实时荧光定量PCR检测人肿瘤细胞NKG2D配体基因表达

目的：建立人肿瘤细胞NKG2D配体基因（MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3）表达的实时荧光定量PCR（real-time fluorescence quantitativePCR）检测方法。方法：根据NCBI基因库中NKG2D配体基因序列,设计合成引物。用Trizo1法从培养的肿瘤细胞（BEC-7402、HeLa、MDA-MB-435、XWLC-05）中提取总RNA,逆转录成eDNA,建立实时荧光定量PCR检测NKG2D配体基因表达的方法,并检测NKG2D配体在肿瘤细胞株中的表达。结果：经过琼脂糖凝胶电泳、熔解曲线和标准曲线分析,用所设计的引物和SYBR GreenI能够特异扩增和定量检测NKG2D配体基因的表达。该方法成功检测4种肿瘤细胞NKG2D配体基因的表达。结论：建立了人NKG2D配体基因表达的实时荧光定量PCR检测方法,为进一步研究人NKG2D配体在肿瘤免疫中的作用提供了有效手段。     

乳腺癌中丝／苏氨酸蛋白激酶Plk1mRNA的表达及其预后价值

目的：检测乳腺癌细胞和组织中丝／苏氨酸蛋白激酶Plk1基因mRNA的表达情况并分析其预后价值。方法：应用半定量RT-PCR方法分析3株人乳腺癌细胞和1株正常乳腺上皮细胞中Plk1基因mRNA的表达水平。同时分析84例乳腺癌及对应的癌旁正常乳腺上皮组织中Plk1mRNA的表达水平。统计学分析Plk1mRNA表达水平与乳腺癌患者年龄、肿瘤大小、组织分化程度、淋巴结转移状况、TNM分期和雌激素受体（ER）等临床病理参数之间的关系,以及与预后之间的关系。结果：Plk1基因mRNA在乳腺癌细胞中的相对表达水平显著高于其在正常乳腺上皮细胞中的相对表达水平（P值均小于〈0．05）。另外,Plk1mRNA在乳腺癌组织中平均表达水平（0．88±0．18）显著高于其在癌旁正常乳腺上皮组织中平均表达水平（0．22±0．10;P〈0．01）。统计学分析结果袁明：Plk1mRNA表达水平和乳腺癌患者的淋巴结转移状况及TNM分期密切相关（P=0．009或0．007）。Kaplan—Meier生存曲线分析结果表明：高Plk1mRNA表达水平的乳腺癌患者的5年无疾病进展率及总体生存率均显著低于低Plk1mRNA表达水平的乳腺癌患者（P=0．0026及0．0136）。COX模型的多因素预后分析结果表明：Plk1基因mRNA表达水平是乳腺癌患者的一个独立的预后因素（HR=4．764,95％CI：1．341-6．123,P=0．0025）。结论：Plk1在乳腺癌组织呈现高表达水平,其mRNA表达水平有望成为临床乳腺癌患者一个重要的预后判断分子指标。     

土壤中棉花黄萎病菌SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR定量检测技术研究

为实现田间土壤棉花黄萎病菌的早期检测,建立了土壤中棉花黄萎病菌的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法.以含342bp PCR扩增产物的阳性质粒为参考,构建了标准曲线,并对该曲线的特异性、敏感性、可重复性进行了评价.结果表明,该方法具有快速、特异性强、敏感度高等特点.检测范围在3.8×103-3.8×108cop...     

靖江地区宫颈病变患者高危型人乳头瘤病毒感染及其基因型分析

目的:研究靖江地区各组宫颈病变中高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染率及其基因型分布。方法:采用实时荧光PCR检测方法检测334例宫颈脱落细胞标本中高危型HPV及其基因型。结果:高危型HPV在宫颈炎组、湿疣组、低度鳞状上皮细胞内病变(LSIL)组、高度鳞状上皮细胞内病变(HSIL)组中的感染率分别为24.2%、58.2%、49.3%、69.5%;HPV 16、18、33、58型在宫颈病变中是最常见的HPV型别,其中,HPV16型在宫颈炎组、湿疣组、LSIL组、HSIL组中所占比例逐渐增高,分别为17.9%、18.9%、30.8%、41.9%。结论:高危型HPV感染率随着宫颈病变程度的加重而升高,HPV16型是高危型HPV感染中的主要亚型,HPV18、33、52、58也较常见,其余型别很少。     

