TNF-α转化酶酵母双杂交系统"诱饵"质粒的构建及鉴定

目的：构建酵母双杂交系统“诱饵”质粒载体pGBKT7-TACE,并检测其是否具有自身激活及毒性作用。方法：从小鼠肝组织提取总RNA,用RT-PCR的方法获得TACE,克隆于pGBKT7载体上,酶切鉴定及序列分析,并检测pGBKT7-TACE在MATH-MAKER GAL4 Two-Hybrid System 3中的自激活和毒性作用。结果：本实验成功构建了“诱饵”质粒载体pGBKT7-TACE,并证明其在酵母双杂交系统中无自激活及毒性作用。结论：构建的诱饵质粒pGBKT7-TACE可应用在酵母双杂交系统中,为筛选小鼠cDNA文库中与TACE相互作用的蛋白奠定实验基础。     

同型半胱氨酸对血管内皮功能的影响及通心络超微粉的干预作用

目的：观察同型半胱氨酸对血管内皮功能的影响,并探讨通心络超微粉的干预作用。方法：健康雄性Wis-tar大鼠,随机分为对照组、模型组、通心络组。离体主动脉环技术检测血管内皮依赖性舒缩功能,微循环仪观察肠系膜微循环变化,放免方法检测血浆内皮素（ET）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、血栓素（TXA2）、前列环素（PGI2）的含量及血清超氧化物歧化酶（SOD）与谷胱苷肽过氧化物酶（GSH-Px）的活性、一氧化氮（NO）及丙二醛（MDA）的含量。结果：与对照组比较,模型组血管内皮依赖性舒张反应明显减弱（p〈0.01）,肠系膜毛细血管对乙酰胆碱的扩张幅度与扩张率显著下降（P〈0.05）。与模型组比较,通心络组血管舒张反应明显改善（P〈0.01）,肠系膜毛细血管对乙酰胆碱反应性升高;与对照组比较,模型组AngⅡ、ET、TXA2含量明显升高（P〈0.05,p〈0.01）,而PGI2含量明显降低（P〈0.05）,同时血清中SOD与GSH-Px活力、NO含量明显降低（P〈0.001,P〈0.05）。与模型组比较,通心络组血浆AngⅡ、ET、TXA2的含量显著降低（P〈0.01）,而PGI2的含量明显升高（P〈0.01）,同时血清中SOD活力与NO含量显著升高（P〈0.01,P〈0.05）。结论：①高同型半胱氨酸血症可使内皮依赖性血管舒缩功能减退,其机制可能与高同型半胱氨酸血症引发血管舒缩因子平衡紊乱及大量自由基的产生有关。②通心络超微粉可使同型半胱氨酸所致血管内皮依赖性舒张功能的异常明显改善,可能与其抑制自由基的过量生成及调节内皮舒缩因子的平衡有关。     

微波辐射加热对潘氏细胞染色的影响

潘氏细胞(Paneth Cell)是小肠腺的特征细胞,该细胞有合成分泌蛋白质的特点,其分泌颗粒含有防御素(defensin,又称隐窝素Chyntdin)、溶菌酶,释放后对肠道微生物有杀灭作用[1];同时亦有吞噬功能.潘氏细胞含有的分泌颗粒通常可用酸性染料如焰红(Phloxine)、伊红或橘黄G染色[2],其中以焰红染色效果最佳.     

细胞浆中PrP蛋白的表达及其细胞毒性作用的研究

为了探讨在胞浆中表达的PrP的理化特征以及对细胞活性的影响,我们构建了胞浆型PrP(CytoPrP)真核表达质粒,瞬时转染人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,通过蛋白酶敏感性实验检测CytoPrP及其蛋白酶抗性,利用MTT和Trypan Blue细胞计数检测CytoPrP的细胞毒性作用.结果显示,CytoPrP在胞浆内的存在受蛋白酶抑制剂的控制;与野生型PrP相比,CytoPrP具有相对较强的蛋白酶K(PK)抗性.MTT和细胞计数实验均显示,Cyto-PrP的存在可诱导明显的细胞毒性效应,而CytoPrP的细胞毒性作用受蛋白酶抑制剂含量的影响,呈剂量依赖关系.上述结果为研究CytoPrP在朊病毒病的发病机制中的意义提供了一定的科学数据.     

顺铂肾损伤机制的研究及进展

顺铂(cDDP)是临床化疗最常用的药物之一.它是一种广谱抗肿瘤药,对实体肿瘤的疗效尤为明显,其疗效与剂量成正比.     

