Adiponectin 基因剔除LacZ基因敲入小鼠模型的建立

adiponectin是脂肪细胞特异分泌的一种活性蛋白质,具有增加胰岛素敏感性、抗炎及抗动脉硬化等活性.建立adiponectin基因剔除β-半乳糖苷酶基因(LacZ)敲入小鼠模型,可为整体动物水平研究adiponectin基因功能及其表达调控机制等提供理想工具.根据生物信息学方法获得adiponectin基因组序列,设计基因剔除及敲入策略,在adiponectin基因第2和第3号外显子剔除的同时,在其ATG和信号肽序列后顺接LacZ基因完整编码序列,构建完成了Adipo-LacZ-XpPNT基因剔除质粒.通过电穿孔将打靶质粒转入ES细胞,以G418和ganciclovir进行药物筛选,获得药物抗性的ES细胞克隆,PCR和DNA印迹鉴定出正确同源重组克隆.将同源重组的ES细胞克隆注入小鼠囊胚得到嵌合体小鼠,嵌合体小鼠与C57BL/6J小鼠交配产生杂合子小鼠,杂合子间交配获得adiponectin基因剔除LacZ基因敲入纯合子小鼠.经RT-PCR、RNA印迹和ELISA检测证实纯合子小鼠脂肪和血清中adiponectin基因表达呈阴性.RT-PCR、RNA印迹及蛋白质印迹检测发现,LacZ基因在突变小鼠脂肪组织中有特异性表达,其表达谱与内源性adiponectin基因的表达谱一致.但在脂肪组织及外周血中未能检测到LacZ活性,且血清中LacZ蛋白亦呈阴性.由此成功建立了adiponectin基因完全灭活及LacZ基因以内源性adiponectin基因表达谱表达的小鼠模型,为进一步研究该基因功能及其表达调控创造了有利条件.     

腹腔镜手术治疗22例输卵管妊娠的护理体会

腹腔镜下手术治疗妇科疾病是一项新开展的技术,这种技术具有不开腹,创伤小,恢复快,术后疼痛轻等优点,而且缩短了住院天数,腹部不留蚯蚓状瘢痕等。腹腔镜手术的开展不仅需要医生有娴熟的技术,而且给妇科临床护理工作提出了新的要求。我科于2004年起开展了腹腔镜下手术治疗输卵管     

1例先天性直肠阴道瘘手术治疗的术前护理

直肠阴道瘘是直肠与阴道之间的病理性通道,其产生原因可以是产伤、手术创伤及放射性创伤等,大多数发生于先天性直肠畸形。瘘孔大而低位,可见大便从阴道排出和不能控制的排气;瘘孔小,当粪便干燥时不能见到阴道排便,但仍有不能控制的排气,由于分泌物的刺激,可发生慢性外阴炎,有瘙痒,渗液和皮疹等症状。小部分先天性直肠阴道瘘,因瘘口较小,随着年龄的增长,瘘口会自行愈合,无需治疗,但大部分的瘘口仍需进行手术修补,以恢复正常控制能力的排便功能。术后感染率、复发率高,故术前准备是否充分,对修补愈合有着十分重要的关系。     

视网膜脱离围手术期的护理

视网膜脱离是视网膜的神经上皮层和它本身的色素上皮层分离。它是一种常见的严重性、致盲性眼底疾病,手术是唯一有效的治疗方法[1]。特别是原发性视网膜脱离应争取早日手术治疗。2003年1月~2005年1月,我院采用巩膜外冷凝外加压环扎术治疗视网膜脱离58例,效果满意。现将护理体会总结如下。1临床资料本组58例患者中,男38例,女20例,年龄最小12岁,最大68岁。全部患者均行冷凝外加压环扎术。术后全部患者视网膜均达到解剖复位,且无感染发生。2护理2·1术前护理(1)术前心理护理。患者因视网膜脱离而视力减退,心理负担很重,既希望尽快手术,又对手术…     

利用CRISPR/Cas9技术构建定点突变小鼠品系

CRISPR/Cas9技术是新近发展起来的对细胞和动物模型进行基因编辑的重要方法。本文利用DNA双链断裂(Double-strand breaks, DSBs)引起的同源重组(Homologous recombination, HR)依赖与非依赖的修复机制,建立基于CRISPR/Cas9核酸酶技术构建定点突变小鼠品系的技术体系。针对赖氨酸特异脱甲基化酶2b(Lysine (K)-specific demethylase 2b, Kdm2b)酶活关键位点对应的基因组DNA序列设计单一导向RNA(Single-guide RNA, sgRNA),通过与Cas9 mRNA共显微注射,分别得到Kdm2b基因发生移码突变的基因失活品系及关键位点氨基酸缺失的酶活突变型小鼠品系。此外,利用HR介导的修复机理,将黄素单加氧酶3(Flavin containing monooxygenases3, Fmo3)基因的sgRNA序列及对应的点突变单链寡脱氧核苷(Single strand oligonucleotides, ssODN)修复模板共注射到小鼠受精卵雄原核。对F₀小鼠基因测序分析显示,成功构建了Fmo3基因移码突变的基因敲除和单碱基定点突变的基因敲入小鼠,这些突变能够稳定遗传给子代。本研究利用CRISPR/Cas9技术,通过同源重组依赖与非依赖两种DNA损伤修复方式,成功构建了特定位点突变的小鼠品系。     