实时荧光定量PCR 检测人肿瘤细胞NKG2D 配体基因表达

目的:建立人肿瘤细胞NKG2D配体基因(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)表达的实时荧光定量PCR(real-timefluorescence quantitative PCR)检测方法。方法:根据NCBI基因库中NKG2D配体基因序列,设计合成引物。用Trizol法从培养的肿瘤细胞(BEC-7402、HeLa、MDA-MB-435、XWLC-05)中提取总RNA,逆转录成cDNA,建立实时荧光定量PCR检测NKG2D配体基因表达的方法,并检测NKG2D配体在肿瘤细胞株中的表达。结果:经过琼脂糖凝胶电泳、熔解曲线和标准曲线分析,用所设计的引物和SYBR Green I能够特异扩增和定量检测NKG2D配体基因的表达。该方法成功检测4种肿瘤细胞NKG2D配体基因的表达。结论:建立了人NKG2D配体基因表达的实时荧光定量PCR检测方法,为进一步研究人NKG2D配体在肿瘤免疫中的作用提供了有效手段。     

通过xCELLigence系统实时监测低毒性X-tremeGENE DNA转染实验

研究背景X-tremeGENE DNA Transfection Reagent是非脂质体的多组分转染试剂,已成功应用于多种细胞的转染实验。X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP在有无血清存在的条件下均可进行转染,且细胞毒性低,转染后无需更换培养基。     

不同浓度NaCl胁迫处理下豇豆幼苗抗氧化酶活性的变化

本研究主要探讨不同浓度NaCl胁迫处理下豇豆(Vigna unguiculata Linn.)幼苗叶片抗氧化酶活性的变化情况.研究结果表明,在0～250 mmol/L NaCl胁迫下,随着盐浓度的增加,豇豆幼苗叶片可溶性蛋白质、脯氨酸和丙二醛含量逐渐增加,在150 mmol/L浓度时,3者的含量都达到最大值;而超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)的活性开始逐渐上升,它们的活性分别在100 mmol/L、150 mmol/L和150 mmol/L时达到最大值,然后逐渐下降.同时,对NaCl胁迫下3种抗氧化酶基因的表达进行适时定量PCR分析,分析结果显示3种抗氧化酶基因的转录表达与酶活性的变化一致.说明在不同浓度的NaCl胁迫下,NaCl诱导了sod、pod和cat 3种抗氧化酶基因的表达,3种抗氧化酶活性相应地提高,从而提高了豇豆应对NaCl胁迫的能力.本文结果将为今后豇豆在盐碱栽培生产提供一定的参考.     

乙肝纤维化分级相关血浆蛋白标志物的定量蛋白质组筛选

非创伤性肝纤维化检测对于评价肝炎进程、临床治疗以及药效评价等方面,都具有非常重要的作用.通过N末端标签的蛋白质组定量手段,从血浆中筛选肝纤维化分级相关的蛋白候选标志物.首先利用目前纤维化诊断黄金标准——肝穿病理检测,获得纤维化不同分级的合格样本血浆,并对肝纤维化各级间的血浆混合样本进行了蛋白质组定量比较分析,发现了72个与乙肝纤维化分级呈明显相关性的血浆蛋白,构成了一个有重要参考价值的、纤维化分级诊断的候选蛋白标志物库.用WB法进一步验证了定量结果的准确性.利用IPA在线分析后获得了4个生理代谢网络图,提示这些差异蛋白在肝纤维化进程中代表的不同功能影响.总之,利用N末端标签定量蛋白质组技术,全面定量挖掘了血浆中与乙肝纤维化分级相关的差异蛋白及变化规律,对于加深肝纤维化发病机制的认识和理解具有很大帮助,同时也为肝脏纤维化临床诊断和治疗提供有益信息和参照.     

巨峰葡萄花芽分化过程中成花基因LEA FY的表达

目的:研究LEAFY基因在巨峰葡萄花芽分化期间的表达差异,为实际生产提供理论依据。方法:用半定量RT-PCR方法研究LEAFY基因在巨峰葡萄花芽分化期间的表达。结果:LEAFY基因的表达量在所研究的8个时期内有明显差异,在5叶期、6叶期、7叶期、8叶期的表达量相对较高。结论:根据成花基因LEAFY表达上的差异,可以人为地提前或延迟巨峰葡萄的花期。     

更正启事

应作者请求,本刊2010年第21卷第5期第686～690页刊发的文稿"O1群霍乱弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立"(作者:杜昕颖等),需要对以下内容进行更正: