HIF-2α、VEGF在子宫颈鳞癌组织中的表达及其临床意义

目的检测宫颈鳞癌组织及正常宫颈组织中HIF-2α、VEGF基因与蛋白的表达情况,探讨其在子宫颈鳞癌的临床意义。方法随机选取64例子宫颈鳞癌组织和22例正常宫颈组织,收集年龄、FIGO分期和淋巴结转移等临床相关指标,采用实时荧光定量PCR法及免疫组织化学法(Elivision法)检测各组织中HIF-2α、VEGF的表达。结果实时荧光定量PCR分析结果表明HIF-2α、VEGF mRNA表达较正常宫颈组织显著增加,差异有统计学意义(P0.05),且二者mRNA水平呈正相关(r=0.778,P0.001)。免疫组织化学法结果表明HIF-2α、VEGF蛋白在宫颈组织中的阳性表达率分别为宫颈鳞癌组93.8%、正常宫颈组18.2%,两组比较差异有统计学意义,且HIF-2α与VEGF呈显著相关(r=0.514,P0.05)。HIF-2α、VEGF的mRNA表达均与年龄无关,但与FIGO分期、淋巴结转移关系密切(P0.05),FIGO分期高、有淋巴结转移的子宫颈癌组织HIF-2α、VEGFmRNA表达水平均相应对照组升高。结论与正常宫颈组织相比,HIF-2α、VEGF mRNA和蛋白在宫颈鳞癌中均呈高表达。     

脑脊液中转移性腺癌细胞免疫表型的变化

目的探讨脑脊液中转移腺癌细胞在没有血供的条件下的生长特征,是否有血管内皮标记物CD34,CD105,FⅧ,淋巴管内皮标记物D2_40及碱性成纤维生长因子(b-FGF)的表达,并促进肺癌的脑转移及肿瘤细胞自我生存的调控。方法采集109例腺癌脑转移患者的脑脊液为研究对象,其中肺癌脑转移107例(包括49例肺癌术后5年内脑转移,58例无肺癌病史直接经脑脊液穿刺发现肺癌脑转移),乳腺癌2例。以40例主要成分为炎性细胞的脑脊液及40例原发性肺腺癌组织标本为对照,采用免疫化学染色方法检测脑转移腺癌细胞及腺癌组织中CD34,CD105,FⅧ,D2_40,b-FGF,VEGF及vimentin的表达。结果 109例脑脊液标本中,CD34,CD105,FⅧ,D2_40,b-FGF及VEGF在转移癌细胞中的阳性率分别为64.2%,67.9%,66.9%,63.8%,56.8%,70.6%明显高于脑脊液对照组(阳性率均为0)且差异具有统计学意义(P0.05)。vimentin在脑脊液转移腺癌细胞中阳性表达,表达率为88.1%。在原发肺癌标本中,CD34,CD105,FⅧ和VEGF表达较弱或不表达。D2-40在癌中不表达。B-FGF与Vimentin在原发肺腺癌中的表达率分别为50.1%和29.3%。结论在肺癌脑转移过程中,肿瘤细胞能够表达不同的血管生长因子,提示可能具备内皮细胞的生物学特性,可能有助于增强肿瘤细胞的转移能力和对环境的耐受能力。     

The influence of nitroglycerin on the proliferation of endothelial progenitor cells from peripheral blood of patients with coronary artery disease

