Short Communication—The detection of nuclear matrix in most primitive presentexisting eukaryote,Giardia lamblia

The nuclear matrix of diplomonad Giardia lamblia was detected for the first time with DGD embedmentsectioning-embedment free electron microscopy after a series of specific extractions.The result showed that archaezoa Giardia Lamblia already possessed nuclear matrix within its two nuclei.The finest fibrils of the nuclear matrix of Giardia lamblia were measured to be about 11 to 13 nm in thickness.However,the nuclear lamina and nucleolus have never been observed.These results seem to suggest that nuclear matrix is an indispensable intranuclear structural component even in the primitive nucleus.     

Chromosomal localization of ribosomal DNA sequences in an apple rootstock using a digoxygenin detection system

A 6kb rDNA probe comprising the 18S coding plus spacer sequences has been hybridized to the metaphase chromosomes of apple rootstock cultivar MM106 demonstrating the localization of ribosomal gene arrays in the vicinity of the telomeric regions of the short arms of chromosomes 6 and 14.The in situ results using digoxygenin labelling coupled to an alkaline phosphatase immunoassay were confirmed by silver staining for NORs and nucleoli.This study demonstrates the feasibility of molecular cytogenetic analysis of very small chromosomes(1.0-2.7μm） of apple.     

HCV RNA的检测方法简介

本文讨论了检测丙型肝炎病毒核糖核酸（ＨＣＶＲＮＡ）的样本来源和处理,引物的设计,合成和选择等问题;重点介绍了蛋白酶Ｋ消化法,聚乙二醇沉淀法,异硫氰酸胍一步法,硅凝胶提取法和直接捕获法提取ＨＣＶ　ＲＮＡ的５种方法,以及一步ＰＣＲ法,常规ＲＴ－巢式ＰＣＲ,直接ＲＴ－巢式ＰＣＲ,化学修饰的ＲＴ－巢式ＰＣＲ,联合ＰＣＲ,双温ＰＣＲ和定量竞争性ＰＣＲ等７种ＰＣＲ方法检测ＨＣＶ　ＲＮＡ,用ＰＣＲ检测ＨＣＶ　ＲＮＡ方法的标准化以及检测ＨＣＶＲＮＡ具有非常重要的意义。本文还介绍了一种新型的定量方法－ｂＤＮＡ信号放大技术检测ＨｃＶＲＮＡ。     

细小病毒B19感染检测方法的研究进展

本文综述了细小病毒Ｂ１９感染检测方法的研究进展。病毒分离目前仍处于实验研究阶段;电镜及免疫组化法检测阳性率不高,限制了其使用;血清学方法多用重组抗原进行,血清中病毒特异性ＩｇＭ阳性可做为近期感染的指标,但由于与风疹病毒的交叉反应,该方法与病毒ＤＮＡ检测结合使用结果更为可靠;核酸杂交法敏感性高,可用于常规诊断和流行病学调查,但易出现假阳性,特别是同位素探针,敌目前多倾向于用非放射性标记探针;ＰＣＲ法     

高效液相色谱法检测大鼠子宫内膜游离氨基酸

本文采用邻苯二甲醛(OPA)和β-巯基乙醇柱前衍生,荧光检测分析大鼠子宫内膜游离氨基酸。50分钟分析18种氨基酸,以TEGD缓冲液[10mmol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris-HCI),1.5mmol/L 乙二胺四乙酸(EDTA)3mmol/L叠氮钠(NaN_2)、30％甘油Immol/L二硫苏糖醇(DTT)pH为7.4提取氨基酸,平均回收率94.0±5％。各氨基酸保留时间变异系数平均为1.25±0.1％(均值±标准差),峰面积变异系数平均为3.1±0.9％,各氨基酸浓度在10pmol—1.5nmol范围内,线性相关系数为0.979±0.08(均值±标准差)。同时还讨论了影响氨基酸检测的某些色谱条件。     

