盐酸氨溴索雾化吸入联合阿奇霉素静滴对支气管哮喘小儿急性发作期血清IL-10及INF-γ水平的影响

目的:探讨盐酸氨溴索雾化吸入联合阿奇霉素静滴对支气管哮喘小儿急性发作期血清IL-10及INF-γ水平的影响。方法:收集我院住院治疗的100例小儿支气管哮喘急性发作期患者,随机分为实验组和对照组,每组50例。对照组患者给予阿奇霉素10mg/kg+5%葡萄糖注射液250 mL静脉滴注,1次/d。实验组则在对照组基础上给予盐酸氨溴索3 mg/kg+5 mL生理盐水,使用超声雾化器雾化吸入,15 min/次,3次/d。治疗均5 d为1个疗程,共治疗2个疗程。治疗后,对患者热退时间、咳嗽消失时间、肺部啰音消失时间、白介素-10、干扰素-γ以及临床疗效进行检测并比较。结果:与治疗前相比,两组患者治疗后的血清IL-10、INF-γ水平均升高(P0.05);与对照组相比,实验组患者IL-10、INF-γ较高,热退时间、咳嗽消失时间、啰音消失时间较短,临床总有效率较高(P0.05)。两组患者治疗效果相比,实验组(100.0%)的治疗总有效率与对照组(96.0%)相比较高,但差异无统计学意义(P0.05)。结论:盐酸氨溴索雾化吸入联合阿奇霉素静滴能够提高支气管哮喘小儿急性发作期的临床效果,可能与其升高血清IL-10及INF-γ水平有关。     

与成纤维细胞共培养的肺泡II型上皮细胞的生物学特性

建立胎鼠肺泡II型上皮细胞(AECII)与肺成纤维细胞(LF)共培养模型,观察与LF共培养下AECII的生物学特性。倒置相差显微镜观察AECII形态和基本生长情况;RT-PCR和流式细胞术分别检测肺泡表面活性蛋白-C(SP-C)、水通道蛋白5(AQP5)mRNA及蛋白质表达;流式细胞术检测细胞周期及Ki67表达。结果显示,与LF共培养时,AECII能较好地保留其细胞形态,SP-CmRNA及其蛋白质表达明显增加,而AQP5mRNA及其蛋白质表达则明显减少;LF促进AECII增殖,使G2/M、S期细胞及表达Ki67 细胞的比率明显增多。结果提示,AECII与LF共培养时,能更好地保留其细胞形态、分化及增殖特性。     

肺泡Ⅱ型细胞表皮生长因子和转化生长因子α、β1及其受体表达的研究

分离培养成年大鼠的肺泡Ⅱ型细胞,通过斑点杂交、原位杂交和免疫组织化学染色,研究肺泡Ⅱ型细胞内表皮生长因子（EGF）、转化生长因子α和β1（TGFα、TGFβ1）及其受体基因的表达。结果显示肺泡Ⅱ型细胞可表达EGF、TGFα和TGFβ1,也可表达相应的EGF受体（EGFR）、TGFβ受体Ⅰ型和Ⅱ型（TβRⅠ、TβRⅡ）。表明肺泡Ⅱ型细胞是合成和分泌EGF、TGFα和TGFβ1的细胞之一;细胞凭借其EGFR、TβR的存在,其增殖与分化可能受EGF、TGFα和TGFβ1的旁分泌和自分泌两种途径调控。     

大鼠脑泡巨噬细胞NOS表达的细胞化学和免疫细胞化学研究

用NADPH－黄递酶细胞化学和iNOS免疫细胞化学方法,结合图像定量分析,动态研究了1μg/ml脂多糖诱导培养的大鼠肺泡巨噬细胞iNOS的表达情况。结果发现：脂多糖刺激1小时染色反应强度与对照组相比无显差异,6小时后明显高于对照组,随刺激时间延长,染色反应强度呈增高趋势,18小时后则趋于相对平稳;两种染色法显示的阳性细胞均以核周区染色反应为,实验从形态学角度表明：（1）NADPH－黄递酶细胞化学染色能够反映培养的大鼠肺泡巨噬细胞NOS表达状况;（2）脂多糖可诱导肺泡巨噬细胞iNOS表达,其主要存在于核周区胞浆中。     

