虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅵ的分离纯化与鉴定

通过离子交换及反相HPLC,从虎纹捕鸟蛛毒液中分离得到1种新的哺乳类神经毒素,命名为虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅵ（Huwentoxin-Ⅵ,HWTX-Ⅵ）。MALDI-TOF质谱仪分析及氨基酸序列分析表明该多肽毒素分子量为4.44018kDa,序列为H2N-CIGEG VPCDE NDPRC CSGLV VLKKT LHGIW IKSSY CYKCK-COOH,其中6个Cys形成3对二硫键,小鼠脑内注射实验表明,HWTX-Ⅵ对神经系统具有明显的致瘫作用。这种致瘫作用又具有可逆性。     

华丽蛇毒素RGD序列上游点突变对结构和功能的影响分析

解联蛋白（disintegrin)是一类存在于蛇毒中的血小板凝集抑制因子。研究表明,Arg-GLT-Asp(RGD)序列与解联蛋白的生物学活性有密切关系。紧靠RGD序列两翼的氨基酸残基有调节解联蛋白抑制ADP-诱导血淖板凝集作用,RGD序列侧翼的第45位氨基酸残基位于该类蛋白内部形成的小槽内,这个小槽在RGD袢形成发夹结构方面起重要作用,在此基础上,本文进一步分析了RGD袢形成发夹结构方面起重要作用,在此基础上,本文进一步分析了RGD袢上游区域氨基酸残基在调节解联蛋白功能中的作用。具体方法是：用基因点突变技术将华丽蛇毒素的K^41K^42K^43R^44T^45I^46突变腹蛇毒素的S^41K^42A43G44T45I46和S^41K42A43G44I46。然后分析突变蛋白的结构。性质和功能变化。结果表明,前一种突变K^41K42A^43R^44T45I46→S^41K^42A^43G^44T^45I^46显著地降低了华丽蛇毒素对血小板凝集和抑制活性,后一种突变S^41K^42A^43G^44T^45I^46→S^41K^42A^43G^44I^46有效地恢复了华丽蛇毒素抑制血小板凝集的作用。同时,这两种突变也改变了含点突变基因的pGEX-3X质粒在受体细胞（E.coli)内的表达。例如,重组于pGEX-3X质粒的野生型腹蛇毒基因和华丽蛇毒素基因以可溶性形式表达,而重组于相同载体的点突变基因表达的目的蛋白是不溶性的,为此,本文又通过构建表达难溶蛋白载体的方法获得了突变基因的可溶性表达产物。本文首次证实了RGD上游的39-45位氨基酸残基与解联蛋白的结构和功能有密切关系。     

炭疽毒素及其细胞受体的研究进展

炭疽毒素由 3种蛋白组成 :保护性抗原 (protectiveantigen ,PA)、致死因子 (lethalfactor,LF)和水肿因子 (edemafactor ,EF) .综述炭疽毒素研究的最新进展 .主要介绍炭疽毒素的关键致病因子———LF的结构与功能 ,炭疽毒素膜转运成分PA的结构及其受体 (anthraxtoxinreceptor ,ATR)和其cDNA克隆的结构 ,并讨论了在炭疽的治疗、预防和毒素在肿瘤治疗中的可能应用 .     

老兵又谱新传——新的糖基化方式、新的功能

在自然界中 ,糖类分子无所不在。虽然仍是那么一些单糖 ,但是在新的糖基转移酶作用下 ,以新的糖基化方式出现 ,就产生了新的功能。1.引子传统的概念是糖基转移酶定位在内质网和高尔基体中 ,它们的功能是合成糖苷键 ,在一组糖基转移酶的协同下 ,可以形成糖链。后来在哺乳动物精子的表面发现了半乳糖基转移酶 ,人们认识到糖基转移酶及其相关的糖链还可以参与细胞之间的识别和粘着。此后不仅在精子表面 ,而且在神经细胞表面也发现了一些糖基转移酶[1] 。在细胞质中发现Ｏ ＧｌｃＮＡｃ的糖基化及其对应的糖基转移酶和糖苷水解酶以后 ,极大地拓…     

短肽蝎毒素的结构分类与功能特征

大量的资料已证实蝎毒中主要致死成分是一类由60～70个残基组成, 选择性地作用于电压门控Na⁺通道的长肽毒素.另一类由30～40个残基组成的短肽蝎毒素,由于其具有结构致密,易于合成改造的优点,特别是具有选择性地阻遏K⁺或Cl^－通道的特异药理功效,近年来倍受学术界的关注,并在结构与功能方面取得了很大的研究进展.     

