中药金银花药用成分的提取及抑菌实验的研究

为了研究金银花中抗菌消炎成分总黄酮、绿原酸的提取方法及其抑菌效果,本实验中用金银花的提取物对11种菌种进行筛选,并对其中有抑制作用的菌种进行了最小抑菌浓度的实验。结果表明金银花的提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有较强的抑制作用,对金黄色葡萄球菌的MIC为6．25mg／ml,对大肠杆菌的MIC为12．5mg／ml。     

环境样品中DNA的分离纯化和文库构建

采用研磨 /冻融和SDS/蛋白酶K热处理等理化方法 ,直接从性质不同的环境样品中提取和纯化混合基因组DNA。所获得纯品DNA的产量为每克样品 2～ 1 6μg。对纯品DNA进行限制性内切酶处理后 ,构建了以pUC1 8为载体的DNA文库。建库效率为从每克环境样品获得约 1 0 3～ 1 0 4 个含 3～ 8kb外源随机插入片段的克隆。通过DNA序列测定和基因注释 ,对从文库中随机选取的克隆进行了分析 ,发现外源插入片段均含序列未见报道的新基因。本文所做的尝试对于保存、研究和开发未培养微生物基因资源具有意义     

重组斑马鱼 p8蛋白的原核表达及纯化

目的：在大肠杆菌中重组表达斑马鱼p8蛋白并纯化。方法：PCR扩增斑马鱼p8蛋白基因编码区,连接到带有6×His标签的原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-p8并转化大肠杆菌BL21（DE3）,用IPTG诱导表达;优化表达条件后用Ni^2＋柱纯化重组蛋白。结果：构建了pET-28a-p8重组质粒;目的蛋白在大肠杆菌中获得表达,亲和纯化后,SDS-PAGE显示相对分子质量为预期的12．8×10^3。结论：获得了斑马鱼p8融合蛋白,为其生物学功能研究奠定了基础。     

白眉蝮蛇蛇毒神经生长因子的研究：Ⅰ.神经生长因子（NGF）的纯化及其生物学？

研究白眉蝮蛇蛇毒神经生长因子纯化方法并行生物学活性鉴定。方法 从白眉蝮蛇乌苏里亚种蛇毒中,经硫酸胺分段盐析,提取含有神经生长因子的粗制品,再经二乙氨基乙基纤维素离子交换层析和羧甲基纤维素离子交换层析,分离出蛋白质纯品,经十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳进行鉴定。     

高速逆流色谱法分离纯化茶黄素

首次应用高速逆流色谱法分离纯化茶黄素单体成分,溶剂系统为乙酸乙酯－正己烷－甲醇－水（３：１：１：６）,优化了分离茶黄素的条件。同时与ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０柱色谱法梯度洗脱对比,结果表明,高速逆流色谱法分离时间相对较短,可进行较大量的分离制备。高速逆流色谱法较之ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０柱色谱法还有一个突出的优点,即无不可逆吸附污染及不会导致样品化学变性。     

阿魏菇深层发酵菌丝体多糖提取工艺优化研究

以液体深层培养的阿魏菇新鲜菌丝体为原料,使用均匀正交设计的试验方法优化了阿魏菇多糖提取工艺。实验结果表明：在菌丝密度为100～250mg／mL(鲜重)范围内,超声波破壁时间为18min、热水浸提时间为4h、提取温度为70℃的提取工艺,多糖提取率可达到：0．914％(鲜重)。     

人α防御素5在酿酒酵母中的分泌表达及其活性分析

人α-防御素5(humanα-defensin 5,HD5)是人防御素α家族中发现的抑菌活性最高的多肽。为了探究HD5在酿酒酵母中分泌表达的可行性,首先利用PCR扩增获得酵母菌偏好的HD5核酸序列,构建酿酒酵母表达载体pVT102U/α-HD5,并将该重组质粒转入酿酒酵母S78中,通过营养缺陷筛选获得阳性转化菌株。然后,对重组菌进行发酵培养,取上清液纯化后通过tricine-SDS-PAGE和质谱检测表达产物。最后,利用琼脂扩散法检测表达的HD5的抑菌活性以及其对温度的耐受性,同时通过二倍稀释法检测表达的HD5对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌以及沙门氏杆菌的最小完全抑制浓度。结果显示:表达的HD5对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌以及沙门氏杆菌均具有明显的抑菌活性。发酵上清冻干粉对金黄色葡萄球菌完全抑制的最小浓度为10 mg/mL,对大肠杆菌和沙门氏杆菌完全抑制的最小浓度为40 mg/mL;且在不同温度处理下,表达的HD5对3种细菌仍具有一定的抑菌作用。上述结果表明具有高抑菌活性的HD5防御素在该重组系统中成功表达。     

苦瓜MAP30蛋白基因克隆、表达及其抗肿瘤活性研究

通过PCR技术,从苦瓜总DNA中扩增出编码MAP30成熟蛋白的基因,经测序鉴定后亚克隆到原核表达载体pET30a中,构建成带有N端6Histag的融合表达载体。表达载体用CaCl2介导的化学转化法转化E.coliBL21(DE3),然后利用PCR筛选阳性克隆。工程菌经1mmol/LIPTG诱导4h实现高效表达,而且在30℃时融合蛋白表达量最高,约占菌体总蛋白56%。可溶性分析表明,该融合蛋白在大肠杆菌中主要以可溶的形式存在。重组蛋白通过Ni2+鏊合亲和层析进行纯化,纯化蛋白占上清总蛋白37.2%,发酵液产率为250mg/L。Westernblot分析表明,重组蛋白可与兔抗histag多克隆抗体发生特异性反应。利用MTT法分析重组MAP30的细胞毒性,结果表明其对小鼠3T3和S180肿瘤细胞株具有明显的抑制作用,ID50分别约为50μg/ml和30mg/ml,而对人正常胚肺二倍体WI38细胞株的毒性极小。     

以松毛虫为基质培养的冬虫夏草菌丝体中多糖的提取研究

研究了不同方法对冬虫夏草发酵菌丝体（以枯叶蛾科昆虫马尾松毛虫为基质发酵所得）中多糖提取的影响。结果表明,采用微波辅助水提法所得多糖的产率最高,影响提取的关键因素为液料比、微波提取时间、微波功率;采用Box-Behnken设计及响应面分析法对这3个因素进行优化,并通过回归拟合,建立了预测虫草多糖提取的多项式模型Y=6.87+0.058A+0.085B+0.075C+0.032AB+0.046AC+0.069BC-0.16A²-0.37B²-0.11C²。经响应面最优化分析,获得冬虫夏草发酵菌丝体中多糖的最优提取工艺参数为：液料比（mL/g）6.3:1、微波功率520W、微波提取时间326s,此工艺提取验证后的提取率达到6.76%。     

小蜡果皮水溶性色素的提取及光敏感性

以去离子水和不同体积分数乙醇从小蜡果皮中浸提红色素,用光谱扫描法检测该红色素的光吸收特性,比较不同浸提时间及不同体积分数乙醇对浸提效果的影响,并用暴露方式进行光敏感性测定。结果显示,小蜡果皮色素在纯水中的溶解性最好,属水溶性色素,延长浸提时间可提高色素的浸出率,但杂质质量分数也随之提高,紫外线对色素的色度影响最大,直接照射可使色素的色度大幅度下降。