麻黄碱抑制支气管平滑肌细胞增殖的机制

BK通道(large-conductance Ca2 -activated K channel)是一种大电导、电压和钙离子依赖的钾通道,存在于哺乳动物几乎所有的组织中.β1亚基是首次从平滑肌细胞中分离到的一种BK通道辅助亚基.麻黄作为一种β肾上腺素受体激动剂,是一味治疗哮喘的常用中药.利用RT-PCR和膜片钳等技术,研究麻黄治疗哮喘的作用机制.结果表明:麻黄碱(ephedrine,Eph)作为麻黄的一种主要成分,显著抑制支气管平滑肌细胞(bronchial smooth muscle cells,BSMCs)的增殖和BK通道β1亚基的表达,但是对BK通道的电流没有显著影响.     

Ghrelin抑制H2O2诱导的肺泡上皮A549细胞中IL-8的产生

目的:通过细胞培养的方法,初步研究了生长激素释放肽Ghrelin在氧化应激相关的肺泡上皮细胞炎症反应中的作用.方法:首先是用双氧水(H2O2)刺激A549细胞建立肺泡上皮细胞炎症反应模型,分别加入不同浓度的Ghrelin及普通培养基培养A549细胞,用酶联免疫吸附技术(ELISA)从蛋白水平检测上清液中IL-8的含量,采用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测炎性细胞因子IL-8mRNA的表达.结果:H2O2可以使A549细胞IL-8蛋白的释放及IL-8mRNA的表达明显升高(P＜0.05),而用Ghrelin干预后IL-8的释放及IL-8mRNA的表达被抑制,明显低于单纯H2O2刺激的模型组(P＜0.05),且随着浓度的增加Ghrelin的这种抑制作用逐渐增强.结论:分别从蛋白水平和基因水平证明了Ghrelin能够抑制H2O2诱导的肺泡上皮A549细胞中IL-8的产生,由此推测Ghrelin可能能够抑制以COPD、支气管哮喘为代表的氧化应激相关的肺部炎症反应.     

小鼠哮喘发作过程中相关炎症因子的动态变化

目的:研究实验性哮喘小鼠模型在诱导哮喘发作不同时间点外周血中细胞因子IL-13、Eotaxin、MCP-1和TNF-α以及肺部浸润的炎症细胞数量变化。方法:将25只健康6-8周龄的雌性BALB/c小鼠随机分成模型组和对照组。利用卵清蛋白(OVA)诱导建立小鼠哮喘模型,模型组(Asthma)小鼠于第0、7天经腹腔注射卵清蛋白(OVA)致敏小鼠。第14-20天连续7天用1%OVA雾化激发小鼠哮喘发作,每次20 min,观察临床症状。正常对照组(Control)小鼠以0.9%NaCL代替0VA进行腹腔注射和雾化吸入。比较两组小鼠肺组织病理切片HE染色结果、肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞分类计数及细胞因子IL-13、Eotaxin、MCP-1和TNF-α的浓度变化。结果:模型组小鼠BALF中IL-13的水平在试验早期(致敏2天)即开始上升达68.9±4.34,此时Eotaxin和MCP-1未见明显升高;致敏7天时IL-13、Eotaxin和MCP-1均明显高于对照组,分别为88.3±3.39、67.4±4.24和38.9±3.1;激发1天组小鼠BALF中IL-13、Eotaxin和MCP-1浓度持续增高至最后一次激发后1天;而TNF-α在激发1天时出现明显升高达136.9±11.9,持续到最后一次激发后1天;从激发1天肺泡灌洗液染色显微镜下观察明以淋巴细胞和嗜酸性粒细胞浸润为主。肺组织HE染色显示哮喘组小鼠气道上皮有不同程度脱落,支气管平滑肌显著增厚,血管周围水肿,炎性细胞浸润。结论:在哮喘发生过程中,IL-13水平在致敏初期即开始升高,随着继续给予OVA,Eotaxin和MCP-1水平呈现显著增高;并伴随越来越多炎症细胞在肺部浸润,TNF-α水平出现缓慢增高,进而加重哮喘发作。     

