常规聚丙烯酰胺凝胶电泳快速检测胰蛋白酶抑制剂的方法

ＳＤＳ—ＰＡＧＥ－　明胶电泳是检测蛋白酶抑制剂的常用方法,基本原理为：聚丙烯酰胺凝胶中加入ＳＤＳ和明胶,　　ＳＤＳ使蛋白酶抑制剂发生可逆变性。电泳完毕,用　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－　１００恢复凝胶板中蛋白酶抑制剂的活性,凝胶板置于蛋白酶溶液里保温,含蛋白酶抑制剂部位的明胶不被蛋白酶水解而呈现蛋白染色带。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ一明胶电泳检测蛋白酶抑制剂时,在同一块凝胶板上可同时检测酸性、碱性及中性的蛋白酶抑制剂,但电泳后处理（包括复性,酶解,漂洗和染色）时间长（约２０ｈ）,而且对于同一样品中分子量相近的蛋白酶…     

聚乙烯醇-明胶复合膜固定化重组大肠杆菌NAD激酶的研究

为提高烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)激酶的稳定性,采用复合膜对NAD激酶进行固定化研究。选用聚乙烯醇(PVA)、聚乳酸(PLA)、海藻酸钠(SA)和明胶(GEL)膜材料固定化NAD激酶。通过单因素实验确定最佳固定化条件为:PVA∶GEL为4∶1,加酶量为0.6 mL,固定化时间为6h,固定化温度为35℃,此时酶活力回收率达到最高值84%。固定化酶酶学性质分析结果表明,与游离酶进行比较,固定化后NAD激酶的最适温度由50℃提高至55℃,最适pH由8.0降至7.0,NAD激酶的热稳定性和pH稳定性均得到显著提高,但固定化酶的亲和力降低。固定化NAD激酶重复利用6次后,酶活性依然可维持初始酶活性的75%以上,表明聚乙烯醇-明胶复合膜固定化酶具有良好的操作稳定性。     

检测蛋白酶活性的双向凝胶电泳技术

介绍了双向凝胶电泳技术和蛋白酶活性检测相结合的蛋白酶电泳检测方法.第一向采用等电聚焦,第二向采用明胶-SDS-PAGE,经氨基黑染色后,可以得到清晰的蛋白酶活性斑点.文中对紫萍半叶状体衰老前后蛋白酶活性和种类的变化作了探讨.     

聚乳酸降解菌株筛选鉴定及降解过程优化

【目的】筛选能够降解聚乳酸的微生物, 提高聚乳酸的降解速率并鉴定聚乳酸降解酶种类。【方法】以明胶为唯一碳源, 筛选能够降解聚乳酸的微生物; 通过优化明胶添加浓度、聚乳酸添加量以及金属离子种类提高聚乳酸的降解速率; 通过分析降解过程中代谢产物和酶活力变化明确聚乳酸降解酶类别。【结果】筛选获得一株聚乳酸降解菌株, 鉴定为Lentzea waywayandensis; 经优化培养, 聚乳酸在25 d后失重84.8%; 降解过程中, 检测到乳酸的产生, 体外酶活实验仅检测到蛋白酶活力。【结论】明胶作为唯一碳源适用于聚乳酸降解菌株的筛选; 明胶作为碳源的同时可以作为诱导剂诱导菌株L. waywayandensis降解聚乳酸; 此外, 研究表明蛋白酶在聚乳酸降解过程中发挥重要作用。