GAP-43，Netrin-1，Collapsin-1和Neuropilin-1在出生后小鼠小脑中的动态表达

GAP-43,netrin-1,collapsin-1和neuropilin-1被认为在成网络分布的神经联系中发挥重要的作用．在年幼的啮齿类动物中,小脑包含5种不同的集中分布层：白质、内颗粒细胞层(IGL)、浦肯野氏细胞层(PCL)、分子层(ML)和外颗粒细胞层(EGL)．与浦肯野氏神经元在出生前产生这一点不同的是,EGL中的细胞在出生后产生,它们接受从前脑olivary核团发出的攀援纤维的主要神经投射,以及从内颗粒细胞发出的平行纤维的神经投射．这些神经投射主要在出生后的前3个星期内建立,同时还有浦肯野氏细胞的发育和成熟．而GAP-43,netrin-1,collapsin-1和neuropilin-1在出生后小脑发育的潜在作用仍然不清楚．为了更加清楚地探讨上述问题,检验了GAP-43,netrin-1,collapsin-1和neuropilin-1的mRNA与蛋白质在出生后5,10,20天和成年小鼠小脑中的表达情况．研究结果显示,这4种分子在小鼠出生后的小脑中有不同的时间和空间表达形式,这些结果与出生后发育和成年期间的轴突发生、延伸以及突触形成都有关联．通过免疫组织化学双标染色,发现小鼠出生后10天的小脑中,GAP-43阳性的浦肯野氏细胞也显示netrin-1或collapsin-1阳性,并且collapsin-1阳性的细胞也对 netrin-1 阳性．上述研究结果证明这4种分子可能参与了小脑的出生后发育．     

雌激素替代治疗对大鼠小脑树突棘素表达的影响

目的研究雌激素替代治疗对大鼠小脑树突棘素表达的影响。方法实验选取SD大鼠制作卵巢切除雌激素替代模型,以免疫组织化学,Western blot观察大鼠小脑中树突棘素的表达及其变化。结果免疫组化检测显示：树突棘素存在于小脑的分子层和颗粒层,蒲氏细胞胞浆中也可见的阳性颗粒。假手术组树突棘素阳性略强于雌激素替代组,但无统计学差异：手术安慰剂组中树突棘素阳性显著弱于其他二组。Western blot结果表明：树突棘素在安慰剂组大鼠小脑中表达最低,与其它二组有显著性差异,假手术组和雌激素替代组中树突棘素的表达量无显明差异。结论雌激素对维持大鼠小脑树突棘素的正常水平具有重要的作用。     

小脑顶核损毁对淋巴细胞功能的影响

目的：研究小脑顶核对淋巴细胞功能的调节作用,并初步探讨介导这种调节的中枢途径。方法：用海人酸（KA）毁损大鼠双侧小脑顶核,于术后第8d,取动物肠系膜淋巴结细胞和脾脏自然杀伤（NK）细胞进行体外培养,分别用四甲基偶氮唑（MTT）比色法检测由刀豆蛋白A（Con A）诱导的淋巴细胞的增殖反应,用流式细胞术测定NK细胞杀伤YAC-1肿瘤细胞的活性。同时用高效液相色谱法检测下丘脑中兴奋性神经递质谷氨酸的含量。结果：小脑双侧顶核注入KA后的第8d,小脑切片经Nissl染色,可见顶核内神经元胞体被有效破坏。此时,淋巴细胞对Con A诱导的增殖反应较双侧顶核注入生理盐水的对照组明显增强;而且NK细胞对YAC-1靶细胞的杀伤活性也明显高于对照组;同时下丘脑中谷氨酸含量较对照组明显减少。结论：小脑双侧顶核毁损可导致T和NK淋巴细胞功能明显增强,且下丘脑中谷氨酸含量显著下降,提示小脑顶核对淋巴细胞功能具有调节作用,小脑-下丘脑的谷氨酸能神经投射可能介导小脑顶核的免疫调节作用。     

小脑皮质结构年龄相关变化的研究进展

衰老过程中小脑皮质出现明显的形态学变化,包括体积萎缩、重量减轻、皮层厚度下降、神经元数量减少,树突丢失、细胞超微结构改变、神经递质紊乱以及胶质细胞增生等。神经元数量丢失与结构退变以及神经递质改变可能会导致老年小脑皮质神经环路破坏和信息传输紊乱,与老年个体运动调节功能及运动学习能力下降有关;神经胶质活动增强对维持老年小脑皮质的形态和功能可能起保护作用。     

