抗山羊ΔfosB基因表达产物抗体的制备及应用

ΔfosB是fosB基因的自然截短型,稳定存在于许多组织中,在脂肪细胞和成骨细胞的形成和分化中起到重要作用。ΔFosB蛋白可能与钙在骨和乳腺中的代谢有关,并且调控钙从骨向乳腺转移的信号通路。将奶山羊的ΔfosB基因亚克隆到pET32a载体得到pET32a-ΔfosB原核表达载体,IPTG诱导其在大肠杆菌中表达,纯化融合蛋白免疫兔子制备多克隆抗体。ELISA检测显示抗体效价达1:51200,Western blotting结果显示制备的抗体能特异性检测原核表达的ΔFosB蛋白以及在HEK-293细胞中表达的ΔFosB蛋白。进一步的组织差异表达检测表明ΔFosB在山羊的乳腺、骨髓、脑髓、肌肉、心脏、肝和肺组织中均有表达。     

转人t-PA指形区缺失基因的山羊体细胞核移植及其继代核移植

为了探索转基因体细胞核经连续核移植后的发育潜力,以转人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)指形区缺失基因的山羊胎儿成纤维细胞为核供体,MII期的卵母细胞质为核受体,利用胞质内注射法构建原代核移胚胎(G0),并进行了原代核移植胚胎的继代核移植研究。比较原代和继代核移植胚胎在体外发育能力上的差异;在G1、G2代核移植试验过程中,比较了供体胚胎细胞的发育阶段对核移植胚胎体外发育的影响。结果表明,原代核移植胚胎的卵裂率(76.45%±1.17%)与继代核移植胚胎的卵裂率(72.18%±1.97%,76.05%±2.38%,75.99%±2.84%)无显著性差异(P>0.05)。但原代核移植胚胎的桑葚胚率(47.20%±2.93%)、囊胚率(11.00%±1.42%)显著高于G1、G2、G3代核核移植胚胎的桑葚胚率(34.99%±2.66%,28.23%±2.00%,23.34%±1.99%)、囊胚率(3.87%±0.67%,2.08%±1.66%,0);在G1、G2中,当用16-细胞期核移植胚胎作为核供体时的桑葚胚率(29.57%±1.53%,24.43%±1.87%)、囊胚率(1.96%±1.31%,2.01%±1.34%)低于用32~64-细胞时期的核移植胚胎的桑葚胚率(34.32%±1.31%,29.76%±1.66%)、囊胚率(3.86%±1.03%,3.48%±0.34%),但无显著性差异(P>0.05)。由此得出结论:转基因体细胞核移植胚胎不宜进行多代克隆;胞质内注射法构建核移植胚胎,用32~64-细胞期的胚胎作为核供体构建的核移植胚胎的体外发育率高于用16-细胞期的胚胎作为核供体构建的核移植胚胎的体外发育率。     

气候与白昼长度变化对苏格兰拉姆岛上野化山羊种群日活动节律的影响

对生活于苏格兰西北部拉姆岛上的野化山羊(Caprahircus)种群在1981、1982和2000年三年中的日活动节律进行了分析研究。详细分析了两个主要气象因素(温度和降水)以及昼长季节变化对该种群动物的日活动节律的影响。研究结果表明,拉姆岛上野化山羊的日取食活动时间百分比随月平均温度上升而显著下降,但卧息活动时间百分比随月平均温度的上升而显著上升,而降水则对二者无显著影响。拉姆岛所在地区的昼长季节性变化明显,每年6、7月白昼时间最长,而12、1月最短。由于受昼长季节变化影响,尽管该山羊种群的日取食活动时间百分比随季节变化而由夏季到冬季增加,但其真正用于取食活动的白昼时间由夏季到冬季反而减少。研究表明,白昼时间长短的季节变化是制约该山羊种群取食活动的一个重要因素,尤其是在食物匮乏而天气寒冷、阴湿的冬季。进而探讨了这种制约作用对其冬季取食量和冬季存活率的影响,以及对种群数量的调节意义。     