Ad-sTNFRI-IgGFc腺病毒载体的构建及其转染人气道平滑肌细胞

TNF-a是一种具有广泛生物学活性的前炎症细胞因子, 参与哮喘整个病理生理过程。可溶性肿瘤坏死因子受体(sTNFR)可以拮抗肿瘤坏死因子活性, 已被用来治疗与TNF相关的炎性疾病。将sTNFRI-IgGFc基因插入腺病毒穿梭质粒pDC316, 与辅助质粒pBHGloxΔE1, 3Cre共转染HEK293细胞, 重组产生Ad-sTNFRI-IgGFc, PCR鉴定毒种正确后, 进行扩增、纯化和滴度测定, 转染人气道平滑肌细胞, 利用RT-PCR、免疫组化方法, 流式细胞仪, ELISA检测转染后细胞中sTNFRI-IgGFc的转录和表达。实验结果证明成功构建了Ad-sTNFRI-IgGFc腺病毒载体, 感染性滴度达3×1010 TCID50/mL, 200 moi转染气道平滑肌细胞阳性率达99.32%, 转染后气道平滑肌细胞在mRNA和蛋白水平均有sTNFRI-IgGFc表达。转染上清稀释64倍后仍对TNF有拮抗活性。为将表达sTNFRI-IgGFc腺病毒基因治疗哮喘的实验研究提供了基础。     

经气管镜介入多方法联合治疗支气管结核临床应用探讨

目的:探讨多方法联合介入治疗支气管结核的有效性和安全性.方法:329例支气管结核患者根据镜下不同类型采取多种方法联合介入治疗.结果:329例强化阶段2个月结束时痰菌阴转289例(87.8.%),炎性浸润、溃疡及干酪坏死消除78/80例(97.5%),肉芽组织增生消除63/70例(90%),气道瘢痕狭窄明显改善26/32(81%),管壁软化明显好转7/15(46.6%),肺不张或肺膨胀不全总有效率82/105(78.1%).6个月后痰菌全部转阴(100%),6个月后炎性浸润、溃疡及干酪坏死肉芽组织增生消除达97.9%.管壁软化好转85.2%,肺不张治愈率95.8%,疗效确切.结论:通过电子支气管镜多方法联合介入治疗支气管结核是一种有效的方法、安全、并发症少、病人易接受等优点.     

探讨不同阶段哮喘患儿Gal-3、MPO、GM-CSF、TGF-β1水平在支气管肺泡灌洗液中的变化及临床意义

目的:探讨半乳糖凝集素-3(Gal-3)、髓过氧化物酶(MPO)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和转化生长因子-β1(TGF-β1)在不同阶段哮喘患儿支气管肺泡灌洗液中水平变化及临床指导意义。方法:选择我院2016年3月至2017年6月接诊的114例哮喘患儿(观察组)和36例非哮喘患儿(对照组)的BALF作为研究标本,分别测定细胞总数和分类计数以及Gal-3、MPO、GM-CSF和TGF-β1水平,并进行对比分析。结果:轻度和中重度患儿组与对照组支气管肺泡灌洗液中的TCS、巨噬细胞比较差异无统计学意义(P0.05),中粒细胞、嗜酸性粒细胞和上皮细胞数差异具有统计学意义(P0.05);轻度和中重度组中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和上皮细胞数差异具有统计学意义(P0.05);观察组患儿支气管肺泡灌洗液Gal-3、MPO、GM-CSF、TGF-β1表达水平高于对照组[3.59±0.49 vs 10.27±3.89]、[13.82±3.54 vs 21.03±7.05]、[123.07±25.68vs154.82±36.44]、[121.68±7.98vs221.59±44.12];中重度组患儿支气管肺泡灌洗液Gal-3、MPO、GM-CSF、TGF-β1表达水平高于轻度组[6.91±1.43 vs14.42±3.17]、[15.52±4.42 vs25.18±9.73]、[129.53±30.42vs164.78±34.03]、[171.35±21.48vs240.83±34.08];不同阶段哮喘患儿的支气管肺泡灌洗液中Gal-3与MPO、GM-CSF和TGF-β1的表达水平之前存在正相关关系。结论:哮喘患儿BALF中Gal-3、MPO、GM-CSF、TGF-β1的水平变化与病情密切相关,可作为监测哮喘病症发展的有效指标。