核酸恒温扩增技术研究进展

核酸恒温扩增技术在生命科学研究及相关诸多领域已经得到了广泛应用。我们对核酸恒温扩增技术的最新进展作一简要综述,包括环介导恒温扩增、链替代扩增、依赖核酸序列的扩增、滚环扩增、切口酶核酸恒温扩增、依赖解旋酶的恒温扩增、转录依赖的扩增、杂交捕获法、转录介导的扩增等的原理、优缺点及应用。     

四种方法检测乙型肝炎病毒基因型的比较

目的比较四种方法检测乙型肝炎病毒基因型的差异性。方法对36例乙型肝炎患者的血清分别采用测序技术,荧光定量PCR技术,恒温扩增技术,基因芯片技术进行乙肝病毒基因型的检测。结果36份血清以测序技术为金标,观测荧光定量PCR技术特异性100%,敏感性83%,恒温扩增技术特异性100%,敏感性89%,基因芯片技术特异性100%,敏感度92%。结论目前临床采用的四种方法检测乙型肝炎病毒基因型的特异性相同,敏感度以测序为金标准,基因芯片技术最灵敏,其次为恒温扩增技术,最后为荧光定量PCR技术。     

放宽恒温区--骆驼的一种适应策略

骆驼在沙漠干旱高温条件下,产生了将恒温机制控制的温度范围适当放宽放松的适应对策,也就是说,它能适应不严格的恒温,而暂时地忍耐高温。具体地说,骆驼在具有充足饮水条件下,其体温在36～38℃之间;而在缺水条件下,其体温的昼夜波动可达7℃,即在34～41℃之间。这就等于说,一匹500千克重的骆驼体温上升7℃,     

可视化和实时荧光环介导恒温扩增技术快速检测原料乳中的沙门氏菌

【背景】原料乳质量控制是乳制品生产流程中的关键环节,沙门氏菌是污染原料乳的主要致病菌之一。随着生物检测技术的不断发展,建立用于快速检测原料乳中沙门氏菌的实用型方法具有重要意义。【目的】评价可视化环介导恒温扩增技术(visual loop-mediated isothermal amplification,V-LAMP)和实时荧光环介导恒温扩增技术(real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,RF-LAMP)方法快速检测原料乳中沙门氏菌的实效性。【方法】建立沙门氏菌LAMP反应体系和反应条件,对比V-LAMP和RF-LAMP两种方法的特异性、灵敏度、稳定性及其应用于实际样品检测的效用。【结果】采用V-LAMP和RF-LAMP方法检测沙门氏菌标准菌株,其结果均为阳性,检测非沙门氏菌标准菌株其结果均为阴性;该两种方法的检出限为13 CFU/mL,检测重复率均为100%;经检测10份人工污染样品,该两种方法的检测结果与实际结果高度一致;经检测73份实际样品,相对于标准方法,该两种方法其相对特异性分别为94.12%和92.65%,相对敏感度分别为100%和100%,相对准确率分别为94.52%和93.15%,一致性χ2值分别为2.25和3.20,与标准方法无明显差异(P>0.05)。【结论】V-LAMP和RF-LAMP方法检测特异性好、灵敏度高、稳定性好,适用于原料乳中沙门氏菌的快速检测。     

环介导恒温扩增对莱姆病病原伯氏疏螺旋体的分型鉴定

使用环介导恒温扩增技术,基于莱姆病病原伯氏疏螺旋体的外膜蛋白A(OspA)基因,针对伯氏疏螺旋体不同的基因型设计特异性引物,对国内主要的莱姆病病原伯氏疏螺旋体的3个基因型进行分型鉴定。研究结果表明,设计的引物具有良好的特异性,可以对狭义伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi sensu strict)、嘎氏疏螺旋体(B.afzelii)和伽氏疏螺旋体(B.garinii)进行分型鉴定。伯氏疏螺旋体的分型鉴定可以对不同临床症状莱姆病患者的治疗和莱姆病的控制提供一定的依据。     

