新型缓释尿素对拟南芥生长和遗传毒性的影响研究

新型缓释尿素的成功研制对提高肥料利用率、降低环境污染有重要意义.用模式植物拟南芥作为研究对象,普通尿素作为对照,通过拟南芥主根长、鲜重、须根数研究新型缓释尿素对拟南芥生长的影响.用控释剂对拟南芥施用,通过拟南芥同源重组频率研究控释剂对拟南芥遗传毒性的影响.结果表明,缓释尿素及普通尿素随着浓度增加对拟南芥的生长都有先促进后抑制的趋势,低浓度施用条件下缓释尿素对拟南芥的生长促进作用更加明显,高浓度施用条件下普通尿素对拟南芥的抑制作用更加明显.尿素浓度达到1000 μg/mL时,拟南芥可以正常萌发,但是不能存活.控释剂施用对拟南芥遗传毒性分析表明,控释剂不影响拟南芥同源重组频率,表明在本实验浓度范围内控释剂暴露对拟南芥未产生遗传毒性影响.研究结果为该新型缓释尿素在生产上应用推广打下基础.     

包膜控释尿素与普通尿素配施对冬小麦生长发育及土壤硝态氮的影响

应用大田试验研究了不同用量的包膜控释尿素(PCU60,释放期为60 d)与普通尿素(U)配合基施(10%PCU60+90%U,PU1;20%PCU60+80%U,PU2;30%PCU60+70%U,PU3;40%PCU60+60%U,PU4)对冬小麦产量、氮肥利用率等生物学性状及土壤硝态氮累积的影响,并对PCU60氮素田间溶出特征及25℃静水溶出特征进行了比较分析.结果表明:在施氮量相等的条件下,与习惯施肥处理相比,PU4处理冬小麦各项指标均显著提高:增产5.6%、氮肥利用率提高14.6%、氮素总累积量提高7.2%、成熟期总茎数提高2.6%、成熟期地上部总生物量提高7.5%、经济效益增加984.3元·hm-2.各处理0～100 cm土层硝态氮总累积量在39.70～49.93 kg·hm-2,其中,PU4处理总累积量最低,为39.70 kg·hm-2.埋袋试验表明,释放期为60 d的包膜控释尿素氮素释放规律与小麦氮素吸收特性基本吻合.     

硫加树脂包膜尿素控释肥对小麦干物质积累分配及产量的影响

在田间高产条件下,设置硫加树脂包膜尿素控释肥(SRCU)、树脂包膜尿素控释肥(RCU)、普通尿素加硫磺粉(SU)、普通尿素(U)处理,研究硫和SRCU对冬小麦干物质积累与分配及产量的影响.结果表明:施用RCU处理的植株干物质积累量和籽粒产量与分期施氮不施硫处理相比无显著差异.在土壤有效硫含量为43.2 mg·kg-1的条件下,施硫量为91.4 kg·hm-2的SRCU处理与相同施硫量分期施氮处理相比,花后干物质积累与分配及产量无显著差异;与无硫的RCU处理相比,花后同化物输入籽粒量、籽粒灌浆中期的灌浆速率、千粒重和产量均显著提高.在土壤有效硫含量为105.1 mg·kg-1的条件下,施硫量为120kg·hm-2的SRCU处理籽粒产量显著高于相同施硫量分期施氮处理,与不施硫分期施氮处理和RCU处理无显著差异.说明SRCU释放的氮素对冬小麦干物质积累、分配和产量的调节作用与速效氮素分期施用的效果一致.SRCU释放的硫素对冬小麦的调节作用受土壤有效硫含量高低的影响,在有效硫含量为43.2 mg·kg-1的条件下,能促进花后干物质积累和籽粒灌浆,显著提高籽粒产量;在有效硫含量为105.1 mg·kg-1的条件下,则无显著增产作用,过多施用硫磺粉还可导致产量显著降低.     

尿素通道蛋白B基因敲除对小鼠心电图与心肌动作电位的影响

尿素通道蛋白B(UT-B)为介导尿素跨膜转运的通道蛋白, 在肾脏和其他肾外组织, 如红细胞、脑、心脏、膀胱和睾丸等组织、细胞中广泛表达. 为探讨UT-B缺失对心脏表型的影响,应用RT-PCR, Western blot检测UT-B mRNA, UT-B蛋白在野生型小鼠(UT-B^+/+)和UT-B基因敲除纯合子小鼠(UT-B^-/-)心脏组织的表达情况, 对比观察6, 16, 52周UT-B基因敲除纯合子(UT-B^-/-)与野生型小鼠肢体Ⅱ标准导联心电图, 应用悬浮微电极法记录分离的16周小鼠心室肌细胞动作电位各参数变化. 结果显示UT-B的mRNA和蛋白在UT-B^+/+小鼠心脏有表达, 而UT-B^-/-小鼠无表达; UT-B^-/-小鼠P-R间期((43.5 ± 4.2), (45.5 ± 6.9), (43.8 ± 7.6)ms)明显长于UT-B^+/+小鼠((38.6 ± 2.9), (38.7 ± 5.6), (38.2 ± 7.3)ms, P<0.05), 随增龄P-R间期无明显延长, 但老龄组(52周)Ⅱ度和Ⅲ度房室传导阻滞发现率超过20%; 动作电位记录结果显示UT-B^-/-小鼠的动作电位幅值(APA), 动作电位最大除极速度(V_max)与UT-B^+/+小鼠比较, 前者明显受到抑制(P < 0.05), 其APD50, APD90明显延长(P < 0.05). 总之, 本研究发现野生型小鼠心肌有UT-B表达, UT-B基因敲除导致小鼠进展型心脏传导阻滞, 提示UT-B在介导心肌电生理特性方面有重要作用.     

红松子油中皮诺敛酸的纯化及降脂活性评价

以红松子油为原料,采用尿素包合法纯化皮诺敛酸,通过脂肪酸与尿素的比例、尿素与乙醇的比例、包合温度及包合时间等因素对皮诺敛酸含量及产率的影响,优化了尿素包合法的工艺参数,最终确定了皮诺敛酸的最佳纯化条件为：脂肪酸与尿素的比例为1：6.5（w/w）,尿素与90%乙醇的比例为1：4（w/v）,包合温度为-10℃,包合时间12 h。在上述条件下,经GC-MS检测获得了纯度为58.3%的皮诺敛酸,回收率为51.8%,经二次尿素包合纯化后可获得纯度为72.5%的皮诺敛酸,回收率为64.7%。为了评估皮诺敛酸的降脂活性,以油酸诱导HepG2细胞成脂,最终确定40 μmol·L^-1的皮诺敛酸能显著的降低HepG2细胞内甘油三酯及总胆固醇的水平。     

幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的克隆和序列分析

幽门螺杆菌是消化道疾病的主要致病菌。其有效抗原成份尿素酶B亚单位(UreB)可刺激机体产生保护性的免疫反应。用高保真PCR扩增系统扩增出UreB基因片段,将其克隆至质粒pUC19中,对其全序列进行了测定。克隆的UreB基因序列与报道的序列完全一致。这一研究获得了序列正确的UreB基因,为将来以UreB分子为抗原的疫苗研制工作打下了良好的基础。     

一中国家族中导致JKnull显型的JK位点的一个新突变

尿素通道蛋白家族(urea transporter, UT)是一组高选择性快速通透尿素的膜通道蛋白分子, 尿素通道蛋白B (UT-B) 表达于红细胞膜, 又称JK抗原. 为探索中国人群中JK_null显型的分子基础, 对搜集到的血液标本应用2 mol/L尿素溶血试验筛查JK_null显型的个体. Stopped-flow light scattering方法检测红细胞膜对尿素的渗透速度, 提取白细胞的基因组DNA, 采用PCR直接测序法对人UT-B基因的所有外显子和外显子-内含子交接处进行分析. 从2万名被筛查出的中国个体中发现一例JK_null显型个体, 研究显示其红细胞膜尿素通道蛋白缺失. 对该JK_null个体进行基因序列分析, 显示在UT-B基因内含子5的3′接合位点存在两个点突变: G→C(一个新突变)和G→A. 这两个突变都会导致外显子6在UT-B基因转录过程被剪切掉. HgCl₂孵育后, JK_null个体红细胞的水渗透性(Pf ,~0.00037 cm/s)明显低于正常对照(Pf,~0.00062 cm/s), 证明UT-B在人的红细胞中具有易化转运水的功能.     

H.pylori尿素酶B亚单位在保加利亚乳杆菌的表达与鉴定

目的构建表达幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H、pylori）尿素酶B亚单位（UreB）的基因工程乳杆菌,并对其进行初步的安全性评估。方法采用高保真PCR从H.pylori标准菌株NCTC 11637中扩增ureB基因,插入乳酸菌表达质粒pMG36e,将重组质粒电转入保加利亚乳杆菌L6032中,获得表达ureB的基因工程乳杆菌。在含乳糖的MRS培养基诱导目的蛋白表达,Western blot鉴定其免疫原性。连续传代培养60代,检测基因工程乳杆菌的稳定性、形态学与生理生化特性以进行初步的安全性评估。结果特异PCR、酶切和测序鉴定均证实ureB基因克隆入表达载体pMG36e,SDS-PAGE结果显示,重组质粒pMG36e-ureB电转入保加利亚乳杆菌所构建的基因工程乳杆菌能表达约64KD的蛋白,Western blot证明该蛋白能与抗H.priori ureB的兔血清反应。稳定性、形态学与生理生化特性检测结果表明,基因工程乳杆菌与原始菌株保加利亚乳杆菌完全一致。结论成功构建能表达H.pylori UreB的保加利亚乳杆菌L6032-UreB,该基因工程菌在形态与生理生化特性上未发生任何变异,从而为探索幽门螺杆菌感染的益生菌制剂调理疗法奠定了坚实的基础。     

有机碳源和氮源对三角褐指藻生长的影响

研究了8种有机碳源和4种氮源对三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)生长的影响.结果表明,三角褐指藻具有兼养生长的能力,碳浓度为5mmol/L和50mmol/L时,葡萄糖、果糖、乙酸钠和甘油对其生长有明显的促进作用,乳酸钠和乙醇抑制藻细胞生长,半乳糖和柠檬酸钠对其生长随有机碳浓度而异.甘油、葡萄糖和乙酸钠的适宜浓度范围分别为5 -800mmol/L、100 -400mmol/L和50 -300mmol/L.培养液中分别加入50mmol/L甘油、400mmol/L葡萄糖和150mmol/L乙酸钠,培养第14天,三角褐指藻的最大生物量分别为对照的1.45倍、1.25倍和1.11倍.甘油兼养生长的最优氮源是尿素,适宜浓度范围为0.88-8.8mmol/L.当尿素浓度为4.4mmol/L时,最高生物量可达1.31g/L.     

水肥耦合对橡胶树产胶量的影响

水分和养分是限制橡胶树生长和产胶量的重要因子.以17年生的7-33-97橡胶树为试验材料,采用施氮量、灌水量、施磷量和施钾量四因素五水平(1/2实施)的二次回归通用旋转设计,通过田间小区试验,研究了不同水肥耦合水平对橡胶树产量和干胶含量的影响,并建立了橡胶树干胶产量的水肥回归数学模型.结果表明：不同水肥耦合水平对橡胶树橡胶产量和干胶含量都有显著影响;各因素对橡胶产量的效应顺序为：施氮量＞灌水量＞施磷量＞施钾量;各因素间耦合效应顺序为：氮、水＞氮、磷＞磷、水＞钾、水,且施钾量和土壤水分呈负交互效应;水肥调控的最佳组合为：尿素用量为476.39 kg·hm^-2,过磷酸钙用量为187.70 kg·hm^-2,氯化钾用量为225.77 kg·hm^-2,土壤相对含水量控制在82.78％左右.