短间隔连续部分肝切除(SISPH)对大鼠肝ACP、AKP、 HSC70/HSP68和PCNA的影响

本文以间隔时间(4h和36h)相互交叉的短间隔连续部分肝切除(36-4-4 SISPH和4-36-36-36SISPH)为模型,分析了ACP、AKP、HSC70/HSP68和PCNA的活性和含量变化.结果表明140 kD的ACP和AKP活性在两种模型中都随着肝切除次数的增加而增加,而160 kD的AKP和ACP则与此相反;PCNA在4-36-36-36 SISPH中比在36-4-4SISPH中表达更多,而HSC70/HSP68的表达则与此相反.可见,连续部分肝切除的次数和方式能影响ACP、AKP、HSC70/HSP70和PCNA的活性和含量,并讨论了其可能的机理和生理意义.     

蜘蛛多肽毒素JZTX-51和JZTX-26的重组表达和纯化

为建立一种简便、快速且能大量获得富含二硫键的蜘蛛多肽毒素JZTX-26 (35 aa)和JZTX-51 (27 aa)的有效方法,利用PCR的方法克隆成熟肽编码基因并插入至大肠杆菌Escherichia coli表达载体pMAL-p2x中与MBP(麦芽糖结合蛋白)标签融合,构建重组表达质粒pMAL-jz26和pMAL-jz51。在受体菌TB1和BL21(DE3)中对两个重组表达质粒分别进行IPTG诱导表达,通过Amylose亲和层析柱纯化并进行SDS-PAGE分析;采用因子X对融合蛋白进行酶切后通过分子筛以及反相高效液相色谱对两种重组蛋白进行纯化。通过MALDI-TOF-TOF质谱鉴定,表达产物的分子量与预期的多肽理论分子量一致。1L表达培养液中能获得大约5mg纯化的目的蛋白JZTX-26或JZTX-51。结果表明利用该原核表达体系可对蜘蛛毒素基因jztx-26和jztx-51进行融合表达,并对重组蛋白进行亲和层析,为采用基因工程的手段大量获得蜘蛛多肽毒素奠定了基础。     

深圳市金黄色葡萄球菌耐药性分析及分子分型

目的了解深圳市金黄色葡萄球菌的耐药性特点及分子分型特征。方法收集2012年来自深圳市7所医院的428株金黄色葡萄球菌,以琼脂稀释法测定其对12种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC),采用聚合酶链式反应(PCR)检测杀白细胞毒素(PVL),并对携带PVL基因的菌株进行多位点基因序列分型(MLST)。结果428株金黄色葡萄球菌中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)共116株(26.2%),甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)共312株(73.8%)。在12种抗菌药物中,该菌对青霉素和红霉素的耐药率最高,分别为88.8%和44.2%;未发现替考拉宁、利奈唑胺和万古霉素的耐药株。MRSA对青霉素和环丙沙星的耐药率显著高于MSSA。428株金黄色葡萄球菌中,有60株(14.02%)携带PVL基因。MLST分型结果显示共有14种已知序列型和4种新的序列型,其中ST59和ST338最多,分别为16株和12株。结论深圳地区金黄色葡萄球菌MRSA检出率以及对多种抗菌药物的耐药率均低于全国平均水平,PVL基因阳性率处于中等水平;存在多种ST分型,以ST59和ST338多见,具有遗传多样性和独特的遗传背景。     

T载体介导的基于attL核心区LR反应的简化快速Gateway克隆系统

Gateway克隆技术已得到广泛的应用。该技术先通过BP反应将目标片段连到带有完整attL特异识别位点的入门载体,然后与终载体通过LR反应得到表达载体。Gateway克隆方法与传统的酶切连接方法相比有快速简单等优点。但是,BP和LR酶都非常昂贵。本研究首先对3个常用Gateway载体的atts特异位点序列比对发现,attL序列核心交换位点“core attL”的21~22 bp长的碱基是保守和必要的。由此,设计含有core-attL序列的引物,通过PCR克隆得到DNA片段并连入pMD18-T载体,然后进行LR反应,可成功得到目标表达载体,并在保守的位点上正确重组。本研究还对其中一个带有绿色荧光蛋白基因的表达载体转化至烟草,能够正常表达该蛋白质。结果表明,通过将含有attL核心位点基因片段连接到pMD18-T载体上,可以省略BP反应而将目标片段连接到终载体上,节约了反应时间和成本。