短暂前脑缺血小鼠海马脑红蛋白表达的动态变化

研究了小鼠短暂前脑缺血再灌注后不同时相点脑红蛋白表达的动态变化及其意义。用夹闭双侧颈总动脉的方法建立C57BL/6小鼠缺血再灌注动物模型;采用RT-PCR及Western blotting方法检测各组小鼠海马组织中脑红蛋白在转录和翻译水平表达的动态变化。结果显示,脑红蛋白在mRNA水平表达的动态变化为:与假手术对照组(100±0.00)比较,再灌注后6h(132.59±28.26,P<0.05)开始升高;24h(157.36±13.85,P<0.001)达高峰;48h(146.55±23.17,P<0.01)开始下降;72h(118.42±34.23,P>0.05)基本恢复至正常水平。脑红蛋白在蛋白水平表达的动态变化为:与假手术对照组(100±0.00)比较,再灌注后6h(111.46±23.54,P>0.05)轻微升高,24h(141.25±32.12,P<0.01)达高峰,48h(138.02±19.68,P<0.05)开始下降,72h(119.29±35.18,P>0.05)基本恢复至正常水平。结果提示,脑缺血再灌注各时相点的脑红蛋白mRNA及蛋白表达水平均增加,可能是机体的应激反应,但持续时间较短(48h以内)。     

人羊膜间充质干细胞对四氯化碳诱导小鼠肝损伤定位修复的研究

目的：观察活体染料羧基荧光素乙酰乙酸（CFSE）标记的人羊膜间充质干细胞对四氯化碳诱导小鼠肝损伤模型的定位修复情况。方法：采用胰蛋白酶-胶原酶消化法从羊膜组织中分离间充质干细胞,通过流式细胞术和免疫荧光等方法进行鉴定。模型组按浓度为20μl/g剂量的四氯化碳和橄榄油混合液诱导小鼠肝损伤,治疗组经小鼠尾静脉注射羧基荧光素乙酰乙酸标记的人羊膜间充质干细胞约1×10⁶个/ml。分别取模型组和细胞移植的治疗组小鼠眼球血和肝组织进行相关检测。结果：分离得到纯度较高的羊膜间充质干细胞;冰冻切片免疫荧光显示移植1周后细胞向小鼠受损肝组织定植,CFSE标记的人羊膜间充质干细胞呈绿色荧光;细胞移植后4周,与模型组比较,细胞移植组小鼠血清中天冬氨酸转移酶、丙氨酸氨基转移酶显著降低,而白蛋白明显升高（P< 0.01）;肝组织病理切片模型组小鼠细胞水肿,坏死灶多见,脂肪变性,可见不同程度的炎性细胞浸润;治疗组小鼠肝组织病理学改变和损伤程度有较明显改善;小鼠肝组织冰冻切片的免疫荧光显示移植4周后人羊膜间充质干细胞周围分泌血清白蛋白。结论：羧基荧光素乙酰乙酸标记的人羊膜间充质干细胞可有效改善肝组织的生理功能,为细胞定位移植治疗肝脏疾病的修复情况提供实验数据。     