Endothelial progenitor cells （EPCs） are associated with vascu- lar repairing and progression of atherosclerotic lesion. It may lead to coronary artery disease （CAD） if circulating EPCs lose their function. Continuous nitroglycerin （NTG） therapy causes increased vascular oxidative stress and endothelial dys- function. The aim of this study was to investigate the effects of NTG on the proliferation of human peripheral blood-derived EPCs. EPC cultures, collected from 60 CAD patients and cul- tured for 7-12 days, were treated with different concentra- tions of NTG （0.0, 0.3, 1.0, 2.0, 7.5, 15.0, and 20.0 mg/l） for 72 h, respectively. The cell counts and proliferative activities of EPC; the levels of vascular endothelial growth factor-A （VEGF-A）, nitric oxide （NO） and peroxynitrite （ONOO-） in culture medium; and the level of reactive oxygen species （ROS） in adherent cells were measured. Compared with control （0.0 mg/l NTG）, the cell number and proliferative ac- tivities of EPCs were increased when treated with 1.0 mg/l NTG and reached maximum level when NTG concentration was 7.5 mg/l. However, there was a significant reduction when treated with higher doses of NTG （≥15.0mg/l）. Meanwhile, VEGF-A expression reached its maximal expres- sion with 7.5 mg/l NTG, but gradually declined by incubation with higher doses of NTG. There was a linear relationship between NO level and NTG concentration, but no changes of ONOO- and ROS levels were found when EPCs were incu- bated with 0.3-7.5 mg/l NTG. However, ONOO- and ROS levels were significantly increased when incubated with 15 and 20 mg/l NTG. Our data demonstrated that moderate dose of NTG may stimulate the proliferative activities of EPCs isolated from CAD patients.     

Reversible acetylation regulates vascular endothelial growth factor receptor-2 activity

The tyrosine kinase receptor vascular endothelial growth factor receptor 2 （VEG FR2） is a key regulator of angiogenesis. Here we show that VEGFR2 is acetylated in endothelial cells both at four lysine residues forming a dense cluster in the kinase insert domain and at a single lysine located in the receptor activation loop. These modifications are under dynamic control of the acetyltransferase p300 and two deacetyiases HDAC5 and HDAC6. We demonstrate that VEGFR2 acetylation essentially regulates receptor phosphorylation. In par- ticular, VEGFR2 acetylation significantly alters the kinetics of receptor phosphorylation after ligand binding, allowing receptor phos- phoryiation and intraceUular signaling upon proLonged stimulation with VEGF. Molecular dynamics simulations indicate that acetylation of the lysine in the activation loop contributes to the transition to an open active state, in which tyrosine phosphorylation is favored by better exposure of the kinase target residues. These findings indicate that post-translational modification by acetyiation is a critical mechanism that directLy affects VEGFR2 function.     

大鼠非酒精性脂肪肝模型的建立及内皮一氧化氮合酶的表达

非酒精性脂肪肝是一种以肝细胞脂肪变性和脂肪储集为特征的综合症,有潜在发展成终末期肝病的危险,但目前该病病因和发病机制仍然不清楚,体外有效动物模型的构建对于研究疾病的发生、发展及防治都十分重要。本实验通过高脂、高胆固醇饮食喂养SD大鼠,探讨高脂、高胆固醇饮食在诱导非酒精性脂肪肝中的作用,     

杀伤血管内皮生长因子受体 1 阳性细胞的靶向毒素

白喉毒素 (diphtheria toxin DT) 是棒状白喉杆菌被β噬菌体感染后分泌的一种外毒素. 它可以阻断真核细胞的蛋白质合成,杀死细胞. 血管内皮生长因子 (VEGF) 的 R82A, K84A, H86A 突变体可以和肿瘤血管上高表达的 VEGF 受体 1 (VEGFR-1) 特异性结合. 首先从白喉杆菌中提取基因组 DNA,扩增出白喉毒素 C 区、 T 区基因. 并运用点突变技术,制成 VEGF 的 R82A, K84A, H86A 突变体. 利用这个可以和肿瘤血管上特异性受体相结合的 VEGF 的突变体,代替白喉毒素上的受体结合区,制成了针对 VEGFR-1 的靶向融合毒素——— DT391-mVEGF. 以去除了受体结合区的 DT391 为阴性对照,细胞实验表明,融合毒素对 VEGFR-1 阳性的肿瘤细胞有特异性杀伤作用.     

