硫糖铝对幽门螺杆菌VacA IgY的保护作用的动物实验评价

目的评价硫糖铝在胃内对H.pyloriVacA IgY型抗体的保护作用,为制备H.pyloriVacA IgY型抗体口服剂提供实验依据。方法大量诱导工程菌DH5α-vacA-pQE30,表达并纯化重组蛋白VacA。以VacA为抗原接种洛曼母鸡,制备纯化的IgY。建立H.pylori感染的小鼠模型,在不同浓度的IgY液中分别加入30%硫糖铝,灌胃后观察胃黏膜慢性炎症反应以评价硫糖铝在胃内对VacA IgY的保护作用。结果在小鼠胃内,0.5mg IgY+30%硫糖铝/天灌胃小鼠即可有效防治H.pylori感染引起的胃黏膜损害,与不加硫糖铝比较,其效果提高了8倍。结论 30%以上的硫糖铝在小鼠胃内可增强VacA IgY对低pH和胃蛋白酶的耐受能力,是较理想的抗H.pyloriVacA IgY型抗体保护剂。     

α-芋螺毒素AnIB[A11G]荧光标记的合成及应用

目的:合成α-芋螺毒素AnIB[A11G]荧光标记物,并用于测定烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)α3β2在小鼠脑内的分布。方法:利用两步氧化法设计合成α3β2高选择性抑制剂AnIB突变体AnIB[A11G],纯化后,用5-羧基四甲基罗丹明琥珀酰亚胺酯(5-TAMRA-SE)标记,标记物鞘内注射到小鼠脑内,用激光扫描共聚焦显微镜测定α3β2在小鼠脑内的分布。结果与结论:获得了单一5-TAMRA-AnIB[A11G]荧光标记物,测定表明小鼠脑内nAChRα3β2主要分布于海马区域。     

阿奇霉素联合痰热清治疗小儿肺炎支原体肺炎疗效观察

目的:探讨阿奇霉素联合痰热清治疗小儿肺炎支原体肺炎(mycoplasma pneumoniae pneumonia,MPP)的临床疗效.方法:124例MPP患儿随机分为对照组(56例)与治疗组(68例),其中对照组给予阿奇霉素序贯治疗,治疗组则在此基础上另外给予痰热清治疗.采用双抗体夹心ELISA法、免疫比浊法分别检测治疗前后所有MPP患儿血清CRP、IL-6与TNF-α含量.同时观察比较两组临床疗效、症状体征及不良反应情况.结果:①经治疗所有患儿血清CRP、IL-6与TNF-α浓度均明显下降(P<0.01),治疗组与对照组间差异无统计学意义(P0.05).②治疗组总有效率为97.06%,显著高于对照组83.93%的总有效率(P<0.05).③治疗组退热时间,咳嗽和肺啰音消失时间均显著短于对照组(P<0.05).④治疗组不良反应发生率明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:痰热清联合阿奇霉素序贯疗法治疗小儿MPP安全有效,值得进一步推广.     

PA domain4-Fc融合蛋白抗血清可以保护小鼠巨噬细胞免受炭疽毒素损害

目的:探讨炭疽杆菌保护性抗原PA(protective antigen)domain4能否作为炭疽疫苗和炭疽感染时紧急预防用药.方法:构建含有PA domain4和人IgG Fc片段的表达载体,通过免疫大耳白兔获得针对该融合蛋白的免疫血清,通过小鼠巨噬细胞保护试验验证PA domain4-Fc是否具有疫苗和紧急预防用功能.结果:获得了表达PA domain4-Fc融合蛋白的CHO细胞株和针对PA domain4-Fc的兔抗血清,细胞保护试验证实PA domain4-Fc抗血清能够保护小鼠巨噬细胞免受炭疽毒素的攻击,但PA domain4-Fc蛋白本身并不能直接拮抗炭疽毒素对细胞的损害.结论:PA domain4-Fc抗血清可以保护小鼠巨噬细胞免受炭疽毒素损害,表明PA domain4-Fe具有作为炭疽疫苗的可能,但PA domain4-Fc蛋白不能直接竞争性拮抗炭疽毒素损害细胞.     

IL-1023-57-PE40分泌表达的初步研究

将IL-1023-57-PE40基因与pelB信号肽融合置于pET-20b构建分泌表达质粒pET-20b-IL-1023-57-PE40,然后将pET-20b-IL-1023-57-PE40分别转化至BL21(DE3),BL21(DE3)pLysS,Rosetta(DE3),E·coliK12TB1,ER2566中。无论是在37℃或是在26℃,亦或在培养基中添加葡萄糖的情况下,IPTG诱导后,IL-1023-57-PE40蛋白只在BL21(DE3)pLysS菌中以可溶分泌形式表达,其中以37℃时培养基中不添加葡萄糖表达量为最高,占菌体蛋白总量的15%,说明蛋白的分泌表达与菌种的选择有关。表达产物经免疫印记检测可被抗PE40的特异抗体识别。通过质粒稳定性实验证明,pET-20b-IL-1023-57-PE40在BL21(DE3)中不稳定,导致蛋白的不表达,在Rosetta(DE3)BL21,E·coliK12TB1,ER2566中稳定但不表达,因此,以Rosetta(DE3)BL21为例,通过SDS-PAGE、DNAStar和ANThewin蛋白分析软件对本室构建的几种PE重组毒素进行比较分析,我们发现:并不是所有PE重组毒素融合信号肽序列后,就能分泌表达,PE重组毒素分泌表达还可能与导向部分的性质有关。     

幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A对人胃腺癌上皮AGS细胞蛋白质组的影响

为明确幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A(CagA)在致病过程中对宿主细胞蛋白质表达的影响及其与CagA磷酸化的相关性,分别用野生型cagA质粒和磷酸化位点突变型cagA质粒转染人胃腺癌上皮AGS细胞,应用表面加强激光解析电离-飞行时间质谱技术,分析细胞蛋白质组的改变。结果表明,在可捕获的400多个蛋白质中,野生型CagA可使AGS细胞质荷比为4229、4714、4728、5129、6546、6657、8162、9084、13803、14021的10个蛋白质表达上调,质荷比为2013、4286、8563、9952、11085、11645的6个蛋白质表达下调。突变型CagA只能使质荷比为4714、4728、6546和6657的蛋白质表达上调。这些结果提示,这16个差异表达蛋白质可能参与了CagA的致病过程,其中质荷比为4714、4728、6546和6657蛋白质表达的改变与CagA的磷酸化作用无关,而其余12个蛋白质表达的改变则都依赖于CagAEPIYA重复序列酪氨酸位点的磷酸化。这些发现为进一步探讨CagA的致病机制提供了实验依据。     

致病杆菌属和光杆状菌属细菌杀虫毒素蛋白

致病杆菌属和光杆状菌属细菌是一类分别与斯氏线虫属和异小杆属线虫共生的昆虫病原细菌 ,属肠杆菌科 ,此类细菌产生的杀虫毒素蛋白是近年来发现的一类高效、杀虫谱广的新型杀虫蛋白。此类毒素蛋白对多种昆虫具有注射和口服毒性 ,在同一菌株中有多个杀虫基因 ,各杀虫蛋白基因之间具有协同毒力效应 ,杀虫蛋白基因在大肠杆菌和植物中表达的毒素蛋白对多种害虫具有口服毒性。     

大肠杆菌O157噬菌体中vt2基因A、B亚单位的克隆与序列分析

根据GenBank中毒素基因 vt1、vt2序列设计合成 4 对引物,以大肠杆菌 O157 菌株 DNA为模板,扩增 vt1、vt2,从只含有vt2的菌株中诱导释放噬菌体,以噬菌体DNA为模板进行PCR扩增,获得vt2、vt2 A、vt2 B 3条特异性DNA带;将 vt2 A、vt2 B扩增产物纯化后,分别插入 pMD18 T载体,测序结果与相应序列比较,vt2 A和 vt2 B亚单位的基因序列与 GenBank中编码 VT2 毒素的 A、B亚单位的核苷酸序列(X07865,NC_002655, BA000007,AF291819)的同源性分别为98%~99%、96%~100%,确定 vt2 位于噬菌体,并为进一步研究大肠杆菌 O157 中VT噬菌体的毒力转导、VT2毒素的表达和应用奠定基础。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇抑制体外培养人外周血单个核细胞低分子量蛋白酶体-2表达

探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对人外周血单个核细胞参与抗原呈递的低分子量蛋白酶体-2(LMP-2)表达的影响。采用流式细胞术(FCM)和半定量RT-PCR方法从蛋白质和mRNA水平分析了不同剂量DON对体外培养人外周血单个核细胞LMP-2分子表达的影响及其量效关系。FCM定量检测结果表明,不同浓度DON处理均可一定程度抑制人外周血单个核细胞LMP-2的表达,50ng/mlDON组、100ng/mlDON组、1000ng/mlDON组和2000ng/mlDON组LMP-2平均荧光强度分别为6.99±0.72、6.21±0.55、5.34±0.56和5.03±0.43,在50～2000ng/mL范围内随着DON浓度增加,外周血单个核细胞LMP-2表达降低,与DON浓度呈显著负相关(r=0.824,P<0.01)。半定量RT-PCR结果显示,不同浓度DON处理均可抑制人外周血单个核细胞LMP-2mRNA表达。DON在蛋白质和mRNA水平可剂量依赖地抑制体外培养的人外周血单个核细胞LMP-2的表达。     

炭疽毒素受体胞外区在毕赤酵母中分泌表达、纯化与活性鉴定

使用分泌型表达载体,实现了重组炭疽毒素受体胞外区 (rATR(CMG2)-EXCELL) 在毕赤酵母 KM71H 培养物上清中的分泌表达 . 表达量约占培养物上清总蛋白质的 20%. 经过螯合柱初步纯化,每升诱导培养物可获得约 1 mg 电泳纯的 rATR(CMG2)-EXCELL. 体外与配基 PA 结合试验和细胞保护试验显示, rATR(CMG2)-EXCELL 具有很好的生物活性 . rATR(CMG2)-EXCELL 的成功表达为今后研究炭疽毒素受体的作用机理、发展新型炭疽治疗药物打下基础 .