机械刺激诱导的烟草悬浮培养细胞耐热性及其与过氧化氢的关系

机械刺激可诱发烟草悬浮培养细胞中H2O2的积累,提高烟草悬浮培养细胞在高温胁迫下的存活率和再生能力,缓解高温胁迫下的细胞活力丧失和膜伤害,外源H2O2预处理也可提高烟草悬浮细胞的耐热性。这些暗示H2O2作为信号分子可触发机械刺激诱导的烟草悬浮细胞耐热性形成。     

仙客来愈伤组织的超低温保存

为了避免连续继代造成仙客来愈伤组织的变异, 对仙客来愈伤组织进行了超低温冷冻保存研究。以继代后处于对数生长期的愈伤组织为实验材料, 首先在含有不同蔗糖浓度的培养基上预培养不同时间, 转至不同的冰冻保护剂中直接液氮冷冻或-20oC预冷冻2 h, 然后液氮超冷冻保存, 37oC水浴迅速解冻, 并用相应蔗糖浓度的液体培养基洗涤, 以中性红染色测定细胞的存活率, SPSS13.0软件进行统计学分析。结果表明: 预培养基中蔗糖浓度、预培养时间、降温方式、冷冻保护剂等对解冻后材料相对存活率存在不同程度的影响, 筛选出4%蔗糖浓度预培养3 d、9号保护剂、0oC停留30 min后直接冷冻为超低温保存的最佳方案, 通过简单的方法获得了较好的愈伤组织保存效果。     

完全水淹条件下空心莲子草的生长、存活及出水后的恢复动态研究

为了判断入侵植物空心莲子草(Alternanthera philoxeroides)能否在河岸带的水淹环境中生存,实验研究了空心莲子草在30、60、90 d和120 d的完全水淹条件下的形态变化、生物量变化、存活及出水后的恢复生长状况.结果发现,空心莲子草在完全水淹条件下分枝的伸长生长加剧,并能快速产生新的叶片,但总生物量及地下部分生物量显著降低.空心莲子草在完全水淹处理后有很高的存活率,淹没120 d后存活率仍高达90%.水淹处理结束后,植株能够迅速地开始恢复生长,但恢复生长能力随着水淹持续时间的延长而逐渐降低.结果表明,空心莲子草有很强的水淹耐受能力,能够在江河河岸带生存,但在水淹持续时间较长的距水面较近的地段可能生长较差.     

两种主流载体蛋白在大肠杆菌表面展示抗体应用中的系统分析

抗体表面展示技术对于新抗体的筛选和抗体亲和力的成熟是非常重要的工具．目前,较为广泛应用的表面展示技术是噬菌体的表面展示和酵母的表面展示．大肠杆菌,以其培养简单和基因改造便捷,有望成为非常好的一种表面展示的宿主．但是,目前为止,大肠杆菌还没有被广泛地应用于抗体的表面展示技术中．主要的原因之一是在大肠杆菌外膜展示抗体的效率还不够高．作为外膜展示的载体,许多蛋白都被研究过,其中自转运蛋白(autotransporter,AT)和冰核蛋白(ice nucleation protein,INP)是人们研究最多的两种载体蛋白．还有一个原因是大肠杆菌作为宿主,在表达异源基因和展示异源蛋白过程中的存活率问题．在本研究中,系统地研究了Ag43β(一种自转运蛋白Antigen43的β结构域)和INPNC(去掉中间冗余序列的冰核蛋白的N端和C端)两种载体蛋白在强弱不同的三种启动子(T7、araBAD和lac)诱导表达的情况下,表达量、展示率、抗原亲和力以及宿主菌存活率的差异．我们发现,Ag43β展示的抗体在抗原亲和力上优于INPNC展示的抗体．在存活率方面,T7启动子诱导表达的存活率很低：用INPNC作为载体蛋白时只有0.0033%,用Ag43β作为载体蛋白时只有0.02%存活率．lac启动子诱导表达的存活率：用INPNC作为载体蛋白时为2.04%,用Ag43β作为载体蛋白时为13.27%．araBAD启动子诱导表达的存活率很高：用INPNC作为载体蛋白时为37.80%,用Ag43β作为载体蛋白时高达90.23%．但是araBAD诱导表达量和展示率都很低,所以其表现出的宿主高存活率意义有限．综合看来,由lac启动子驱动的、以Ag43?茁为载体蛋白的抗体表面展示系统是最好的选择．     

