指形龙隙蛛毒腺中抗凝活性多肽挖掘

目的：有毒动物毒腺分泌大量结构多样和功能丰富的活性多肽,是多肽药物开发的天然宝库。目前仅有一小部分有毒动物活性多肽被研究,因此有必要建立一种更加高效的活性多肽挖掘方法。方法：以指形龙隙蛛为研究对象,通过对毒腺样本进行转录组测序、数据分析与多肽挑选,多肽重组表达制备,体外活性筛选和动物模型体内活性评价等方法,进行抗凝活性多肽的开发。结果：筛选到一种凝血因子Xa抑制剂PDBPE-001,多肽分子量为9 889.82 Da,由92个氨基酸残基组成,有4对二硫键。该多肽可通过重组表达的方式高效制备,对凝血因子Xa的抑制活性呈浓度依赖性,其半抑制浓度约为0.807μmol/L。在体内血栓模型中,30 mg/kg PDBPE-001能起到良好的抗血栓效果。结论：首次从指形龙隙蛛中获得了一个新型Factor Xa抑制剂,为新型抗凝血药物开发提供了一个全新的先导多肽分子。     

抗凝血蛋白质分子的研究现状

凝血酶抑制剂,纤溶酶原激活剂（t-Pa,u-Pa,SK和SAK等）,蚯蚓纤溶酶和蛇毒抗凝血蛋白等是血栓类疾病领域的研究重点,纤溶分子突变体的应用,纤维蛋白水解特异性的增加,溶栓效率的提高以及半衰期的延长等是溶栓研究的方向。     

多糖硫酸化修饰和多糖硫酸酯的研究进展

硫酸多糖是一类糖羟基上带有硫酸根的多糖,包括从植物中提取的各种硫酸多糖、肝素、天然多糖的硫酸衍生物及人工合成的各种硫酸多糖。硫酸多糖具有抗病毒、抗肿瘤、抗凝血和增强免疫等生物活性,为提高中药多糖的生物活性,可通过硫酸化修饰的方法进行结构改造,获取多糖硫酸酯。本文就多糖的硫酸化修饰方法、多糖硫酸酯的生物学活性及其影响因素、作用机制和临床应用进行了综述。     

全自动血细胞分析仪自动推片致淋巴细胞变异的探讨

目的:探讨全自动血细胞分析仪自动推片系统致乙二胺四乙酸(EDTA)-K2抗凝血淋巴细胞形态变异的机制。方法:采用全自动血细胞分析仪自动推片系统对选择西京医院门诊228例受试者,其中儿童80例、成人100例、经临床及骨髓穿刺细胞学确诊的淋巴细胞性白血病(CLL)21例、粒细胞性白血病15例和单核细胞性白血病12例,均用EDTA-K2(2.0 mg/m L)专用管采血2m L,在1 h内完成仪器推片及手工推片、瑞-姬染色,经2位经验丰富的主管检验师显微镜检查分类比较。结果:228例受试者EDTA-K2抗凝血,仪器自动推片细胞分类Ⅱ型淋巴细胞(18.65±2.35)%明显高于手工推片(4.67±2.45)%,统计学处理具有显著性差异(P0.01)。正常组与粒细胞性白血病和单核细胞性白血病患者抗凝血,仪器自动推片,淋巴细胞形态没有明显改变(4.36±2.17)%与手工推片(4.21±2.14)%比较没有差异(P0.05),淋巴细胞性白血病(CLL)患者的淋巴细胞形态有明显的改变仪器为(85.25±5.26)%与手工推片(4.25±2.19)%有显著性差异(P0.01),淋巴细胞体积增大,外形不规则,着色不均,边缘蓝色较深,胞核不规则,细致膨胀,淡紫红色,主要拟为Ⅱ型(不规则型/单核细胞型)异型淋巴细胞。结论:全自动血细胞分析仪自动推片系统对EDTA-K2活化膨胀的淋巴细胞失控而致淋巴细胞形态拟Ⅱ型异型淋巴细胞,手工推片已控制所以细胞形态不易改变,确切机制还有待进一步研究。     

抗凝血蛋白的抗凝溶栓机制

自然界中存在着大量具有抗凝溶栓活性的生物大分子,如水蛭素、蚓激酶等。这些生物大分子主要是通过抑制凝血酶及凝血因子活性,水解纤维蛋白或纤溶酶原,或是抑制血小板聚集来达到抗凝溶栓的作用。该文对这些活性物质的抗凝溶栓机制进行综述。     