抗菌药物滥用及细菌耐药性现状与对策

目前,我国已是世界上滥用抗菌药物最为严重的国家之一,每年约有8万人死于抗菌药物滥用;我国细菌耐药也已相当严重,耐药的大肠埃希菌、金黄色球菌、肺炎球菌的比例分别高达50%、60%和70%,更为严重的是,多药耐药病原体的出现使临床治疗中抗菌药物的选择出现困难.细菌耐药现象之所以日趋严重与滥用抗菌药物有着密切的关系.为此,2004年国家药品食品监督管理局、卫生部就联合发文,要求在全国范围内开展"加强抗菌药物监管,促进合理用药"宣传活动,同时规定从2004年7月1日起非OTC目录的抗菌药物在药店必须凭处方销售或购买.     

从海洋生物鲎血中提取超氧化物歧化酶及其抗菌作用的研究

目的 综合利用鲎试剂生产的废料血浆提取超氧化物歧化酶 (Superoxide dismutase,SOD),探讨鲎血SOD对耐甲氧西林金色葡萄球菌(MRSA)、对甲氧西林敏感金色葡萄球菌(MSSA)、野生型绿脓杆菌(PAO1)、大肠杆菌(E.coli)的抑菌作用.方法 采用离心分离、丙酮沉淀、热变性去杂蛋白的方法从生产鲎试剂废料血浆中提取SOD,然后把SOD加入菌液培养,24 h后观察结果.结果 SOD对耐甲氧西林金色葡萄球菌、对甲氧西林敏感金色葡萄球菌、野生型绿脓杆菌、大肠杆菌的最低抑菌浓度分别为20.02,40.05,20.02,20.02 μg/ml.结论 本方法可成功地从生产鲎试剂废料血浆中提取得到SOD粗品,实验表明鲎血SOD具有抗菌作用.     

TLC-生物自显影-MTT法检测滇重楼内生真菌中抗菌活性成分

本文采用TLC-生物自显影-MTT法检测了3株滇重楼内生真菌即芬芳镰刀菌、季氏毕赤氏酵母和烟曲霉正丁醇提取物对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和稻瘟病菌的抗菌活性成分,以芬芳镰刀菌和季氏毕赤氏酵母菌液提取物中含有的抗菌活性成分为多.同时与打孔药剂扩散法的检测结果进行了比较,为进一步快速分离内生真菌中抗菌活性成分提供了依据.     

云南美登木内生真菌Chaetomium globosum Ly50′菌株的抗菌活性成分研究

从云南美登木叶中分离筛选到具抗菌活性的内生真菌Chaetomium globosum Ly50′菌株,利用活性追踪法在其发酵产物中分离到抗橙色青霉和抗结核分枝杆菌的化合物,经ESI-MS、NMR等波谱数据确认该活性成分为球毛壳甲素,chaetoglobosin A和球毛壳乙素chaetoglobosin B.首次发现chaetoglobosin B具有抗结核分支杆菌活性.     

华蟹甲草对几种植物病原真菌的离体抗菌活性研究

从华蟹甲草共获得46个提取、分离样品,首先测定这些样品在100 mg/L浓度下对5种植物病原真菌菌丝生长的抑制活性,然后测定活性较高的Y-S16/23～90/96号样品对9种真菌菌丝生长的有效抑制中浓度(EC50)以及对辣椒炭疽病菌孢子萌发的抑制作用.结果表明:对于华蟹甲草的不同组织器官,花提取物的活性相对最高,对供试的5种植物病原菌均有不同程度的抑制活性,其次是叶片提取物,但均是对辣椒炭疽病菌的活性最高;而在所有样品中,Y-S16/23～90/96号样品的活性最高,在100 mg/L浓度下对辣椒炭疽病菌和番茄灰霉病菌的菌丝生长抑制率均超过50%,其作用谱较广,对供试的9种植物病原真菌均有抑制活性,其中对番茄灰霉病菌和辣椒炭疽病菌的活性最高,EC50分别为68.96和99.17 mg/L,对黄瓜疫霉病菌、苹果腐烂病菌、玉米小斑病菌等3个病菌的活性次之,EC50介于137.37～161.68 mg/L之间,对水稻稻瘟病菌、辣椒疫霉病菌、苹果斑点落叶病菌、小麦赤霉病菌等4个病菌的活性相对较差,EC50介于303.05～362.54 mg/L之间;Y-S16/23～90/96号样品对辣椒炭疽病菌分生孢子萌发的抑制活性较低.