酒酒球菌液氮超低温保存

【目地】为安全、长期的保藏酒酒球菌,本文研究了菌体生长时间、冷冻方法、解冻温度、菌密度以及保护剂等对酒酒球菌细胞冷冻存活率的影响,找到最优液氮超低温保存方法。【方法】采用平板计数法测定冷冻存活率。【结果】实验结果表明酒酒球菌的最佳保存方法为:首先在稳定期前期离心收集菌体;其次加入保护剂(20 g/L酵母浸提物,40V/V甘油,20 g/L蔗糖,30 g/L谷氨酸钠)稀释菌体,使菌密度为109CFU/mL;然后直接投入液氮冷冻;最后在37℃温水浴中迅速解冻。保存6个月后,其中21株酒酒球菌的冷冻存活率达到99%以上。【结论】初步研究表明酵母浸提物,甘油,蔗糖,谷氨酸钠复合保护剂对酒酒球菌的保护效果较好,液氮超低温保存可用于酒酒球菌的长期保存。     

单核细胞增多性李斯特菌在体外模拟消化道环境中的抗性

[目的]通过测定存活率及细胞内pH(pHi)变化,分析单核细胞增多性李斯特菌(单增李斯特菌)在体外模拟消化道中的抗性.[方法]模拟唾液、胃液和小肠液根据其主要组成成分配制,按试验设计顺次加入后获得模拟的消化道各段混合液(包括相应的pH及其可能的范围).平板计数法测定单增李斯特菌在模拟消化液中的存活率,并用荧光比例成像显微镜(fluorescence ratio imaging microscopy,FRIM)测定细菌的pHi.[结果]单增李斯特菌在唾液中存活率＞90％;经pH≤3.0的胃液处理后,其在胃液和胃-肠混合液中的存活率低于0.05％;提高胃液pH至3.5,细菌存活率开始上升;在胃液pH4.0时,两株单增李斯特菌在模拟胃肠液中存活率显著提高(11.2％-85.9％).FRIM研究表明,单增李斯特菌在模拟唾液中的pHi与对照组相近.经过pH为3.5和4.0的胃液和胃-肠混合液处理后,pHi值仍维持在较高水平(＞7.75).[结论]单增李斯特菌在经过pH≥3.5胃液后,能够维持菌体细胞内的pH稳态,且存活率较高,表明其细胞膜仍保持完整.     

副溶血性弧菌在动态体外人胃仿生原位消化系统中的存活情况研究

副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种经口摄入感染的食源性致病菌,广泛存在于水产品中,然而其进入人胃后的存活情况尚属研究空白。本研究将浓度为10~7 cfu/g的副溶血性弧菌接种于三文鱼和南美白对虾中,运用体外人胃仿生原位消化系统进行消化模拟,经过120 min后,测定食物排空率、胃部pH值变化及幽门排出食糜中副溶血性弧菌的存活情况。结果显示三文鱼的胃排空滞后时间为60 min,南美白对虾为90 min,模拟消化120 min时,两种食糜均未完全排空。胃部pH值为(1.6±0.1),在食物摄入10 min后大幅上升,随着胃酸的不断分泌及食物的消化分解,其pH值开始下降,并保持在5.41左右。在食品消化120 min进入肠道后,副溶血性弧菌并没有完全被胃酸杀灭,对虾中该菌的存活率为(0.119±0.025)%,而三文鱼中存活率为(0.007±0.005)%。综上所述,副溶血性弧菌可随食物基质的消化分解通过胃排空进入肠道,从而躲避胃酸的杀灭并导致人体患病。     