蕲蛇蛇毒中一种新型金属蛋白酶AA-MP-I的纯化和表征

本研究通过嗜硫色谱、Sephadex G-75、蓝胶和POROS HQ20离子交换色谱,从蕲蛇蛇毒中分离得到一种新组分AA-MP-I。该酶为分子量22.9kDa的单体蛋白,等电点为5.55,不含中性糖基,N端序列为STE-FQRYMEIVIVVDHSMVK,结果表明其为新型P-I型金属蛋白酶,对温度敏感,具有抗凝血活性,40℃下抗凝血活性最强,具有出血毒性,无磷脂酶A2活性。     

环氧交联结合肝素改性对牛颈静脉抗凝血性能的影响

目的:研究环氧交联结合肝素包被对组织工程肺动脉带瓣血管支架-去细胞牛颈静脉带瓣血管的抗凝血性能.方法:采用环氧交联结合鱼精蛋白偶联技术将肝素结合于去细胞牛颈静脉带瓣血管的内膜面,通过体外凝血时间检测及循血流下观察肝素化牛颈静脉带瓣管道的长期通畅性和血栓形成情况,以评价血液相容性.结果:肝素结合到去细胞牛颈静脉带瓣血管的内膜面膜表面后.其凝血酶原时间、部凝血活酶时间及凝血酶时间明显延长,重建犬右室流出道后10个月,牛静脉带瓣管道保持通畅,无血栓形成.结论:牛颈静脉带瓣管道通过环氧交联结合鱼精蛋白偶联将肝素结合其内膜面后具有良好而持久的抗凝血性能,表现出良好的血液相容性.     

Design of a novel plasminogen activator based on the structure of hirudin

Using a phage library, seven peptide sequences with high affinity to human microplasminogen were obtained. Caseinolytic assay indicated that only the synthesized peptide P07 had slight fibrinolytic activity. To enhance its plasminogen activation ability, peptide P07 was fused into loop 32-35 of hirudin. In vitro assay demonstrated that this hirudin-like fusion protein can activate human plasminogen and retain the function of thrombin inhibition. Fusing the sequence ＂SPDASRL＂ into hirudin generated a plasminogen activation activity 100 times higher than peptide P07 in chromogenic and radial caseinolytic assay. This significant functional improvement might originate from a more specific active structure due to the hirudin scaffold.     

硇洲马尾藻(S.naozhouense)褐藻多酚的抗凝血活性研究

本文采用溶剂萃取法提取硇洲马尾藻(S.naozhouense)褐藻多酚,并通过超滤进行分子量分级得NW1和NW2两部分,检测其总多酚的含量.通过体内和体外实验检测NW1和NW2体内对凝血时间(CT)、出血时间(BT)、凝血酶原时间(PT)和血浆凝血酶时间(TT)的影响.结果表明,硇洲马尾藻多酚NW1在10～40 mg/kg.d剂量范围能显著延长CT和BT,在5～15 mg/mL浓度范围显著增加PT和TT,表现出良好的全面抗凝血活性;NW2能显著延长CT和BT,对TT有一定的延长作用,但对PT无效果,且在高浓度(15 mg/mL)时表现出显著的缩短PT作用.     

日本蝮蛇蛇毒碱性磷脂酶A2同源物的分离及鉴定

We purified and characterizated a phospholipase A2 homologue from Agkistrodon blomhoffii ussurensis snake venom. We used Hitrap SP cation exchange and Superdex 75 columns chromatography to obtain a basic protein, used SDS-PAGE to analyse molecular mass, and IEF (Isoelectric focusing electrophoresis) IEF to identify isoelectric point. The molecular mass was 16 kDa, and the isoelectric point was 8.56. We detected its phospholipase A2 activity on egg yolk phospholipids, hemolytic activity on washed erythrocytes, and anticoagulant effect on pig platelet-rich plasma, as well as the N-terminal sequence with protein sequencer. The results showed that it had no phospholipase A2 activity and hemolytic activity, but had obvious anticoagulant effect on in witro. The N terminal sequence (21 amino acid residues) compared with other phospholipases A2 demonstrated that the protein was homogenous with BPLA2s from Agkistrodon halys Palls.