PCR检测HPV－18DNA

采用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术,对ＨＰＶ－１８序列中引物ＨＰ＿１、ＨＰ＿２之间的片段（Ｆ）进行扩增,通过两组阴、阳性对照实验证明扩增片段的特异性。用不同Ｍｇ浓度的缓冲系统进行ＰＣＲ反应发现,缓冲系统中Ｍｇ浓度高低是影响ＨＰＶ－１８／ＨＰ＿１、ＨＰ＿２特异扩增的重要因素,高浓度Ｍｇ导致扩增特异性降低。对１７例宫颈癌组织ＤＮＡ进行ＰＣＲ检测,有９例检出Ｆ片段,其检出率是５３％,为ＨＰＶ－１８与宫颈癌的相关性提供证据。     

构建全细胞生物传感器测定农田土壤中有机磷农药甲基对硫磷含量

土壤中污染物的生物有效性评估对于准确评价环境污染风险至关重要,而全细胞生物传感器是此类评估的重要工具之一。本研究旨在使用新型全细胞生物传感器建立土壤中甲基对硫磷(methyl parathion,MP)的检测方法。首先,使用筛选出的甲基对硫磷水解酶基因(methyl parathion degrading gene,mpd)和pUC19质粒骨架以及已有的特异性诱导元件pobR为材料,构建全细胞生物传感器。然后,以96孔的酶标板为载体和以5种全细胞生物传感器为指示细胞,建立了土壤提取液样品中甲基对硫磷的分析方法,并应用于实际测试和田间土壤样品中甲基对硫磷的检测。以检测性能的最佳大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α/pMP-AmilCP为例,其检测限为6.21−6.66μg/L,线性范围为10−10000μg/L。E.coli DH5α/pMP-RFP和E.coli DH5α/pMP-AmilCP的方法用于分析土壤提取液样品中甲基对硫磷的浓度,具有较好的检测性能。这种全细胞生物传感器方法有助于快速评估土壤中甲基对硫磷的生物有效性强弱,从而有效判断有机磷农药甲基对硫磷对土壤的污染风险。     

聚对苯二甲酸乙二醇酯水解酶检测方法的研究进展

聚对苯二甲酸乙二醇酯(polyethylene terephthalate,PET)是应用最广泛的合成聚酯之一。由于PET不易降解,在环境中积累,对陆地、水生生态系统以及人类健康构成严重威胁。基于生物酶催化的生物降解策略为PET回收利用提供了一种绿色途径,在过去20年间,已发现了多种PET水解酶,并通过蛋白质工程等手段来改善这些酶的降解性能,但是目前仍未找到适合大规模工业应用的PET水解酶。利用传统的检测方法筛选PET水解酶是一个缓慢而复杂的过程。为了促进PET酶法回收的工业化应用,需要研发高效的检测方法。近年来,研究人员开发了多种表征PET水解酶的分析方法。本文总结了可用于筛选PET水解酶的检测方法,如高效液相色谱法、紫外吸光度法和荧光激活液滴分选法等,并对其在筛选PET水解酶的应用方面进行了展望。     

信号分子在生物脱氮中的作用及检测方法

生物脱氮是由微生物主导的地球氮循环中的重要环节之一,主要包括硝化、反硝化和厌氧氨氧化(anaerobic ammonium oxidation,anammox)等过程。在微生物联合作用下,污水中的有机氮及氨氮经一系列作用转化为氮气,这种经济高效、环境友好的处理工艺在世界范围内得到广泛应用。群体感应(quorum sensing,QS)以信号分子为媒介通过改变菌群密度和周围环境变化来调节微生物的各种行为。大量的研究已证实调控QS信号分子在生物脱氮中具有应用潜力。本文介绍了各种信号分子类型,从基因组学、实际应用等方面综述了各类信号分子以及检测方法,同时针对酰基高丝氨酸内酯(acyl homoserine lactones,AHLs)类信号分子在生物脱氮中的作用进行详细介绍。然而不足之处在于信号分子研究只是停留在实验室阶段,仅仅研究了单一信号分子对生物脱氮的影响。未来可将信号分子应用于实际污水,研究多种信号分子共同作用以及多种微生物之间的QS现象。