RT－PCR联合一步法扩增G蛋白α亚基基因的开放阅读框

报道逆转录－多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）联合一步程序,扩增大于１ｋｂ的拟南芥菜Ｇ蛋白α亚基基因的开放阅读框。该程序中,当ＲＮＡ模板和引物变性,并在同一管中加入ＰＣＲ缓冲液、４种ｄＮＴＰ底物、逆转录酶和ＴａｑＤＮＡ聚合酶之后,就不需其它手工操作步骤,因而可同时进行大批量样品的操作。实验结果证明ＡＭＶ（鸟类骨髓性白血病病毒）逆转录酶对ＴａｑＤＮＡ聚合酶的活性没有抑制作用。这种ＲＴ－ＰＣＲ联合一步法可从０．５μｇ的总ＲＮＡ中快速地扩增长于１．０ｋｂ的ｃＤＮＡ片段。     

人乳头瘤病毒16型E_7开放读码框编码免疫反应表位的定位

用核酸外切酶Ⅲ和s1核酸酶,逐步缺失能在原核细胞中有效表达人乳瘤病毒16型E_7开放读码框的质粒P16E_7TNP1,获得了一系列DNA逐渐缩短的质粒。它们能在大肠杆菌中表达产生一组从羧基端往氨基端逐步减少的融合蛋白,用Western blot方法检测相应融合蛋白与阳性血清的免疫反应。分析实验结果,编码免疫反应表位的核酸序列于619至644之间。     

青岛文昌鱼LIM类基因Bblim同源框区的cDNA克隆、序列分析及其在胚胎发育中的表达

不同卵裂球发育命运的特化、亦即胚胎细胞的分化是动物胚胎发育的重要特征。多数胚胎细胞尽管形态特征完全一致,却具有不同的发育命运。预示着：在这些细胞中存在有决定发育命运的因素－决定子。本工作克隆了青岛文昌鱼LIM类同源框基因的同源框片段。目的在于揭示决定子的分子本质。青岛近海采集性成熟的成年青岛文昌鱼,收集未受精卵、受精卵以及各处不同时期的胚胎,液氮冻存备用。分别制备总RNA。根据其它动物LIM类同源框基因的序列设计引物（Tab.1),连续进行RT－PCR和PCR两次扩增。其中,原肠胚来源的第二次PCR产物经电泳鉴定（Fig.1)后,酶切、克隆入质粒、测序、将该片段所在的基因命名为Bblim基因,该自然称为Bblim同源框。根据Bblim基因同源框的核苷酸序列推导出其相应的氨基酸序列（Fig.2),与其它LIM类同源框基因进行比较（Fig.3)后,认为：Bblim基因可归入lim3类基因。比较胚胎发育各个不同时期第二次PCR产物的含量－即Bblim基因的转录（Fig.4),提示：该基因可能在受精后和原肠成形前后两个发育阶段起作用。此外,Bblim基因的同源域与海鞘Hrlim的同源域高度同源,表达模式也相似,提示,Bblim基因可能是Hrlim基因在文昌鱼中的类似物。     

离子通道开放状态检测法的计算机模拟研究(Ⅱ)

本文（Ⅱ）在文（Ⅰ）的基础上进一步探讨了将多指数函数检测法和连续平均开放时间检测法相结合的离子通道开放状态检测法．侧重分析了两开放状态平均开放时间的比值和同一开放状态连续出现的次数对自相关函数的影响,并给出了实施流程.本文提供的计算机模拟研究方法对研究生物医学的其它问题也有参考价值.     

广东麻鸭DHBV全基因克隆及新读码框的发现

选取3份DHBV阳性广东麻鸭血清提取DHBVDNA,设计一对扩增DHBV全基因序列引物Q1和Q2,扩增并克隆DHBV全基因序列,测序并运用相关计算机软件及方法分析获得的全基因序列。结果表明,广东麻鸭DH-BV全长为3027bp。提交GenBank后获得的收录号分别为:AY433937、AY521226、AY521227(来自1号血清);AY392760、AY536371(分别来自2、3号血清)。AY521227的PreS/SORF出现了单碱基突变,在PreC/CORF之前发现一个新的ORF,暂命名为HORF,HORF也同时存在于GenBank中储存的另外8个DHBV全基因序列中。系统发育分析表明,广东麻鸭DHBV在分化程度上是目前储存于GenBank中的DHBV全序列中最高的。成功克隆了广东麻鸭DHBV全基因序列,序列分析为进一步研究广东麻鸭DHBV提供了有益的信息。     

