一种简单实用的适于大、小质粒的DNA提取方法

以Birabolm和Doly的质粒提取方法为基础,用醋酸铵取代醋酸钠,沉淀染色体DNA和RNA,用异丙醇取代乙醇沉淀质粒DNA,降低了质粒DNA标本中蛋白质和RNA的含量,减少了标本体积。并发现在质粒DNA标本中加入冷异丙醇或冷乙醇后,在-70℃、-20℃、-10℃、4℃和室温下作用,对质粒DNA的回收量无明显影响,在质粒DNA标本中加入冷异丙醇后,在4℃作用0、10、20和30分钟,对质粒DNA的回收量无明显影响。用该方法提取的质粒DNA可直接用于限制性内切酶消化。用该方法提取大肠埃希氏菌     

海绵Dysideidae sp.中的两个溴代酚类化合物

利用各种层析手段,从海绵Dysideidae sp.的正丁醇部分纯化了两个溴代酚类化合物,通过各种波谱数据鉴定为3,4,5-三溴-2-(2,′4′-二溴-苯氧基)-苯酚(1)和3,4,5,6-四溴-2-(2,′4′-二溴-苯氧基)-苯酚(2)。     

替比夫定对HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者HBV特异性T细胞免疫动态变化的研究

目的观察替比夫定治疗HBeAg阳性慢性乙肝患者对HBV特异性T细胞细胞亚群的影响。方法选取2013年12月至2015年1月在我院接受替比夫定治疗的HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者10例,其中完全应答(CR)组3例,部分应答(PR)组4例,无应答(NR)组3例,观察治疗后HBV特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)水平及HBV DNA、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等的变化。结果三组患者HBV DNA水平随着治疗时间的延长而下降,CR组和PR组差异有统计学意义(F=17.21,P0.05)。患者HBV特异性CTL水平随着治疗时间的延长而增加,对于CR组,强烈的增殖反应在12周时达到最高,持续反应到36周(t=28.27,P0.05),对于PR组,强烈的增殖反应出现在12周(t=15.57,P0.05),而NR组则无明显的增殖反应(P=0.286)。患者治疗后第3个月IFN-γ和TNF-α含量较治疗开始时高,差异有统计学意义(F_(IFN-γ)=23.43,F_(TNF-α)=18.27,P0.05),第6个月、第12个月IFN-γ和TNF-α含量均高于治疗第3个月,差异有统计学意义(F_(IFN-γ)=27.35,F_(TNF-α)=16.17,P0.05);第6个月和第12个月IFN-γ、TNF-α含量比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论替比夫定治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者能有效抑制HBV的复制,降低HBeAg水平,HBV特异性细胞毒T淋巴细胞功能随着治疗的延长而增强,治疗后HBeAg血清学转换的发生与HBV特异性细胞毒T淋巴细胞水平升高有关。     

十溴二苯醚在斑马鱼体内的脱溴行为

十溴二苯醚(BDE-209)是多溴二苯醚家族中含溴原子数最多的一种化合物,由于它价格低廉,是良好的阻燃剂,急性毒性在所有溴联苯醚中最低,所以在全球范围内使用最广,但其具有一定的挥发性和强亲脂性,在环境中难降解,因此环境中存在的痕量BDE-209可通过食物链对人类的身体健康产生严重危胁。本文通过针对斑马鱼(Danio rerio)展开实验室生态毒理学研究,初步得到不同类生物脱溴行为的差异,为展开更深入的针对BDE-209的研究和评价PBDEs污染的风险、采取更积极的管理措施减小污染有着一定作用。     

胶束模拟酶研究

用表面张力法测定了表面活性剂Brij35、Brij58、Tritonx-100、SDS和25℃,35℃,45℃时的临界胶束浓度(CMC),并用小角激光光散射法加以确证。以这些胶束为酶模型,研究了它们对芳环亲核取代反应的催化作用。结果表明,非离子型胶束对2,4—二溴化雌甾醇的羟基化有明显催化效果。     

