双特异性抗体在肿瘤治疗中的研究

双特异性抗体(bispecific antibody,BsAb)有两个抗原结合位点,其中一个位点可与靶细胞表面抗原结合,另一个位点则可与载荷物(如效应细胞,分子等)结合。将BsAb应用于肿瘤治疗,发挥抗肿瘤效应的思想已有二十多年历史,随着对效应细胞生物学了解的加深和抗体工程的飞速发展,各种形式的BsAb相继出现,多种BsAb药物已进入临床初期试验或治疗使用阶段。本文就BsAb的各种新形式及其在肿瘤治疗中的应用新进展作简要概述。     

嵌合内含子对抗bFGF抗体基因在293T细胞中表达的影响

目的：构建含嵌合内含子和抗bFGF抗体基因的真核表达载体并在293T细胞中表达,探讨嵌合内含子对抗体表达的影响。方法：设计引物分别从载体pCl-neo和pComb3-Fab25中扩增出内含子和抗体Fd段、κ链基因序列,按不同组合构建到含人免疫球蛋白IgG1恒定区Fc段基因的表达载体pIgG中。重组质粒经脂质体PEI转染293T细胞,荧光显微镜观察质粒转染情况,采用夹心ELISA和Western blot检测细胞上清中抗体的表达。结果：DNA测序和酶切分析表明,内含子和抗体基因成功插入pIgG,获得了重组质粒pIgG-Fd-κ、pIgG-Fd-intron-κ、pIgG-Fd-κ-intron和pIgG-Fd-intron-κ-intron。倒置荧光显微镜下可观察EGFP大量表达,Western blot分析上清中有抗体的表达,夹心ELISA检测pIgG-Fd-κ、pIgG-Fd-intron-κ、pIgG-Fd-κ-intron和pIgG-Fd-intron-κ-intron抗体表达量分别为1.21mg/L、0.468mg/L、7.39mg/L、0.601mg/L。结论：成功构建了含嵌合内含子和抗体基因的真核表达载体并在293T细胞中得到表达。嵌合内含子插入κ链基因5’端可提高抗体的表达,插入Fd段5’端则抑制抗体的表达。     

人DFF45蛋白多克隆抗体制备及其初步应用

目的：表达、纯化带GST标签的DNA裂解因子45（DNA fragmentation factor 45 ,DFF45）融合蛋白并制备多克隆抗体。方法：构建pGEX-5X-1/DFF45原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21,用IPTG诱导融合蛋白表达,经纯化后免疫日本大耳白兔得到多克隆抗体并用CNBr-activated Sepharose? 4B进行纯化。用间接ELISA法检测抗体效价,Western blot鉴定抗体特异性,同时用免疫荧光染色鉴定抗体特异性并观察DFF45的细胞定位。进一步检测DFF45在人类几种细胞系的表达差异情况。结果：成功构建原核表达质粒,表达、纯化DFF45蛋白并免疫动物后得到多克隆抗体。间接ELISA法显示抗体效价达1:20 000,Western blot确定抗体具有高度特异性。应用该抗体检测发现DFF45在人类几种细胞系中表达存在差异并观察到其细胞定位。结论：DFF45多克隆抗体的成功制备及其在人类细胞系的差异表达,为进一步研究DFF45基因与肿瘤及其相关疾病的关系奠定了基础。     

人源天然ScFv噬菌体抗体库的构建及鉴定

噬菌体抗体库技术是获得治疗性抗体的一条重要途径。以20份健康人外周血为样本,通过提取淋巴细胞、逆转录－PCR（RT PCR）、抗体可变区基因的扩增、重叠PCR获得单链抗体（ScFv）基因,将ScFv克隆入噬粒载体,通过近300次的电转化获得了库容量为1.3×109的全人源天然ScFv噬菌体抗体库。通过随机挑克隆测序和用5种不同抗原筛选对抗体库进行了初步验证。随机测序表明抗体库具有较好的多样性,用5种不同抗原对其进行筛选,均获得了特异性噬菌体抗体的不同富集,表明成功构建了一个多样性良好的人源天然ScFv噬菌体抗体库。     

前沿

<正>科学新知基因的性别差异瑞典科学家以果蝇为模型,对基因在不同性别中的表达形式和优势表达模式进行了研究。无论哪种动物,只要不是雌雄同体,雌性和雄性看上去都有很大差别,在遗传学上,这种现象被认为有助于进化。例如,雌性果蝇往往擅长     