杂交黄颡鱼与普通黄颡鱼幼鱼生长性能及耐低氧能力的比较

实验以杂交黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)和普通黄颡鱼幼鱼为实验对象, 拟通过8周的投喂生长和低氧胁迫实验, 比较研究杂交黄颡鱼与普通黄颡鱼的生长性能及耐低氧抗逆性。投喂生长实验: 经过8周的养殖, 杂交黄颡鱼平均体重为(19.60±0.88) g/尾, 显著高于普通黄颡鱼平均体重为(15.74±0.42) g/尾(P<0.05), 杂交黄颡鱼幼鱼较普通黄颡鱼幼鱼体重生长快24.52%; 杂交黄颡鱼幼鱼存活率为(87.78±1.92)%, 显著高于普通黄颡鱼幼鱼存活率(67.78±1.92)% (P<0.05), 杂交黄颡鱼幼鱼比普通黄颡鱼幼鱼存活率高 29.51%; 杂交黄颡鱼的饲料系数为1.18±0.14, 普通黄颡鱼饲料系数为1.36±0.21。低氧胁迫实验: 同时将杂交黄颡鱼和普通黄颡鱼置于在溶氧量(1.48 ± 0.27) mg/L的水体中, 分别在低氧胁迫0、6h、12h和24h后, 检测血清和肝脏中抗氧化酶活性以及脑和肝脏中缺氧诱导基因(HIF-1α)的相对表达量发现: 杂交黄颡鱼和普通黄颡鱼血清和肝脏中乳酸脱氢酶(LDH)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性和过氧化氢酶(CAT)活性在低氧胁迫后 6h以及总抗氧化能力(T-AOC)在低氧胁迫后 12h较低氧胁迫 0均出现显著性变化(P<0.05)且在低氧胁迫6h、12h和24h杂交黄颡鱼抗氧化酶活性均高于普通黄颡鱼; 杂交黄颡鱼和普通黄颡鱼脑和肝脏中缺氧诱导基因(HIF-1α)的相对表达量均在低氧胁迫后出现显著性上升(P<0.05)且在低氧胁迫6h、12h和 24h杂交黄颡鱼缺氧诱导基因(HIF-1α)的相对表达量均高于普通黄颡鱼。从无氧代谢能力、抗氧化能力以及缺氧诱导基因相对表达量3方面分析表明杂交黄颡鱼和黄颡鱼低氧胁迫短时间均具有一定的低氧耐受能力但随着胁迫时间延长均会出现氧化损伤且杂交黄颡鱼的耐低氧能力要显著性高于普通黄颡鱼。     

Assessing establishment success and suitability analysis of Zostera marina transplants using staple method in northern lagoons

2009年利用植株枚订移植法在我国北方典型澙湖——山东荣成天鹅湖逐月进行大叶藻(Zostera marina)植株移植,并于当年逐月对移植植株的存活率、定居时间和生长进行监测,分析该方法在我国北方澙湖的有效性和适宜性。结果显示:(1)4–6月移植植株的存活率为76.5%–90.4%,其中4月移植植株的存活率最低,7–9月移植植株的存活率达到100%;(2)6–9月移植植株的定居时间均为1个月,5月移植植株的定居时间为2个月,而4月移植植株的定居时间长达4个月;(3)除个别监测月份外,移植植株的叶长和叶鞘长均显著小于天然植株,而茎节直径和根长均与天然植株无明显差异;(4)我国北方澙湖较适宜大叶藻植株移植的区域为海水透明度高、水深不超过1 m的潮下带,且底质为泥含量较高的泥砂底质海区,9月份是适宜的移植时间。     

不同离体寄主及其成熟度对亚洲柑桔木虱存活的影响

【目的】亚洲柑桔木虱Diaphorina citri Kuwayama的虫口密度及活动与柑桔黄龙病的田间传播、流行有十分密切的关系,寻找合适的室内饲养条件能够便于观察和研究其生物学特性和传病机制。【方法】本文以九里香Murraya exotica(L.)Mant.、酸桔Citrus sunki Hort.ex Tanaka和马水桔Citrus reticulata Blanco.cv.Mashuiju 3种寄主植物不同成熟度离体梢为研究材料,(1)比较亚洲柑桔木虱卵分别在3种寄主植株和离体嫩梢上的孵化率;(2)比较3种寄主不同成熟度离体梢对各龄若虫存活率和蜕皮的影响;(3)比较3种寄主不同成熟度离体梢对成虫存活率的影响。【结果】(1)亚洲柑桔木虱在植株嫩梢上卵的孵化率高于离体嫩梢,九里香表现最明显;(2)低龄若虫在叶片未完全展开的离体嫩梢上存活率最高,而高龄若虫在完全展开的嫩梢上最高;(3)用离体成熟梢饲养柑桔木虱成虫存活率高于离体嫩梢,酸桔和马水桔离体梢饲养的存活率较九里香高。【结论】用寄主植物离体梢饲养的亚洲柑桔木虱卵孵化率和若虫、成虫存活率都较高而且较稳定,该方法可用于这种木虱的室内繁殖中。