"两步法"体外培养山羊卵母细胞的超微结构观察

有假说认为,卵母细胞在体外培养过程中,如果延长GV期,可促进卵母细胞进一步成熟,因而提高发育潜能。采用山羊半卵泡和卵母细胞共培养,抑制卵母细胞GVBD发生,从而延长GV期。比较了共培养前后和恢复成熟培养后卵母细胞的超微结构变化,其目的从亚细胞水平寻找卵母细胞进一步成熟的证据。研究发现,常规成熟培养:有卵周隙存在,但不贯通,局部区域卵膜与透明带结合紧密;部分皮质区尚有细胞器存在;微绒毛大部分从透明带中撤出,倒伏于质膜表面,数量较多,形态较为粗大;皮层颗粒质膜下部分单层分布,部分散布于皮质区;线粒体均匀散布于卵质中央区。共培养前:卵母细胞的卵周隙尚未形成,微绒毛没有从透明带中撤出;线粒体等细胞器分布于皮质区,皮层颗粒成簇状分布,皮质区富含细胞器。共培养后:局部形成卵周隙,微绒毛已自透明带中撤出,数量较多,垂直或倒伏于卵膜表面;线粒体以簇状分批开始内移,皮层颗粒已部分单层分布于质膜下,部分皮质区缺乏细胞器。恢复成熟培养后:卵周隙进一步扩大并且贯通,微绒毛数量减少并且绝大多数垂直于卵膜;线粒体在卵质中央区均匀分布,皮层颗粒卵膜下单层分布,大部分皮质区无细胞器存在。利用“两步法”培养得到的卵母细胞与体外常规成熟培养的卵母细胞相比,更有利于皮层颗粒的质膜下单层分布,卵母细胞卵周隙的形成与贯通,微绒毛数量减少和垂直于卵膜表面,无细胞器皮层区的进一步形成。因此,更有利于卵母细胞胞质的进一步成熟。     

利用种子序列检测山羊皮肤中microRNA靶基因分子方法的建立

文章旨在建立一种种子序列介导的可控遗传操作—microRNA靶基因指纹图谱(MicroRNA targets fingerprint,MTFP),用于在基因表达检测中筛选与特定microRNA相关的靶基因。在设定上游种子序列的互补序列和下游锚定序列的基础上添加特殊接头,通过反转录和特殊二步PCR将microRNA的靶基因扩增;扩增后的microRNA靶基因在聚丙烯酰胺凝胶电泳中检测其片段大小和表达丰度,用于筛选在不同生理状态或试验条件下特异表达的基因;特定的靶基因序列通过DNA回收和测序方法得到。以miR-203为例,在不同生理状态的山羊皮肤样品中获得了5条大小分别为718 bp(JN709494)、349 bp(JN709495)、243 bp(JN709496)、156 bp(JN709497)和97 bp(JN709498)的靶基因序列。MTFP经济适用、可操作性强,可用于探索microRNA调节的靶基因,或用来评估靶基因的表达谱特征。     

山羊豆种质资源形态多样性分析

采用15个形态性状对43份山羊豆种质资源进行遗传多样性分析,结果表明,山羊豆种质资源遗传变异丰富,多样性指数为1．863,其中俄罗斯南部地区可能是山羊豆形态多样性的分布中心。基于形态性状的聚类分析把43份材料聚为5类,其中第1类15份资源的株高和主茎分枝数明显高于其他类,且叶量丰富,营养性状表现良好;结实性状中荚果长和百粒重较大,综合性状表现较好,可以从中筛选合适的材料作为引种驯化和育种的试验材料。     

山羊发情后期三种不同超排方法的比较

目的　研究在山羊发情后期三种不同超排方法的超排效果。方法　实验以 2 0只本地山羊为实验材料 ,以氯前列烯醇二次注射法进行同期发情 ,研究了于发情后期 (发情结束后第 2天 )进行 3种不同的超排方法 (对照组 :3 0 0IUFSH 6次减量法 ,F -pvp组 :3 0 0IUFSH溶于 3 0 %PVP一次注射 ,F -pmsg组 :先注射 2 0 0IUFSH ,2 4h后结合 3 3 0IUPMSG一次注射法 )的超排效果。结果　二次注射氯前列烯醇在 60h内同期率为 80 % (16 2 0 ) ,3种超排方法平均获黄体数分别为 9 75± 4 65,11 75± 8 3 4 ,11± 9 13 ;平均获可用胚数分别为 7± 2 94,8± 5 48,7 5± 5 80 ;胚胎回收率分别为 62 16% ,68 0 8% ,61 3 6%。t检验证明实验组 (F pvp组和F pmsg组 )平均获黄体和平均可用胚与对照组差异有显著性 (P <0 0 5) ,而胚胎回收率 (卡方检验 )差异无显著性 (P >0 0 5)。结论　山羊发情周期的发情后期进行超排能取得很好的卵巢反应 ,而且FSH一次注射法 (溶于 3 0 %PVP或 2 4h后结合少量PMSG)与多次减量法的超排效果一致 ,这表明 ,在山羊发情后期使用FSH一次注射的超排方法有可能作为一种简化的体内生产胚胎的方法加以进一步开发和应用     