恒温和变温下中国对虾生长和能量收支的比较

对比研究了模拟自然昼夜温度变化节律的4个变温(22±2)、(25±2)、(28±2)和(31±2)℃与相应的恒温22、25、28和31℃下中国对虾(F ennerop enaeus ch inensis O sbeck)生长和能量收支的差异。结果表明,对虾在(22±2)℃、(25±2)℃和(28±2)℃变温条件下的生长率显著高于相应的恒温,但(31±2)℃与恒温31℃相比没有显著差异。与相应的恒温相比,(25±2)℃、(28±2)℃和(31±2)℃变温下对虾的摄食量显著增大,(22±2)℃、(25±2)℃和(28±2)℃变温下对虾的饵料转化率则显著提高。但变温下对虾对食物的消化率与相应的恒温相比没有显著差异。能量收支研究结果则发现,(22±2)℃、(25±2)℃和(28±2)℃变温下对虾摄食能中,用于生长的能量比例显著增加,而(31±2)℃与31℃相比则未见显著差异。从而表明,变温促长的主要机制可归因于变温下摄食量的增大、饵料转化率的提高及其摄食能中用于生长能比例的增加。     

新型冠状病毒一步法可视化恒温快速检测方法的建立

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染导致急性或致命性肺炎,该病毒是继严重急性呼吸系统综合征病毒(SARS-CoV)和中东呼吸系统综合征病毒(MERS-CoV)之后发现的又一由动物传染给人且能够人传人的冠状病毒。为快速确诊感染SARS-CoV-2的人和动物,急需建立一种快速高效的检测方法。本研究根据GenBank公布的SARSCoV-2全基因组序列,利用LAMP Desiner2.0软件筛选高效且特异性强的组合环引物和Bst 4.0 DNA聚合酶的扩增特性,即依赖RNA为模板进行DNA合成,建立一种高效、快速、灵敏检测SARS-CoV-2的方法。结果表明,该方法实现了5～20拷贝的病毒RNA检测目标,并可直接检测灭活病毒。因此,临床样本无需RNA提取,经灭活处理后即可进行样品检测。扩增后的核酸分子与OG(Orange-Green)染料结合,阳性样品为绿色,阴性样品为橙黄色。本研究建立的SARS-CoV-2一步法可视化恒温快速检测方法,实现了核酸快速检测,且具有高灵敏度,为SARS-CoV-2检测提供了新的方法选择。     

DNA环介导的恒温扩增法在快速鉴定病原微生物中的应用

DNA环介导的恒温扩增(LAMP)反应,是分子生物学领域中的一个新概念,它可以在恒温(60～65℃)条件下,30～60 min内将只有几个拷贝的靶核酸扩增到109水平。该方法的一大特色是,可以通过反应副产物——白色焦磷酸镁沉淀的产生与否判断靶基因的存在。因此,对于病原微生物的鉴定具有高效率、高特异性、高敏感性等特点。LAMP方法在食品安全检测、流行性病毒检测、临床诊断,以及水产养殖等领域的应用及研究已有文献报道。表明,该方法已具有成功应用的现实性,为快速基因检测提供了一种新的技术途径;比PCR方法更具推广性,可望作为常规检测工具。     

肿瘤热疗中自动控温、恒温

肿瘤热疗技术在临床上得到了较为广泛的应用,但是对于人体深层部位的肿瘤,由于热能难于传至并集中于肿瘤部位,肿瘤热疗效果不理想.在当前肿瘤热疗中存在的另一个问题,即是准确、快速地测出热疗病灶部位的温度,仍然存在很大的困难,因而热剂量难于掌握,直接影响到肿瘤热疗的疗效.由于锰锌铁氧体磁性微粉吸收剂具有强烈吸收电磁波和存在居里温度的特性,采用在肿瘤热疗过程中,将锰锌铁氧体磁性微粉吸收剂输入血管中,可以达到对肿瘤热疗自动控温、恒温和提高疗效的目的.