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31.
以人粒巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)、人α8干扰素(hIFN-α8)和分裂细胞核抗原(PCNA)的cDNA定点突变为例,建立了一种新的大区域非连续多核苷酸同步定点突变的方法。经碱变性后的质粒DNA,先用突变引物延伸单链,然后通过PCR扩增得到突变双链DNA。用该方法成功地改造了hGM-CSF基因5′端36个核苷酸中的9个位点、IFN-α8基因5′端39个核苷酸中的9个位点和PCNA基因SD顺序两侧6个和7个核苷酸。与经典的含U单链寡核苷酸定点突变方法相比,本方法突变效率高,并省去了对突变克隆杂交筛选的操作 相似文献
32.
人免疫缺陷病毒1型TAT蛋白点突变对其反式激活作用的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
不同免疫缺陷病毒(HIV-1,HIV-2和SIV)的Tat均有3个高度保守的结构域:Cys富集域、核心域和碱性氨基酸富集域。用PCR定点突变法在HIV-1 Tat蛋白的这些区域引入单氨基酸或多氨基酸突变;构建了以HIV-1 LTR-158到+80区域为启动子,含有不同突变点的突变Tat基因表达质粒;以荧光酶基因为报告基因,瞬时共转染Jurkat细胞:分析不同氨基酸突变对Tat的反式激活作用的影响。 相似文献
33.
34.
35.
复制型HBV转基因小鼠的遗传与繁育研究 总被引:3,自引:2,他引:1
本文采用类似系祖建系的方法,对复制型HBV转基因小鼠模型的17、21、25三个系列进行了繁育,通过PCR和Southern分子杂交的方法,检测三个系列小鼠尾组织和血清的DNA样品,以确定HBV基因的整合和复制情况。结果表明,HBV基因已稳定地遗传至第五代(F5),且各世代小鼠血清中都存在HBVDNA,此外,整合阳性小鼠的血清中能测出HBVDNA的比率很高,F1代为94.44%(102/108),F2、F3代为95.31%(61/64),故在繁育中可以通过测血清中的HBVDNA来确定小鼠是否整合。 相似文献
36.
以双引物法对葡萄糖异构酶(GI)基因进行定点突变,将突变体基因于大肠杆菌中表达,获得了GI双点突变体GIK253RA198C.研究K253R和A198C双点突变对GI的结构和性质的作用,结果表明GIK253RA198C的热稳定性明显下降,最适反应温度降低5℃.文章从结构和机制上解释了为何同是K253R突变,对SM33 GI和密苏里游动放线菌GI的热稳定性产生不同的影响,认为这是由于Lys253在两种GI结构的位置上存在微小差异,从而使引入的Arg对亚基间的相互作用产生了相反效应所引起. 相似文献
37.
高必需氨基酸转基因马铃薯的研究 总被引:8,自引:0,他引:8
80年代以来,马铃薯遗传转化系统日趋成熟,转基因工程植株已被广泛应用于基础科学研究[1]。作为食物蛋白和能量主要来源的马铃薯,提高其蛋白质含量及质量的遗传工程研究正受到人们的普遍关注[2]。Yang等[2]将旨在改善氨基酸平衡的CAT-HEAAE(氯酶素乙酰转移酶-高含量人体必需氨基酸)融合基因导入马铃薯,获得了Southernblot、Northernblot、Westernblot的证据,但尚缺少氨基酸分析的资料。玉米醇溶蛋白(zein)[3]是一个富含甲硫氨酸的贮存蛋白,它和人工合成的HE… 相似文献
38.
Richerd D.Palmiter Gunnar Norstedt Richard E.Gelinas Robert E.Hammer Ralph L.Brinster 莫鑫泉 《中国生物工程杂志》1984,4(3):42-48
把小鼠的金属巯基组氨酸三甲内盐基因的启动基因或调节区段接到编码人的生长激素的结构基因上,用显微注射法,把融接的基因导入小鼠受精卵中,有23只小鼠(70%)被稳定地掺入了融接的基因,在它们的血清中人的生长激素浓度很高,长得比其对照小鼠大得多,人生长激素的合成可被正常诱导金属巯基组氨酸三甲内盐基因表达的镉或锌进一步诱导,在能表达人生长激素的转基因的小鼠的血清中,胰岛素样的生长因子的浓度也随着增加,从它们的垂体的组织学研究表明,正常合成生长激素的细胞的机能已经失调,融接的基因可在所有鉴定过的组织中表达,然而人生长激素信使RNA对内源的金属巯基-1信使RNA的比率随不同的组织和不同的动物而变化,这说明外源基因的表达受整合的位置和所处的组织环境所影响。 相似文献
40.