脂阿拉伯甘露糖联合38kD蛋白在结核病诊断中的应用

本研究旨在评价脂阿拉伯甘露糖(LAM)联合38kD蛋白的混合抗原在结核病血清学诊断中的应用价值。选取128例活动性结核病患者(活动性肺结核107例,肺外结核21例)、51例潜伏性结核感染者和68例健康对照者的血清,检测抗LAM和38kD混合抗原的IgG抗体(LAM-38kD-IgG)。结果显示,LAM-38kD-IgG检测的总敏感度为46.88%,特异度为98.53%,阳性预测值为98.36%,阴性预测值为49.63%。其中肺结核组敏感度为46.73%,肺外结核组敏感度为47.62%(P0.05);初治组为45.54%,复治组为51.85%(P0.05)。涂片阳性肺结核组敏感度为52.54%,高于涂片阴性组(39.58%),但差异无统计学意义(P0.05)。LAM-38kD-IgG检测在对照组中的特异度为98.53%。其特异度远高于结核菌素试验(TST)的41.46%(P0.01)。LAM-38kD-IgG水平与结核病病情有一定的相关性。结果提示,应用LAM和38kD混合抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)在诊断活动性结核病方面具有中等敏感度、极高特异度及阳性预测值,不仅可与结核病的其他诊断方法联用以提高诊断的准确性,而且特别适用于细菌学检查阴性结核病和肺外结核病的诊断。     

家族性高胆固醇血症低密度脂蛋白受体第13外显子突变分析

目的:探讨本课题组收集家族性高胆固醇血症(FH)患者中存在低密度脂蛋白受体(LDLR)第13外显子(E13)基因突变患者临床生化和心血管系统损害特点.方法:对9例临床诊断为FH、基因检测到LDLR基因E13突变的患者进行回顾性分析.结果:(1)临床诊断FH纯合子患者7名,其总胆固醇(TC)水平15.12～26.14 mmol/L,杂合子患者2名,TC水平11.30～11.75 mrnol/L.(2)均可见不同程度黄色瘤;(3)FH纯合子3例心电图出现ST-T改变;4例儿童和1例青年患者出现瓣膜损害,冠脉血流储备(CVFR)减低;杂合子心电图检查均正常,1例出现瓣膜损害,CVFR均正常.(4)核苷酸序列分析证实:9例E13突变患者中,A606T纯舍突变3名;D601Y纯合突变2名;A606T+、W462X和A606T+D601Y复合杂合突变各1名;A606T和D601Y杂合突变各1名.结论:FH严重损害患儿心血管系统和皮肤,LDLR基因E13出现的A606T和D601Y突变可能成为中国FH人群的高频突变位点.     

棒曲霉素检测方法研究进展

棒曲霉素(Patulin)是由部分曲霉、青霉等霉菌产生的次级代谢产物,主要污染水果及其制品.本文时目前常见检测方法薄层色谱法(TLC)、微乳电动色谱法(MEECK)、液相色谱法(LC)、液相色谱-质谱法(LC-MS)、气相色谱-质谱法(GC-MS)、和免疫法等进行了分析.棒曲霉素属小分子弱抗原物质,很难免疫动物,描述了用噬菌体抗体库筛选棒曲霉素抗体来开发ELISA快速检测试剂盒用于现场检测的优越性,并就噬菌体抗体库技术用于小分子弱抗原物质抗体筛选前景进行了展望.     

湛江地区小儿肺炎支原体感染调查分析

目的:探讨湛江地区小儿肺炎支原体(MP)感染情况.方法:采用日本富士瑞必欧株式会社肺炎支原体抗体检测试剂(SERODI-A-MYCOII),对2005年1月至2008年12月在本院就诊的肺炎患儿进行血清MP抗体检测,对不同年度、不同季节、不同年龄及性别MP肺炎的发病情况进行统计.结果:受检人数2825例,MP抗体阳性率为40.2%.阳性率的多少与不同的年龄段、不同性别有明显区别.0～1岁婴儿期MP感染率为9.5%;1～3岁组幼儿MP感染率为40.4%;4～6岁学龄前期MP感染发病率为45.4%;7～14学龄期MP感染率为48.3%.0～1岁组MP阳性率明显低于其他年龄组,差异有统计学意义(x2=110.5523,P＜0.01).男、女性肺炎患儿阳性率分别为36%、49.4%,两者比较差异有统计学意义(x2=44.9891,P＜0.01).一年四季均可发病.结论:MP肺炎的发病与年龄、性别、季节和年度有密切关系.     

Now and future of mouse mutagenesis for human disease models

One of the major objectives of the Human Genome Project is to understand the biological function of the gene and genome as well as to develop clinical applications for human diseases. For this purpose, the experimental validations and preclinical trails by using animal models are indispensable. The mouse (Mus musculus) is one of the best animal models because genetics is well established in the mouse and embryonic manipulation technologies are also well developed. Large-scale mouse mutagenesis projects have been conducted to de-velop various mouse models since 1997. Originally, the phenotype-driven mutagenesis with N-ethyl-N-nitrosourea (ENU) has been the major efforts internationally then knockout/conditional mouse projects and gene-driven mutagenesis have been following. At the beginning, simple monogenic traits in the experimental condition have been elucidated. Then, more complex traits with variety of environmental interactions and gene-to-gene interactions (epistasis) have been challenged with mutant mice. In addition, chromosomal substitution swains and collaborative cross strains are also available to elucidate the complex Waits in the mouse. Altogether, mouse models with mutagenesis and various laboratory strains will accelerate the studies of functional genomics in the mouse as well as in human.