验证性筛选PDZ结构域结合配体文库快速研究HtrA2/Omi PDZ结构域的结合特性

HtrA2/Omi是一种线粒体丝氨酸蛋白酶, 在哺乳动物细胞中具有双重功能, 即诱导细胞凋亡和参与维持线粒体活性的动态平衡. PDZ结构域是最重要的蛋白质相互作用结构域之一, 参与多种生物学过程, 如细胞信号转导、蛋白质降解、细胞骨架组织等. 最近研究发现, HtrA2/Omi蛋白的PDZ结构域与配体的相互作用, 可以调节HtrA2/Omi蛋白自身的水解酶活性.以HtrA2/Omi PDZ结构域为研究对象, 用酵母双杂交系统验证性筛选PDZ结构域结合配体文库, 快速研究该结构域的结合特性, 并在人类全蛋白质组范围内预测并发现该结构域新的相互作用蛋白, 最后分析这些新的相互作用所能够形成的最小相互作用网络来评估其可信度. 研究结果揭示了HtrA2/Omi PDZ结构域新的结合特性, 即: 不仅能够结合已报道的II类PDZ配体而且还可以结合I类和III类PDZ配体, 并且配体-3位氨基酸具有一定范围内的可变性. 而且, 发现了7个新的HtrA2/Omi PDZ结构域相互作用蛋白, 为进一步阐明HtrA2/Omi蛋白的生物学功能提供了重要线索. 同时证明了验证性筛选目的结构域结合配体文库, 这一结构域结合特性研究新策略的实用性和高效性.     

植物双元表达载体pCRI1210的构建及其功能验证

pBI121是转基因研究中的常用载体,但是其多克隆位点相对较少,所携带的GUS基因检测较为复杂。为了增加其多克隆位点,增强其表达效率,简化其检测方法,本研究在pBI121载体的基础上,在其骨架中插入含有CaMV35S启动子、棉花β-tubulin基因内含子和CaMV 35S polyA终止子的干涉表达框,该表达框含有GFP报告基因。通过验证,所插入的干涉表达框能够正常表达插入的外源基因,且GFP基因可以正常表达。该载体被命名为pCRI1210,它是一种双元植物表达载体,既可以用来当作表达载体,又可以用作干涉载体。本研究为转基因研究提供了一种非常实用的工具。     

江西省退化石灰岩红壤区重建森林土壤水分与降水量和蒸发量的关系

采用时间序列分析法,对江西省修水县退化石灰岩红壤区4种主要重建森林类型的土壤（0～40 cm）含水量与降水量、蒸发量之间的相关关系进行了研究.结果表明：研究区各重建森林前一个月的土壤含水量对当月整个土壤剖面（0～40 cm）平均土壤含水量和当月20～40 cm土层土壤含水量具有较强影响,对当月0～10 cm土层土壤含水量的影响较小;研究区各重建森林20～40 cm土层土壤含水量主要受当月降水量的影响,0～10 cm土层土壤含水量主要受当月蒸发量的影响;在4种森林重建模式中,枫香纯林当月降水量与当月土壤含水量的相关系数最大,混交林模式土壤含水量的自相关系数大于纯林模式.     

宫颈癌调强放射治疗的剂量验证分析

目的:通过总结比较Eclipse和Xio两个治疗计划系统对宫颈癌调强放疗剂量验证的结果,分析评价宫颈癌调强放疗在临床应用上剂量的准确性。方法:分别用固体水模和二维电离室矩阵Mapcheck、FC65-G指形电离室在定位螺旋CT上进行扫描,断层数据通过网络传输到Eclipse和Xio两个治疗计划系统中建立验证模体。选取2013年1月至5月在本院24例宫颈癌调强治疗患者,在两个TPS(Treatment Planning Systems)上将宫颈癌调强放疗计划移植到模体上,用IBA公司的DOSE1、FC65-G指形电离室模体和Nuclear公司的二维电离室矩阵Mapcheck模体在加速器下进行点剂量和面剂量的采集。结果:Eclipse系统的12位患者随机选取24个照射野3 mm 3%面剂量的γ通过率均值为98.8%,Xio系统的12位患者随机选取24个照射野3mm3%面剂量γ通过率均值为97.7%,二者比较差别有统计学意义(P0.01)。Eclipse系统的12位患者84个照射野点剂量的误差的均值为1.2417%,Xio系统的12位患者84个照射野点剂量的误差均值为2.4892%,二者比较差别具有统计学意义(P0.01)。结论:Eclipse和Xio两个治疗计划系统都可以应用于宫颈癌临床调强放疗,但Eclipse系统的准确性优于Xio系统。     

青刺及其护肤相关传统知识的民族植物学研究

青刺(Prinsepia utilis)为滇西北多民族地区药食同源的多年生落叶灌木,被该地区的社区群众广泛使用于传统文化、医药、食用等方面。随着现代社会的发展,青刺及相关的传统知识面临消失的危险。为探讨该地区青刺资源及其相关传统知识的保护与传承,该文基于民族植物学野外调研的基础上,采用天然药物化学与药理活性测试的方法,对青刺主要传统功效的物质基础及其护肤活性进行初步研究。结果表明:(1)在滇西北多民族聚居区,青刺被广泛用于围栏防护或防风固土、皮肤外伤的治疗、食用等多种传统用途;(2)从青刺不同部位的提取物中检测到没食子酸、槲皮素等10个有护肤活性的单体化合物;(3)青刺嫩叶提取物的总黄酮含量高于其发酵产物和青刺果提取物;(4)传统利用频率最高的青刺果油呈现出较好的DPPH自由基清除活性,不同产地和工艺之间抗氧化活性有差异。该研究结果初步验证了青刺传统护肤功效的物质基础及其相关活性之间的相关性,为青刺资源及相关传统知识的保护与传承及深度研发提供了参考。     