冻干麻疹减毒活疫苗残余水分影响因素的探讨

影响冻干制品残余水分的因素很多,但西林瓶胶塞的含水量是其关键因素。使用经干烤工艺处理和未干烤处理的药用溴丁基胶塞进行麻疹减毒活疫苗冻干试验,结果显示,用未经干烤工艺处理及处理的药用溴丁基胶塞冻干的麻疹减毒活疫苗,存储18个月后,水分上升的平均值分别为2.03%和0.08%,经单一因素的方差分析,两者有统计学意义(P0.01)。证明经处理的药用溴丁基胶塞,对保持麻疹减毒活疫苗在存储期内的残余水分稳定作用效果明显。     

含溴结构域蛋白2结构与功能的研究进展

含溴结构域蛋白2(bromodomain-containing protein 2,BRD2)具有两个串联的溴结构域和一个末端外结构域,是溴结构域和末端外结构域蛋白家族成员之一.BRD2蛋白能够特异性结合组蛋白乙酰化赖氨酸,参与基因的转录调控、染色质重塑和细胞增殖与凋亡等生物学活动.近年来研究表明,BRD2蛋白通过溴结...     

设施菜田与棚外粮田土壤菌群和反硝化气体产生的比较分析

【目的】对比设施菜田与棚外粮田土壤菌群以及N2O产生模式的差异。【方法】采用变性梯度凝胶电泳(DGGE)和反硝化功能基因(nirS,nosZ)方法分别比较两种土壤细菌群落以及功能基因类群丰度的差异,利用自动连续在线培养监测体系(Robot系统)测定两种土壤在好氧、厌氧阶段N2O等反硝化相关气态产物产生模式,分析N2O/(N2+N2O+NO)产物比。【结果】设施菜田与棚外粮田具有不同的土壤细菌群落结构,并且土壤细菌总量得到了显著的提升,然而两种反硝化功能基因(nirS,nosZ)丰度并没有显著变化。与设施菜田相比,棚外粮田有相对低的N2O积累量以及产物比,并且在厌氧初期气体产生模式有所不同。培养后铵态氮和亚硝态氮含量上升。【结论】设施菜田长期有别于棚外粮田的管理方式造成了土壤细菌群落的显著改变,增大了活跃微生物总量,造成土壤酸化,并导致N2O在气态产物中的比例升高。设施菜田土壤微生物进行了与棚外粮田不同的硝酸盐呼吸过程,异化硝酸盐还原成铵(DNRA)过程有可能贡献了两种土壤的部分厌氧N2O产生量。     

两种黄素蛋白对奴卡霉素化合物的催化

【背景】2,4-二酮吡咯烷类化合物奴卡霉素和替达霉素都含有C-10酮基结构,但是该结构是由两种不同的酶短链脱氢酶NcmD和黄素腺嘌呤二核苷酸(flavine adenine dinucleotide, FAD)依赖的脱氢酶TrdL分别催化形成的。然而奴卡霉素生物合成基因簇中的FAD依赖的酶NcmL是否能回补NcmD的功能,以及TrdL能否催化奴卡霉素C-10酮基的形成,尚无相关的实验证据。【目的】通过体外酶催化实验研究NcmL和TrdL对奴卡霉素II和奴卡霉素F的C-10位羟基的催化作用。【方法】通过克隆ncmL和trdL至pET-28a(+)中,然后于大肠杆菌中进行诱导表达。诱导后的蛋白经纯化后,考察了纯化的NcmL和TrdL对奴卡霉素II和奴卡霉素F的催化作用,利用高效液相色谱与高分辨质谱联用技术鉴定了酶反应产物。【结果】NcmL不能催化奴卡霉素II和奴卡霉素F的C-10位羟基的脱氢反应,TrdL能催化奴卡霉素II和奴卡霉素F的C-10位羟基脱氢,分别得到奴卡霉素I和奴卡霉素G。【结论】体外生化研究表明,NcmL不参与奴卡霉素C-10酮基的生物合成反应,TrdL具有较广的底物谱,能催化多种奴卡霉素的C-10位羟基转化为酮基。