定向激活HIF-1协同脂肪干细胞对糖尿病小鼠皮肤创伤修复的促进作用

目的探讨定向激活HIF-1协同脂肪干细胞（ASCs）对糖尿病小鼠损伤修复的影响及机制。 方法8周龄雄性SPF级C57BJ/L小鼠68只,行腹腔注射1%链脲佐菌素（STZ,60?mg/?kg）的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液,3 d后空腹血糖大于16.7 mmol/L的小鼠用于实验。在小鼠背部做直径为1 cm的圆形皮肤全层创口,将动物随机分为空载质粒（EV）组,CA5-HIF-1α转染（CA5）组,EV+saline组,CA5+saline组,EV+ASCs组,CA5+ASCs组。于给药后第0、3、7、10、14、17和21天,观察并记录创口面积大小,利用激光多普勒血流成像（LDPI）检测血流灌注情况,荧光定量PCR法检测HIF-1α及VEGF mRNA表达水平,HE染色检测血管密度,Western blot法检测VEGE蛋白表达水平。用Bonferroni或Tukey post hoc方差分析法进行统计学分析。 结果CA5-HIF-1α基因注射剂量为125 μg时,局部HIF-1α mRNA表达水平较高为10.40±0.22（F = 19.48,P = 0.025）,故选用125 μg用于后续实验。于给药后第3 ~ 14天,CA5组小鼠的伤口面积分别为7?828.92±294.28、7?285.97±118.24、4?050.41±301.97、1?292.35±101.14小于EV组9?062.00±225.75、8?534.42±189.35、5?634.59±198.06、2?308.15±245.36（F?=?41.37、32.16、27.29、25.16,P?=?0.028、0.034、0.038、0.042）。CA5组小鼠皮肤血流于第10、17天（253.06±8.34、250.59±10.13）均大于EV组（158.31±9.98、169.73±7.28）（F?=?21.53、26.08,P?=?0.038、0.032）。在治疗后3 ~ 14天,CA5+saline组（7?656.92±177.03、7?163.83±128.24、4?238.23±228.36、1?316.52±90.75）、EV+ASCs组(7?593.64±192.12、7?233.08±146.86、4?097.58±227.91)及CA5+ASCs组的伤口面积小于对照组（6?745.25±203.16、6?159.35±168.72、3?682.06±257.30）（F?=?39.58、44.09、34.67,P?=?0.031、0.028、0.037）,且CA5+ASCs组最小。本研究还发现CA5+saline组（262.05±9.34、248.45±11.13）、EV+ASCs组（215.33±10.75、185.82±10.47）及CA5+ASCs组（322.54±12.27、292.49±9.57）的小鼠皮肤血流于第10天和第17天均大于对照组（161.30±5.64、134.57±8.67）（F?=?29.15、17.38,P?=?0.026、0.034）,CA5+ASCs组血流增加幅度最大。此外,CA5+saline组、EV+ASCs组及CA5+ASCs组血管密度大于对照组,且CA5+ASCs组最高。CA5+saline组、EV+ASCs组及CA5+ASCs组VEGF mRNA及蛋白表达水平分别为2.03±0.14、2.16±0.13、3.41±0.18和1.75±0.12、1.82±0.06、2.96±0.14,高于对照组1.05±0.02和1.03±0.05（F?=?34.08、29.53,P?=?0.019、0.021）,且CA5+ASCs组最高。 结论定向激活HIF-1基因协调脂肪干细胞可促进糖尿病小鼠创伤修复,可能与其调控VEGF表达有关。     

应用乙二醇冷冻小鼠胚胎：优化和简化程序的探索

提高解冻胚胎的发育能力和简化冷冻解冻程序是胚胎冷冻研究的两大永恒的主题。尽管乙二醇（EG）广泛用于家畜胚胎冷冻,但很少用于冷冻小鼠和人胚胎。为数很少的以EG慢冻小鼠或人胚胎的研究均采用较为复杂的人胚冷冻程序,未见简化程序和用EG冷冻小鼠桑椹胚的报道。采用简单的牛胚胎冷冻程序研究了发育时期、EG浓度、平衡方法、添加蔗糖以及解冻后脱除EG等对小鼠胚胎冻后发育能力的影响。结果显示：（1）致密晚期桑椹胚冻后体外培养囊胚发育率（81.92%±2.24%）和孵出率（68.56％±2.43%）显著（P＜0.05)高于4-细胞、8-细胞胚胎和致密早期桑椹胚胎;（2）1.8mol/L EG冷冻小鼠致密晚期桑椹胚的囊胚发育和孵出率显著高于其它浓度;（3）在EG中平衡10min的冻后囊胚发育显著好于平衡5、20或30min;（4）两步平衡冷冻胚胎的囊胚发育率和孵出率显著高于一步平衡;（5）用EG冷冻小鼠胚胎无需添加蔗糖;（6）解冻后可不脱除EG;（7）冻后发育的早期囊胚和囊胚细胞数明显少于体内发育胚胎。因此,用EG冷冻小鼠胚胎的最佳方案为：致密晚期桑椹胚用1.8mol/L EG不添加蔗糖、两步平衡15min、以简单的牛胚胎冷冻程序冷冻解冻、解冻后不脱除EG直接培养或移植。     