DSSAT模型对吉林省梨树县部分主要作物的适用性

明确DSSAT作物模型对东北地区主要作物生长发育和产量模拟适用性,对进一步开展东北地区DSSAT模型应用推广研究进而保障粮食安全具有重要意义。以吉林省梨树县春小麦、大豆、谷子和马铃薯4种主要作物为研究对象,利用3年田间试验资料对DSSAT模型进行了系统评价。结果表明：DSSAT模型中春小麦、大豆、谷子和马铃薯的生育期、叶面积指数、地上生物量、茎部生物量、叶片生物量和产量的模拟值与实测值的决定系数分别为0.94～0.99、0.92～0.99、0.96～0.99和0.97～0.98,归一化均方根误差分别为12.21%～26.01%、1.67%～33.24%、1%～15.34%和3.2%～28.08%,D值均在0.994以上;其中,春小麦生育期及产量拟合程度最高,其次为叶面积指数;大豆及谷子产量及叶面积指数拟合程度最高,其次为生育期;马铃薯生育期及产量拟合程度最高,其次为叶面积指数;而作物叶面积指数、叶片生物量、茎部生物量及地上部总生物量的生长动态过程模拟结果显示,春小麦、大豆、谷子和马铃薯的决定系数均在0.84以上,归一化均方根误差分别为24.5%～38.2%、28.7%～47.4%、9....     

人C1酯酶抑制剂抗原含量ELISA检测方法的建立、验证及应用

目的 建立C1酯酶抑制剂(C1 esterase inhibitor, C1-INH)抗原含量的双抗体夹心ELISA检测方法,验证后用于C1-INH纯化工艺摸索。方法 用羊抗人C1-INH抗体作为捕获抗体,用过氧化物酶(HRP)标记的羊抗人C1-INH抗体作为检测抗体,进行棋盘滴定初步确定捕获抗体的工作质量浓度,用西门子血浆标准品进行系列稀释作为标准品经过2轮实验来确定拟合曲线和线性范围及检测抗体的工作质量浓度,用血浆标准品标定电泳C1-INH标准品(电泳纯度>92%),分析与血浆标准品的平行性来选择本方法最终使用的标准品,最终建立了C1-INH抗原含量的双抗体夹心ELISA检测方法。对此方法进行线性、准确度、精密度、加样回收率、电泳标准品稳定性的验证。将验证后的方法用于C1-INH纯化工艺的摸索及产品质量分析,并与特定蛋白检测仪的结果进行比较。结果 捕获抗体质量浓度为400.000 ng/mL,检测抗体质量浓度为400.000 ng/mL,标准曲线采用四参数方程拟合,电泳标准品的质量浓度为0.895 mg/mL,血浆标准品作为本方法标准品;标准曲线的线性范围为1.560～100...     

ELISA试剂盒检测Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗Vero细胞宿主蛋白残留量的验证

目的 验证ELISA试剂盒检测Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin strain inactivated poliovirus vaccine, sIPV)中Vero细胞宿主细胞蛋白(host cell protein, HCP)残留量的适用性。方法 用同一批ELISA试剂盒检测sIPV中Vero细胞HCP残留量,验证其专属性、重复性、中间精密度、准确度、线性、范围、定量限和耐用性等指标。结果 将样品用2种不同稀释液(样品稀释液和疫苗稀释液)稀释后,检测Vero细胞HCP残留量结果均<12.5 ng/mL,表明该方法专属性强;同一检验人员检测同一样品6次,Vero细胞HCP残留量结果均<12.5 ng/mL;不同检验人员检测同一样品6次,Vero细胞HCP残留量结果均<12.5 ng/mL,表明具有良好的重复性和中间精密度;准确度试验中回收率均在99%～106%,CV为2%;在12.5～400.0 ng/mL的线性范围内,标准曲线线性良好(R²>0.98);定量限为50.0 ng/mL;显色时间在25～35 min内对实验无影响,显色...     

关于药品生产工艺验证的新举措

在实施世界卫生组织（ＷＨＯ）和食品与药品管理局（ＦＤＡ）颁布的ＧＭＰ过程中,药品质量管理专家们发现单靠抽检样品不能反映市场上药品的实际质量,被抽检的样品结果合格,其同批药品的质量在事实上不一定符合标准。为此,他们经过多年的研究分析,应该对工艺过程的本身进行检验,即对生产工艺过程要进行验证,使ＧＭＰ概念深化到“质量保证”的新阶段     

白番红花CrCBF1基因的克隆及功能分析

该研究选取新疆地区耐寒植物白番红花为研究材料,采用RT-PCR方法,从白番红花中克隆得到白番红花CBF1的全长cDNA序列,命名为CrCBF1(GenBank登录号MF681787)。结果表明,CrCBF1基因完整开放阅读框ORF长642bp,编码213个氨基酸,分子量为23.8kD,理论等电点为4.99,具有CBF家族典型的AP2保守结构域;亚细胞定位分析显示,CrCBF1基因编码的蛋白定位于细胞核;酵母自激活分析显示,CrCBF1转录因子具有转录激活活性;酵母功能验证分析显示,过表达CrCBF1基因可以明显提高酵母的抗寒性。