主要病原念珠菌蛋白酶分泌水平的比较

目的了解不同病原念珠菌蛋白酶分泌情况,探讨蛋白酶活性与菌种致病力的关系.方法 采用牛血清白蛋白(BSA)琼脂平板检测7种(共286株)念珠菌酸性蛋白酶的分泌;将菌株分别经摇瓶液体培养测定胞外蛋白水解活力.结果7种念珠菌蛋白酶分泌水平的高低关系为白色念珠菌＞热带念珠菌＞近平滑念珠菌＞季也蒙念珠菌＞其他3种念珠菌,与菌种致病力强弱关系基本一致;白色念珠菌、热带念珠菌菌株平均产酶能力是光滑念珠菌、乳淋念珠菌的17.4～36.3倍.各种念珠菌产生的蛋白酶均属天冬氨酸蛋白酶类.结论蛋白酶与念珠菌致病性关系密切.     

一些化学和物理因素对羊瘙痒因子263K蛋白酶抗性的影响

朊病毒(prion)具有超强的理化因素抵抗能力,可抵抗常规物理和化学因子对其感染性的灭活.为了研究不同理化因素对PrPSc蛋白酶抗性的影响,采用不同浓度的NaOH、NaOCl、SDS、温度变化以及3%SDS与温度变化联合处理羊瘙痒因子263K,再经蛋白酶K(Proteinase K,PK)消化,通过Western blot检测观测PrPSc的PK抗性.结果发现,上述几种理化因素对羊瘙痒因子263K的PK抗性有不同程度的破坏作用.NaOH浓度在0.05mol/L以上,NaOCl游离氯含量在0.1%以上,温度在121℃以上都能使PrPSc的PK抗性消失;而1%～5%SDS不能使PrPSc的PK抗性完全消失,3%SDS与温度的联合作用可有效地破坏PK抗性,同时使所需温度降低.还发现,在较低浓度的化学因子或温度的条件下即可出现PK抗性的破坏,而在较高浓度或温度处理时才出现蛋白本身的消失.这些结果提示,与PrPSc感染性的结果相似,PK抗性可受相似浓度或强度的理化因素影响,具有明显的浓度或强度相关性,对判定消除PrPSc的感染性有一定的指导意义.     

艾滋病病毒蛋白酶高效表达载体及体外活性检测系统的构建

艾滋病是本世纪80年代初发现的一种烈性传染病,5年病死率为100％,致病因子为人免疫缺陷病毒,该病毒的蛋白酶在病毒复制和成熟中具有决定性的意义。由于目前国内外尚未获得艾滋病病毒蛋白酶的高效表达的重组子及活性检测系统,限制了它的研究与应用。本文利用PCR技术修饰了艾滋病病毒蛋白酶的基因,使其具有便于克隆及表达用的限制酶切位点及转录终止码,井在其C末端设置了一个可用于检验该酶活性的特殊序列。DNA序列分析揭示上述突变策略成功,将修饰后的艾滋病病毒蛋白酶基因克隆入大肠杆菌表达系统,并获得高效表达(>30％),Western-Bolt鉴定结果表明所表达的蛋白为艾滋病病毒所特有,并具有较好的生物活性。     

应用组织芯片技术研究MMP-9和PCNA在宫颈癌组织中的表达及其意义

目的探讨MMP-9和PCNA在宫颈癌组织中的联合表达、相关性及其临床意义。方法采用组织芯片和免疫组化技术检测143例宫颈浸润癌(ICC)、20例癌旁正常宫颈上皮(NCE)中MMP-9和PCNA的表达,统计分析MMP-9、PCNA表达与病理分级、临床分期和淋巴结转移等临床病理因素的关系。结果 MMP-9、PCNA在宫颈癌组织中的阳性率分别为89.5%(128/143)和93.7%(134/143),较正常宫颈组织中的阳性率40.0%(8/20)和15.0%(3/20)显著增高(P=0.000)。MMP-9的表达与病理分级(r=0.342,P=0.000)、淋巴结转移(r=0.197,P=0.018)和间质浸润深度(r=0.203,P=0.015)呈正相关。PCNA表达与临床分期(r=0.228,P=0.006)、病理分级(r=0.330,P=0.000)呈正相关。MMP-9和PCNA在宫颈癌组织中的表达强度呈正相关(r=0.228,P=0.006),二者表达一致的比例高达87.41%(125/143)。结论MMP-9和PCNA在宫颈癌中的异常表达与肿瘤的分化、侵袭和发展密切相关,联合检测二者的表达对于进一步理解宫颈癌的生物学行为和判断预后有一定价值。     