不同年龄昆明白小鼠卵母细胞的生发泡互换

为探讨卵母细胞减数分裂异常及其与年龄相关变化之间的关系,对不同年龄段昆明白小鼠卵母细胞进行了生发泡(GV)移植研究。应用显微操作和电融合技术,将6~8周龄小鼠GV期卵母细胞分别与6月龄9、月龄和12月龄小鼠GV期卵母细胞进行GV互换,所形成的6种GV-胞质体复合体的融合率(89.7%~95.6%)和6种重组卵母细胞的成熟率(83.5%~88.2%)并不因小鼠年龄的改变而有所变化。成熟的6种重组卵母细胞经体外受精后,形成原核期胚和2-细胞期胚的比率(分别为80.0%~87.3%和42.7%~50.9%)并不因不同年龄小鼠卵母细胞GV互换所带来的细胞质或细胞核的改变而受到影响。     

ENU诱导获得一种短尾小鼠及其突变基因的初步定位

用一种化学诱变剂ENU(乙酰基亚硝基脲 )腹腔注射 3 0只 8～ 1 0周龄C5 7BL 6J(简称B6)雄鼠 (G0代 ) ,6周后与同品系正常母鼠配种繁殖后代 (G1代 )小鼠 3 5 1只。对其后代进行筛选获得一种可遗传的显性短尾突变小鼠。为了定位该突变基因 ,运用平均分布于B6和DBA 2 (简称D2 )小鼠常染色体而在这两者间又有差异的 3 9个微卫星对突变小鼠的 (D2×B6)F1代短尾突变小鼠回交D2得到的有短尾表型的[(B6×D2 )F1×D2 ]F2 代小鼠进行基因组扫描。反向运用经典的位置候选基因法 ,将短尾突变基因定位于 1 7号染色体 ,与D1 7Mit3 3的LOD值为 9 0 8。选用该染色体上与短尾表型相关基因Brachyury (T)最近的微卫星D1 7Mit1 43引物扩增 ,在 1 0 9只F2 代短尾小鼠中未发生一例交换 ,表明Brachyury基因是本例短尾突变强有力的候选基因。     

牛血清白蛋白对小鼠原核期胚胎玻璃化冷冻的影响

以小鼠原核期胚胎为对象,以胚胎的存活率、卵裂率、囊胚率以及囊胚细胞数作为检测指标,在M2液的基础上添加8种浓度(0,2,4,8,16,32,64,96mg/mL)牛血清白蛋白(BSA)配置防冻液,探讨防冻液和玻璃化冷冻后对胚胎发育的影响。BSA防冻液对胚胎发育影响的实验结果表明,8个浓度组间以及与对照组间胚胎的卵裂率、囊胚率以及囊胚细胞数无显著差异(P>0.05),说明在防冻液中加入一定浓度的BSA对小鼠胚胎无毒性作用。防冻液经玻璃化冷冻后对胚胎发育影响的实验表明,8个浓度组间冷冻胚胎复苏后的存活率、卵裂率、囊胚率及囊胚细胞数无显著差异(P>0.05)。表明BSA在这种防冻液中没有明显的保护作用。从经济、实用、生物安全角度考虑,不支持在玻璃化防冻液中添加BSA。     

小鼠基因揭示人类心脏梗死的新机制

一项研究发现小鼠中一种基因的不同变异体能够增加或降低动脉硬化症的水平。这种基因的人类版本也已经被证明在心脏梗死的发生中起到重要作用。这项研究的结果公布在近日的Nature Genetics上。     

Ⅱ型囊泡膜谷氨酸转运体阳性终末与γ-氨基丁酸阳性神经元在小鼠腰髓背角的分布及联系

目的 研究Ⅱ型囊泡膜谷氨酸转运体(vesicular glutamate transporter 2,VgluT2)阳性终末与γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)阳性神经元在小鼠腰髓背角的分布和联系。方法采用免疫组织化学方法研究VgluT2阳性终末与GABA阳性神经元在小鼠腰髓背角的分布;采用免疫荧光组织化学双重标记方法研究VgluT2阳性终末与GABA阳性神经元在小鼠腰髓背角的联系。结果VgluT2阳性终末与GABA阳性神经元在小鼠腰髓背角各层均有分布,特别是在Ⅱ层内侧部二分布都较为密集,免疫荧光双重标记后在激光共聚焦显微镜下可见GABA阳性神经元周围有许多VGluT2阳性终末与其胞体或突起密切接触。结论小鼠腰髓背角Ⅱ层内侧部GABA阳性神经元直接接受兴奋性传入。