖性蛋白激酶基因的表达对菌根的形成是不可或缺的.就丛枝菌根共生的信号转导机制以及信号途径中3个必需基因的结构、功能及研究现状进行了综述.     

临床标本中酵母样真菌的分离鉴定和药敏结果分析

目的调查目前临床标本中酵母样真菌感染现状及耐药性情况。方法常规分离临床标本中的酵母样真菌,用科玛嘉显色培养基及法国生物-梅里埃API20CAUX鉴定系统鉴定菌种,并用K—B法进行药敏试验。结果研究期间共分离到193例有临床意义的酵母样真菌,检出率较高的依次为白假丝酵母菌（62．7％）,热带假丝酵母菌（20．2％）,光滑球拟酵母菌（9．3％）。在6种抗真菌药中,对伊曲康唑、氟康唑的耐药率增高。结论近年来由酵母样真菌感染引起的疾病及其对常用抗真菌药物的耐药率有明显增加,应加强真菌的检测和耐药性监测工作,以指导临床合理使用药物。