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重组猪α干扰素基因定点突变及在大肠杆菌中的表达 总被引:9,自引:0,他引:9
用巨引物PCR法介导的定点突变把猪α干扰素(PoIFNα)第86位Cys(TGC)突变为Tyr(TAC),同时将其成熟蛋白N端第一个密码子TGT同义突变大肠杆菌偏爱的密码子TGC,构建了大肠杆菌融合基因表达载体pGEXIFN,表达产物占菌体总蛋白的20%。将以包涵体形式表达的目的蛋白经变、复性处理,并以FPLC进一步纯化,得到了具有较高生物活性的产物(5200IU/mg)。 相似文献
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Potyvirus属成员基因组全序列的简并引物PCR和RACE扩增方法 总被引:11,自引:4,他引:7
Based on multi-alignment of complete polyprotein amino acid sequences of genus Potyvirus,five degenerated primers were designedThey were Sprimer(5′-GGX AAY AAY AGY GGX CAZ CC-3′),pNIa(+)(5′-TNY TGG AAM CAY TGG AT-3′),pCI2(+)(5′-GCX ACX AAX ATX ATX GAX AA-3′),pCI1(+)(5′-GTX GGX TCX GGX AAX TCX AC-3′)and pHC(+)(5′-TGY GAY AAY CAZ TTX GA-3′)(X=A,T,C or G:Y=T or C;Z=A or G;N=A or T;M=A,T or G)Using degenerated PCR and modified RACE methods,a protocol for determination of complete genome sequence of potyviruses was established and proved to be successful on five potyviruses 相似文献
65.
用PCR法快速测定食物中毒病原菌 总被引:7,自引:0,他引:7
介绍近年来PCR法在快速测定食物中毒病原菌中的大肠杆菌、沙门氏菌、弧菌等应用研究。 相似文献
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对番茄RAPD分析的有效引物与Operon引物系列(OP系列)的3′端序列作了统计比较。研究结果指出,番茄有效引物系列不是OP系列的随机样本,而是3′端序列的种类和分布上有偏倚性的选择性样本。虽然两个系列的引物都具有3′端同序现象,但对其分布频率正交比较结果差异极显著,此类同序性3′端在番茄基因组的RAPD座位中是普遍分布的。RAPD引物3′端序列的非随机分布,反映了番茄基因组内的多态性区段侧翼具有序列的特异性,这种特异性结构应是番茄基因组序列的一种属性,这种属性为番茄属基因组所共有。
Abstract:The study of compared effectual primers 3′ end sequences between RAPD analysis used in tomato and Operon system. It is suggested that 3′ end sequences of primers for tomato RAPD are not the random samples of OP system, their 3′ end sequences are partial distribution in kinds and frequency. Though there have homologous sequences at 3′ end in both systems. But their distribution of frequency shows significant difference in orthogonal comparison. The 3′ ending homologous sequences in RAPD loci are found all over in tomato genome.Therefore the nonrandom distribution of 3′ end sequences of effectual primers in tomato RAPD reflected the sequence-specific structure may occur in tomato genome at flank of polymorphic regions. It is probably an attribute of tomato genomic sequence and is common in Lycopersicon. 相似文献
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应用红外荧光和加尾引物法进行向日葵SSR遗传分析中的多聚PCR和多聚凝胶电泳的优化 总被引:2,自引:0,他引:2
在向日葵(Helianthus annuus L.)自交系SSR遗传分析中,为了提高SSR荧光分析效率、简化分析程序和降低研究费用,我们进行了多聚PCR和多聚凝胶电泳两项技术的优化研究。结果表明,优化多聚PCR和多聚凝胶电泳的影响因子(如逐步降低的退火温度的循环数、各个多聚位点引物浓度的平衡、PCR缓冲液浓度以及Taq DNA多聚酶的浓度等)可以收到更好的实验效果。基于以上的优化研究,系统地提出了一套优化的加尾引物法的策略。同时,提出了在多聚PCR和多聚凝胶电泳中常常遇到的技术难题的有效防止和解决的方法。 相似文献
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方虹 《中国生物工程杂志》1987,7(5):65-68
最近发表在《Focus》杂志上的几篇文章,论述了几种改进测定含dG·dC或dA·dT同聚物区M13模板序列的方法。包括以AMV(禽类髓细胞瘤病毒)逆转录酶代替DNA聚合酶Ⅰ大片段(Klenow fragment),以及仍用Klenow片段但提高测序反应温度等。 相似文献