贵州地方山羊品种的RAPD分析

用180条引物对黔东南小香羊、贵州白山羊、贵州黑山羊和黔北麻羊4个贵州地方山羊品种(种群),以及南江黄羊和波尔山羊进行RAPD分析,其中27条引物扩增出多态性图谱。这27条引物共扩增出281条带,多态带为115条,平均多态频率为40．92％(范围20％～80％);每条引物平均扩增条带为10．41条(范围4～16条);扩增带分子量在210～2800bp。贵州白山羊与贵州黑山羊之间的遗传距离指数(0．0605)最小,而波尔山羊与其他品种之间的遗传距离指数(0．1059～0．1488)最大。NJ法聚类结果显示,贵州白山羊与贵州黑山羊间的亲缘关系最近,其次为黔北麻羊,而黔东南小香羊与其他3个贵州地方品种的亲缘关系较南江黄羊还远。分析表明,黔东南小香羊在遗传上为一独立的品种;而贵州地方山羊品种间具有较近的亲缘关系,遗传变异较小,具有较高的遗传稳定性。     

半胱胺盐酸盐减缓山羊手术后细胞免疫抑制效应的实验研究

Sixteen castrated male goats were randomly allocated into two groups (Control n=8; Experiment n=8) to investigate the effects of cysteamine on surgery-induced cellular immune suppression. The experiment commenced with 13 d of pre-operation (pre-Op), which contained 3 d of roughage-fed period (RP) and 10 d of roughage + concentrate-fed period (RCP), followed by first operation (Op-1) and then the second operation (Op-2). The goats were allowed to have 14 d of recovery between two operations. The fistulas were fixed to rumen walls in Op-1 and to duodenal walls in Op-2. Cysteamine (15 mg x kg(-1) x BW x d(-1)) was added to diet and fed to goats in Exp. group since RCP of pre-Op through whole experimental period. Blood was sampled through jugular vein from goats of both groups at pre-feeding of the last day of RP and RCP, 8 d after Op-1, 4 d and 13 d after Op-2, respectively to determine serum concentration of interlukin-2 (IL-2), cortisol, as well as PHA-stimulated lymphocytic proliferation rate (SI). In pre-operative periods there were no significant differences in concentration of IL-2 (0.82+/-0.1 vs 1.03+/-0.22 microg l(-1)) and cortisol (20.48+/-4.52 vs 20.80+/-9.93 microg l(-1)), as well as lymphocytic SI (90.72+/-7.25 vs 129.22+/-18.59) between Control and Exp. groups. The concentrations of IL-2 (0.82+/-0.1 vs 0.73+/-0.08 vs 0.55+/-0.12 microg l(-1)) and lymphocytic SI (90.72+/-7.25 vs 49.31+/-6.4 vs 7.09+/-1.66) in Control were depressed acutely (P<0.05), but cortisol concentration elevated (20.48+/-4.52 vs 26.67+/-10.51 vs 32.33+/-3.29 microg l(-1)) in post-operative periods (8 d after Op-1 and 4 d after Op-2), compared with those in RCP. While they remained unaltered in Exp. group except a slight decrease of lymphocytic SI at 4 d after Op-2. The different responses of Control and Exp. groups to surgery stress led to a 80-90% higher of IL-2 and about 3 times greater of SI in Exp. than those in Control, which was contributed by cysteamine administration. Our data show that in operated goats the cellular immune was suppressed by surgery stress, cysteamine administration prevented decreases of IL-2 and lymphocytic SI and increase of cortisol induced by surgery stress, consequently attenuates surgery-induced suppression of cellular immune activity.     

山羊精子超弱化学发光的研究

最近几年来 ,由于光子计数的发展 ,在弱光通量测定方面有了新的突破 ,动植物有机体在正常的生理状态下 (暗反应 ) ,它们的细胞、细胞器以及动物的肝脏、血液均有光子释放 ,同时由于光通量极弱 ,所以通常称为“超弱化学发光” ,它可以反映有机体基质代谢的综合活动 ,提供活体细胞物理化学反应或更复杂反应的信息 ,是生物体的化学发光 ,即有机物氧化过程中产生的激态分子 ,变到较低状态时 ,以光子形式释放能量。本文研究表明 ,奶山羊的精子存在有超弱化学发光现象 ,精子的超弱化学发光与活力呈强正相关 ,相关系数为 0 .932 5(Ｐ <0 .0 5) ,与…