蛋白酶抑制剂对含水生菜种子耐冻性的影响

选取生菜(Lactuca sativa)种子作为试材,外源添加蛋白酶抑制剂2-硝基苯甲酸[5,5'-Dithiobis-(2-nitrobenzoic acid),DTNB]对种子吸胀处理,通过程序降温,分析2-硝基苯甲酸对低温下种子发芽率及生理活性的影响。结果表明,低温下含水生菜种子的致死温度为–20 ℃;外源添加2-硝基苯甲酸2 mmol·L–1时种子发芽率最高,即对种子活性的保护效果显著;在此浓度下种子内SOD活性比对照提高1.38倍,羟基自由基清除能力提高1.17倍;与对照组相比产生两种新的蛋白11 S种子贮藏球蛋白Jug r4和11 S种子贮藏球蛋白2,均属于球蛋白家族,可提高含水种子的耐冻性;低温下种子内积累更小分子量的球蛋白多肽,对种子具有低温保护效果。综上,低温条件下生菜种子产生一定的抗冷反应,外源添加2 mmol·L–1 2-硝基苯甲酸可提高含水种子发芽率及生理活性,产生抗冻蛋白,积累更小分子量的球蛋白多肽进而提高种子抗冻性。     

"杀手"蛋白酶caspase

细胞凋亡(apoptosis)或称程序性细胞死亡(Programmed cell death,PCD)是多细胞生物正常发育、分化过程中进行细胞删除的一种基本机制,与组织自稳、衰老及细胞损伤密切相关。凋亡异常可引起人类难治性疾病,如Parkinson’s 和Huntington’s 病,AIDS、Alzheimer’s病、免疫缺陷、自身免疫紊乱、缺血性心血管疾病、神经系统疾病、秃发、白血病、淋巴瘤及其他癌症,并与肿瘤治疗抗性有关。虽然细胞凋亡时许多生化事件已被确认,但凋亡诱发、调控的分子生化机制仍不明     

“两广二号”家蚕抗病毒基因Bmlipase-1和BmSP-2克隆与原核表达

本研究以优良杂交品种"两广二号"家蚕为试材,克隆了该杂交品种家蚕两个抗家蚕核型多角体病毒(BmNPV)基因:脂肪酶基因Bmlipase-1和丝氨酸蛋白酶基因BmSP-2,测序并分别与不同品种蚕的同源基因序列进行比较。结果显示,"两广二号"家蚕Bmlipase-1基因ORF长度为885bp,编码294个氨基酸,BmSP-2扩增长度为855bp,编码284个氨基酸;它们的核苷酸和推导氨基酸序列同源性皆达92%以上,Bmlipase-1更保守,同源性大于99%";两广二号"家蚕的Bmlipase-1基因脂肪酶活化部位和BmSP-2基因酶催化三联体位点的氨基酸残基与不同品种蚕的完全相同。以上结果说明这两个抗病毒基因在蚕的遗传进化过程中高度保守,提示其可能在机体消化或者免疫防御方面起着重要生理作用。将这两个抗病毒基因在大肠杆菌BL21中进行融合表达,获得的融合Bmlipase-1和BmSP-2蛋白分子量分别为47kD和42kD左右。     

基质金属蛋白酶

基质金属蛋白酶是一类分解细胞外基质组分的锌蛋白酶⒚它们在有机体生长发育中的细胞外基质逆转与重塑以及疾病中的病理损害起着极为重要的作用⒚基质金属蛋白酶的表达和活性在不同细胞水平受到严密调控,如细胞因子、生长因子以及激素的调节⒚基质金属蛋白酶以酶原形式分泌,随后被其它蛋白酶如胞浆素或非蛋白酶类化学物质如有机汞所激活⒚所有基质金属蛋白酶都受到天然抑制剂 金属蛋白酶组织抑制剂所抑制⒚两者的不平衡导致许多疾病的发生,如肿瘤侵入及转移⒚合成基质金属蛋白酶组织抑制剂所抑制,如 Ｍ ａｒｉｍ ａｓｔａｔ 能控制肿瘤转移的发生及进一步扩散⒚本文将对基质金属蛋白酶的特征、分子区域结构、底物特性、激活机制、调控方式等方面进行最新概述⒚     

壳聚糖固定化AS1．398中性蛋白酶稳定性的研究

对以壳聚糖为载体,由戊二醛作交联剂。制备的固定化ＡＳ１．３９８中性蛋白酶的稳定性进行了研究。实验结果表明,固定化ＡＳ１．３９８中性蛋白酶对热、乙醇、尿素以及ｐＨ值的稳定性均有明显的提高。