急性低氧对家兔血压心率微血管反应性及自由基的影响

目的 :探讨不同急性低氧下的血压、心率、微血管反应性和自由基的影响。方法 :实验采用家兔人工吸入含氧量为 12 .5 %和 8.5 %氮氧混合气体 (模拟 4 0 0 0m和 6 5 0 0m高原急性低氧 )。急性低氧时间分别为 5、10、15、2 0min ,观察血压、心率、微血管反应性和自由基影响。结果 :①急性低氧 5min时收缩压略有升高 ,以后变为降低 ;舒张压在急性低氧 2 0min后明显降低 (P <0 .0 5 ) ;②心率随急性低氧时间的延长变慢 ,尤其含氧量 8.5 %急性低氧组明显 (P <0 .0 5 )。③眼结膜微血管管径随急性低氧时间延长呈现扩张 (P <0 .0 5 ) ,血细胞流速减慢 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。④急性低氧 2 0min后SOD活力明显降低 (P <0 .0 5 ) ,MDA含量升高 (P <0 .0 5 )。结论 :急性低氧可使血压降低 ,心率减慢 ,微血管管径变大和血细胞流速减慢 ,同时体内自由基产生增加。     

血管形成在双歧杆菌预防大肠癌生长中的作用

目的 从血管形成角度探索青春型双歧杆菌预防大肠癌生长的途径。方法 建立大肠癌裸鼠移植瘤模型,以免疫组化法检测大肠癌组织血管内皮生长因子（VEGF）的蛋白表达水平及其微血管密度（MVD）。结果 双歧杆菌预防组大肠癌VEGF的阳性细胞密度及MVD的数量均明显低于肿瘤对照组（P〈0．01）。结论 青春型双歧杆菌能下调大肠癌VEGF的表达,进而抑制其血管形成,这可能是它预防大肠癌生长的途径之一。     

HIF-1α/VEGF在稽留流产患者绒毛组织中的表达及其与微血管密度的关系

目的:探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)在稽留流产患者绒毛组织中的表达及其与微血管密度的关系。方法:采用免疫组织化学方法分别检测了30例人工流产和30例稽留流产患者绒毛组织的微血管密度(MVD)、HIF-1α和VEGF的表达。分别在缺氧(1%O_2、5%CO_2和94%N_2)和常氧(20%O_2、5%CO_2和75%N_2)条件下培养HTR8/SVneo细胞,并通过转染HIF-1αsi RNA来敲低HIF-1α。通过q RT-PCR和Western blot分析HTR8/SVneo细胞中HIF-1α和VEGF的m RNA和蛋白表达。此外,通过小管形成实验评价缺氧及转染HIF-1αsi RNA对HTR8/SVneo细胞小管形成的影响。结果:稽留流产组织样本中的MVD显著低于人工流产(7.22±0.55 vs 14.65±1.12,P0.05)。HIF-1α和VEGF在稽留流产组织中的表达显著低于人工流产组织(P0.05)。HIF-1α和VEGF的表达均与MVD显著正相关。与常氧相比,缺氧可显著上调HIF-1α和VEGF的m RNA和蛋白水平(P0.05)。转染HIF-1αsi RNA显著下调HIF-1α和VEGF的m RNA和蛋白水平(P0.05)。与常氧相比,缺氧可显著促进HTR8/SVneo细胞的小管形成(P0.05),而转染HIF-1αsi RNA则可显著抑制显HTR8/SVneo细胞的小管形成(P0.05)。结论:胎盘发育过程中的缺氧环境丢失及HIF-1α/VEGF的抑制可能是稽留流产发病的一项机制。     

氧化应激、血管内皮功能障碍与高血压

高血压是心血管疾病的主要危险因素之一,降低血压对于减少心血管事件的发生有的重要的意义。高血压的病理生理机制复杂,其共同特点是活性氧的利用度增加,即氧化应激。在心血管系统中,活性氧在控制血管内皮功能、血管张力和心功能方面有着重要作用,并在炎症、肥大、增殖、凋亡、迁移、血管生成等病理生理过程中也发挥一定的作用,均参与了高血压所致的内皮功能障碍。虽然,动物实验研究的结果表明氧化应激是高血压的发病机制,但目前尚无明确的证据支持氧化应激在人群中导致高血压的发生。内皮功能障碍是血管内皮受到刺激后血管舒张反应下降,众多的研究证据表明其是介导高血压血管负面影响的重要机制之一,且有研究表明高血压相关的内皮功能障碍是由氧化应激所致。本文主要就高血压中的氧化应激、血管内皮功能障碍的实验研究、机制以及在高血压发生发展中两者的关系进行了综述。