《实用密码子》计算机软件分析基因重复测序结果的应用价值探讨

用《实用密码子》计算机软件分析阿拉伯糖代谢酶C调节蛋白基因 (AraC)以及细胞周期素依赖型蛋白激酶反应蛋白基因 (C1P1)的五组重复测序结果 ,发现该软件不仅能用图示分析方法准确显示编码序列及编码容量 ,而且其依据生物界密码子偏倚规律 ,采用比较法评估高频率使用实用型密码子的优质开放读码框架。《实用密码子》能使分析者对复杂多量的核酶信息做初步筛选 ,从而取舍冗余的基因信息。     

广东麻鸭DHBV全基因克隆及新读码框的发现

选取3份DHBV阳性广东麻鸭血清提取DHBV DNA,设计一对扩增DHBV全基因序列引物Q1和Q2,扩增并克隆DHBV全基因序列,测序并运用相关计算机软件及方法分析获得的全基因序列.结果表明,广东麻鸭DH-BV全长为3027bp.提交GenBank后获得的收录号分别为AY433937、AY521226、AY521227(来自1号血清);AY392760、AY536371(分别来自2、3号血清).AY521227的PreS/S ORF出现了单碱基突变,在PreC/CORF之前发现一个新的ORF,暂命名为HORF,HORF也同时存在于GenBank中储存的另外8个DHBV全基因序列中.系统发育分析表明,广东麻鸭DHBV在分化程度上是目前储存于GenBank中的DHBV全序列中最高的.成功克隆了广东麻鸭DHBV全基因序列,序列分析为进一步研究广东麻鸭DHBV提供了有益的信息.     

人肝癌组织中的一个Lis1基因的阅读框移码突变

将ＧＳＴ融合蛋白表达与蛋白质截短检测法（ＰＴＴ）法相结合,检测Ｌｉｓ１基因在肝癌组织中的阅读框移码突变。即从肝癌组织中通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增的Ｌｉａ１基因克隆人ＧＳＴ融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ０１,并于大肠杆菌ＤＨ５α中进行表达。通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳发现肝癌组织中有截短的ＧＳＴ－Ｌｉｓ１融合蛋白,大小为３３ＫＤ,而全长融合蛋白大小应为７１ＫＤ。经测序验证,发现产生截短蛋白的Ｌｉａ１基因在第１６３位     

开放性骨折并发气性坏疽

1　材料与方法1 .1　病例　男 ,34岁。因左腿外伤入院 ,神志清醒 ,全身状况良好。 X线显示左小腿胫腓骨下段开放性粉碎性骨折 ,体温 36.8℃ ,WBC88× 1 0 9/L,N0 .72 ,Hb1 40 g/L。入院后 ,行清创缝合骨折复位牵引术 ,并予青霉素治疗。 4d后 ,患腿肿胀发黑 ,迅速向上蔓延 ,触之有捻发感 ,并有异臭 ,体温 38.2℃ ,X线显示患肢软组织肿胀 ,皮下及软组织间积气 ,肌肉间隙消失 ;查 Hb 1 1 0 g/L,WBC2 2 .0× 1 0 9/L,N0 .84,患部分泌物直接涂片有革兰阳性大杆菌 ,少数芽胞。行截肢术后 ,据细菌培养及药敏结果用敏感抗生素治疗 ,3d、6d后…     

大庆市生态城市建设的影响因素与对策

大庆是一个典型的资源型城市,是中国最大的石油化工基地,针对大庆在生态城市建设中存在的草原"三化"、石油石化工业生产对环境破坏和污染、对城市地域空间的优化重视不够等三大问题,分析了大庆所具有的优势和不利因素,提出了相应的对策和具体措施.由于草原"三化"问题严重,必须开展草原生态系统的修复和重建,要突出大庆草原型生态城市的特色;湿地是大庆市宝贵的资源,在严加保护的同时,要建立人工-自然复合湿地生态系统,充分发挥湿地的多种生态服务功能;石油化工生产对环境污染和破坏严重,必须开展"绿色油田"工程建设,以适应生态城市的需要;城市开放空间系统的优化是生态城市建设的关键,应采取建设生态公路、生态广场、生态小区及安装风光路灯、绿色建筑等优化措施.