PCR在鸭瘟临床诊断和免疫及致病机理研究中的初步应用

根据GenBank文献,应用Oligo 6．0分析软件合成了用于扩增鸭瘟病毒(duck plague virus,DPV)EcoR Ⅰ 765bp片段的1对引物,上游引物(P1)位于EcoR Ⅰ片段的246～266nt,下游引物(P2)位于EcoR Ⅰ片段的727～744nt,以DPV CHa株DNA为模板,筛选PCR最佳反应条件,建立了检测DPV的PCR方法。应用该方法对强毒株DPV鸭胚培养物和弱毒株的鸡胚培养物进行扩增,均可获得498bp的DNA片段。而对正常鸭(鸡)胚和鸡马立克氏病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、鸭病毒性肝炎病毒、多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌、鸭副伤寒沙门氏菌和鸭疫里默氏杆菌培养物进行检测,结果均呈阳性。扩增产物测序结果与文献报道一致,证明了PCR方法的特异性。对DPV CHa株鸡胚毒提取物DNA进行检测,其最低检出量为10fg。用病毒分离、Dot—ELISA和PCR三种方法分别检测1990～2002年期间送检的临床样品,对所获得的结果进行χ^2分析,证明PCR检出率明显高于前2种方法。CHa株免疫雏鸭后对血液、心、肝、脾、肺、肾、十二指肠、直肠、法氏囊、胸腺、胰腺、延脑、大脑、小脑、舌头、肌肉、骨髓、食道共18种组织和粪便进行PCR检测,结果表明：①皮下接种4h后,心、肝、脾、肾、法氏囊、胸腺、胰腺、延脑、大脑和小脑为阳性,8h后18种组织和粪便均为阳性;②口服接种4h后舌头和食道为阳性,8h后,心、肝、脾、肾、胸腺、胰腺、延脑、大脑、小脑、舌头、食道和血液均为阳性;③滴鼻接种4h后无阳性组织,8h后检测心、肝、脾、肾、胸腺、延脑、大脑、小脑、舌头、食道和血液,均为阳性;④三种途径免疫的鸭,于12h至第21天均检测出DPV DNA。DPV强毒SC1株人工感染成年鸭2h后,即能从脑、肝、脾、法氏囊和胸腺中检出DPV DNA。12h后和死亡鸭的心、肝、脾、肺、肾、十二指肠、直肠、法氏囊、胸腺、胰腺、脑、胸肌、食道、腺胃、血液、舌头、皮肤、骨髓等组织器官和口腔分泌物及粪便中,均检测到DPV的DNA。该研究为阐明鸭瘟病毒在体内分布提供了重要的数据。     

猫小脑皮质Glu/GABA表达的老年性变化

衰老导致小脑的生理功能下降,但其神经机制仍然不清楚。为此,利用免疫组织化学方法标记猫小脑皮质内谷氨酸(Glutamate,Glu)和γ-氨基丁酸(γ-Aminobutiric acid,GABA)免疫反应阳性(Glu-IR和GABA-IR)结构,探讨青年猫和老年猫小脑皮质Glu/GABA表达的老年性变化及其可能影响。并利用Image-Pro Express图像分析软件对小脑皮质各层Glu和GABA免疫反应阳性细胞密度及其灰度值进行测量。结果显示:与青年猫相比,老年猫小脑皮质内的Glu免疫反应阳性浦肯野细胞密度、颗粒层Glu免疫反应阳性细胞密度及其两者的免疫阳性反应灰度值均显著下降(P<0.01)(免疫反应强度与平均灰度值成反比);老年猫分子层、浦肯野细胞层GABA免疫反应阳性神经元密度及其免疫反应强度均显著下降(P<0.01);颗粒层GABA免疫反应阳性神经元密度无显著变化(P>0.05),但神经元免疫反应强度显著减弱(P<0.01)。研究结果提示,衰老过程中猫小脑皮质出现神经元Glu的表达增强、GABA的表达减少等,可能是小脑神经元丢失和精确调控能力下降等的重要原因之一。     

活性氧参与-氧化氮诱导的神经细胞凋亡

采用激光共聚焦成像技术,用氧化还原敏感的特异性荧光探针(DCFH-DA和DHR123)直接研究了一氧 化氮供体S-亚硝基-N-乙酰基青霉胺(SNAP)诱导未成熟大鼠小脑颗粒神经元凋亡过程中的细胞胞浆、线粒体 中活性氧水平的变化,发现神经细胞经0.5mmol/LSNAP处理1h后,细胞胞浆及线粒体中活性氧水平大大增 加.一氧化氮清除剂血红蛋白能够有效抑制细胞胞浆、线粒体中活性氧的产生,防止细胞凋亡.外源性谷胱甘 肽对细胞也具有良好的保护作用,而当细胞中谷胱甘肽的合成被抑制后,一氧化氮的神经毒性大大增强.实验 结果表明一氧化氮通过促进神经细胞产生内源性活性氧而启动细胞凋亡程序,而谷胱甘肽可能是重要的防止一 氧化氮引发神经损伤的内源性抗氧化剂     

不同年龄大鼠小脑浦肯野细胞超微结构的变化

对不同年龄雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠小脑蚓剖皮质浦肯野细胞的超微结构进行了观察。结果表明,随年龄增神经内的细胞器和内涵物发生了明显变化。浦肯野细胞内粗面内质网、高尔基复合体等细胞器数量有不同程度减少;微管增加;粗面内质网排列失序,网腔扩张;高尔基器排列紊乱,囊腔扩张;线粒体扩张或固缩,     

过氧化氢诱发的小脑皮质凋亡神经元膜K+通道电流的变化

用新生ＳＤ大鼠小脑皮质细胞进行培养,用Ａｒａ－Ｃ抑制非神经元生长,以Ｈ２Ｏ２诱发神经元凋亡。用膜片细胞贴附式观察了凋亡神经元膜钾离子通道电流的变化,结果表明,凋亡小脑皮质神经元膜Ｋ通道在不同箍位电压下,通道电流（ＩＫ）幅度小于正常神经元的,单位电导小于正常神经元的,通道的平均开放时间,开放概率、短开放及长开放时间常数亦均小于正常神经元的。说明小脑皮质凋亡神经元Ｋ通道活动减弱     

刺激猫下丘脑LHA和VMN对小脑皮层神经元电活动的影响

在戊巴比妥钠麻醉的猫,电刺激下丘脑外侧区(LHA)和腹内侧核(VMN)可引起小脑皮层第Ⅵ和Ⅶ小叶浦肯野细胞和非浦肯野细胞抑制性、兴奋性和抑制-兴奋性的电活动,但以抑制性活动为主;这些反应的潜伏期多数为10-20ms,但也可长达90ms;一般刺激LHA比刺激VMN更有效。刺激下丘脑所激发的小脑神经元抑制性电活动可为静脉注射组胺H_1受体阻断剂扑尔敏所阻断。本文对上述观察的可能作用作了讨论。