农地整理中路沟渠生态化设计研究进展

农地整理是人类对农田生态系统的强烈干扰.传统农地整理中路沟渠设计的主要技术经济指标是方便生产通行和调配水资源以及提高水的利用率,尚缺少系统化、生态化考量,已经影响了农田物种扩散,导致生物栖息地环境的退化,并对农田生态系统的生物竞争机制、缓冲和补偿能力、抵御虫害能力产生了显著的负效应.本文系统总结了路沟渠生态化的功能,着重介绍了近年来生态化路沟渠的形式与结构设计、路沟渠生态工法参数的试验以及路沟渠生态材料选择的技术和方法.未来的相关研究应根据各级道路、灌排沟渠的不同功能要求和规格,按照田间不同生物的习性和栖息要求,精确设计能够满足大多数生物需求的农田路沟渠形态、结构和控制性尺寸,切实解决农地整理带来的上述问题.     

经口激光显微手术治疗声门型喉癌的研究进展

经口激光显微手术(transoral laser microsurgery,TLM)应用于声门型喉癌(glottic carcinoma,GC)具有显著的优越性:安全有效,局部复发率低,喉保留率高,实现了GC的微创治疗。大量的研究表明TLM应用于早期GC的疗效与放射治疗和喉裂开术相似。因其不但损伤更小,更加精确,而且患者术后生活质量更好,为早期GC的首选治疗方式。目前将TLM推广应用到中晚期GC、前联合喉癌以及挽救放疗或TLM后早期复发性GC的治疗中,可能为有效保留喉部功能的治疗方式,但是国内相关的文献报道较少,较多的报道了开放性手术仍是GC主要的治疗方式。因此,本文就TLM治疗GC的现状、手术疗效、优越性、应用前景等方面做一综述,进一步研究及认识TLM对GC的治疗有非常重要的临床应用价值。     

经鼻内镜手术进展

颅底手术正随着经鼻内镜手术的发展而发生着转变。经鼻内镜手术最初开发于鼻窦手术,但其适应症已逐渐扩大到其它领域,可以用于治疗大量的疾病。经鼻内镜手术的主要优点是：它利用天然的孔道来处理大量的颅内、鼻窦病变,避免了皮肤切口、面部骨瓣切口、脑回缩等直接开颅所不可避免的后遗症。与传统的神经外科手术相比,发病率和死亡率下降,并间接减少了住院时间和管理成本。本文就经鼻内镜手术的进展进行综述。在综述中阐述了经鼻内镜手术的适应症和基本原则,以及显露、特别是重建技术的进展,这些进展要求在可接受的并发症前提下达到更广泛的切除;讨论了经鼻内镜手术的局限性,尤其是,虽然这种手术往往是“微创”,但它并不是完全没有并发症;展望了经鼻内镜手术的适应症会不断拓宽,并发症会越来越少的美好未来。     

布比卡因与左旋布比卡因在剖宫产手术中麻醉效果比较

目的：探讨蛛网膜下腔注射左旋布比卡因和布比卡因对剖宫产手术中的麻醉效果。方法：选取2012年3月到2013年3月期间在我院住院进行剖宫产手术产妇60例作为研究对象。随机分为左旋布比卡因组与布比卡因组,观察两组患者的麻醉效果以及术后不良反应的发生情况。结果：剖宫产手术中左旋布比卡因和布比卡因的蛛网膜下腔注射麻醉后的5min和7min后MAP值与麻醉前比较差异具有统计学意义（P〈0．05）。左旋布比卡因和布比卡因的蛛网膜下腔注射麻醉后的5min、7min、10min以及15minHR值比较差异具有统计学意义（P〈0．05）。左旋布比卡因和布比卡因的蛛网膜下腔注射麻醉后Bromage评分0分时间和麻醉后切口感觉疼痛时间相比差异具有统计学意义（P〈0．05）。左旋布比卡因和布比卡因麻醉后的不良反应的发生率比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：剖宫产手术麻醉中布比卡因的麻醉效果好于左旋布比卡因,临床上剖宫产等腹部手术应该选择布比卡因进行临床麻醉．．