164株阴沟肠杆菌的药物敏感性分析

目的了解阴沟肠杆菌的药物敏感性情况以指导临床合理用药。方法对中山大学附属第一医院近3年分离出的阴沟肠杆菌的标本分布及耐药情况进行回顾性分析。结果共分离出164株阴沟肠杆菌,其对亚胺培南、头孢吡肟、阿米卡星和氧氟沙星的敏感性较高。结论阴沟肠杆菌对3代头孢菌素耐药严重,呈多重耐药性,亚胺培南仍为治疗阴沟肠杆菌严重感染的首选用药。     

GL－7－ACA酰化酶基因克隆及在大肠杆菌中的表达

本文报道了利用BamHⅠ酶解的载体pBR322 DNA与Sau3A部分酶解的假单胞菌Ps．130染色体DNA片段构建重组质粒,并用³²P标记的寡核苷酸探针从3205个含有外源片段的重组质粒中检测得到7株阳性克隆株。进一步经¹²⁵Ⅰ标记的抗体／抗原放射免疫反应、GL－7－ACA酰化酶活力测定以及酶反应产物的纸谱色层分析,由上述7株阳性株中鉴定出3株能在大肠杆菌中表达酰化酶活力的基因克隆株。对该3株菌的重组质粒——pMR 5、pMR 6和pMR-7-DNA的初步凝胶电泳分析表明,pMR 5和pMR 7质粒中插入片段的分子量为6．8kb,质粒pMR 6则带有5．7kb的外源片段。实验还比较了重组质粒pMR 5在8株不同的大肠杆菌宿主菌中,GL－7－ACA酰化酶的表达水平。     

CLSI三代头孢菌素新旧折点对判定肺炎克雷伯茵药物敏感性及产ESBLs菌株分布的影响

目的了解CLSI2010（S20）及2009（S19）头孢他啶（CAZ）、头孢噻肟（CTX）新旧折点变化对本地区肺炎克雷伯菌药物敏感性及产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株分布的影响。方法收集安徽医科大学第一附属医院临床分离的50株肺炎克雷伯菌;纸片扩散法测定菌株对CTX及CAZ的敏感性,CLSI表型确证试验确定产ESBLs菌株,改良三维试验检测CTX和／或CAZ耐药、非产ESBLs菌株的产酶情况。结果在S19折点下,CTX和CAZ耐药率分别为54．0％、30．0％;在S20折点下,耐药率分别为68．0％、42．0％。产ESBLs菌株总检出率为64．0％（32／50）。旧折点下,分别有81．3％、43．8％的产ESBLs菌株分布在CTX和CAZ耐药菌株中;新折点下,升高至100％、62．5％。2株对CTX和／CAZ耐药、非产ESBL菌株中,1株同时产ESBLs和AmpC酶,1株仅产AmpC酶。结论根据S20,肺炎克雷伯菌对CTX和CAZ的耐药率较S19均有所增高;并提高了耐药表型与产ESBLs菌株的一致性。产AmpC酶可影响表型确证试验对产ESBLs菌株的检出。     

肠杆菌诱导型AmpC酶对第三代和第四代头孢菌素的影响

目的探讨诱导型AmpC酶对三代、四代头孢菌素的影响及其治疗策略。方法采用药敏纸片扩散法,用FOX药敏纸片作为诱导剂,以CAZ、CTX和FEP作为指示剂,检测肠杆菌的诱导AmpC酶的产生。结果待测的196株菌株中有101株为产诱导型AmpC酶阳性（51．5％）,其中阴沟肠杆菌58株（67．4％）,产气肠杆菌18株（52．9％）,沙雷菌属共8株（40％）,费劳地枸椽酸杆菌6株（42．8％）,聚团肠杆菌6株（33．3％）,奇异变形杆菌5株（20．8％）,其余95株产诱导型AmpC酶为阴性。产诱导型AmpC酶阳性菌株中无一株对FEP纸片的抑菌圈直径有影响,诱导型AmpC酶试验均为阴性。结论对于鉴定确认为诱导型AmpC酶阳性菌株的感染,即使实验报告三代头孢菌素为敏感,也应慎用或避免使用第三代头孢菌素的治疗,以第四代头孢菌素如头孢吡肟为首选药。     

RNAi技术降低头孢菌素C工业生产菌株中cefG基因的转录

RNAi是近年来新兴的一种通过抑制基因转录水平来实现特定基因表达沉默的技术。本研究尝试在顶头孢霉工业生产菌株中利用RNAi技术沉默cefG基因的转录,构建了一个含可形成cefG双链RNA转录单元的质粒,并将其导入头孢菌素C工业生产菌株中。结果发现其中两个转化子的cefG基因转录水平在发酵第4天较出发菌株降低了80%以上,而它们的头孢菌素C发酵水平较出发菌株则分别降低了34.6%和28.8%。     

扩环酶的研究进展及其应用前景

扩环酶,也叶脱乙酰氧基头孢菌素Ｃ合成酶,催化青霉素Ｎ扩环生成脱乙酰氧基头孢菌素Ｃ,是头孢菌素生物合成中的关键酶。在真菌中它是一个双功能酶,同时具有扩环酶和羟化酶的活性;而在细菌中扩环和羟化却是由两个独立的酶来承担的。近年来,扩环酶被纯化成均一蛋白,有关它的性质、分子结构以及基因结构等方面的研究都取得了飞速发展,并不断地应用基因工程的技术探索其在抗生素生产上的应用。     

植物根际芽胞杆菌菌种资源采集及其具有过水解催化活性水解酶基因的克隆

[背景]芽胞杆菌源枯草杆菌蛋白酶(subtilisin carlsberg)、乙酰基木聚糖酯酶(acetyl xylan esterase)和头孢菌素乙酰水解酶(cephalosporin acetyl hydrolase)具有较高的过水解催化活性,有商业开发价值。[目的]挖掘芽胞杆菌菌株中具有过水解酶催化活性的水解酶蛋白基因,为后续制备过水解酶及酶法合成过氧乙酸奠定基础。[方法]利用定向筛选培养基,从植物根际及纳豆产品中筛选产蛋白酶芽胞杆菌候选菌株,并利用RFLP及16S rRNA基因对其进行鉴定。从蛋白酶高产芽胞杆菌菌株中克隆枯草杆菌蛋白酶、乙酰木聚糖醋酶和头孢菌素乙酰水解酶的全长基因。[结果]从植物根际土壤及纳豆产品中共分离到85个候选菌株,RFLP及16S rRNA基因鉴定结果表明候选菌株均为芽胞杆菌,分别属于Bacillus subtilis、Bacillus cereus、Bacillus pumilus和Bacillus megaterium四个类群。从B.subtilis NSYT-3克隆的枯草杆菌蛋白酶基因编码的多肽链全长381个氨基酸,从B.pumilus OSLJ-3克隆得到的乙酰基木聚糖酯酶基因编码的多肽链全长320个氨基酸,从B.subtilis NSYT-3克隆的头孢菌素乙酰水解酶基因编码的多肽链全长318个氨基酸,3D结构模拟表明这3个酶蛋白均具有α/β水解酶折叠家族蛋白结构特点。[结论]芽胞杆菌源具过水解催化活性水解酶基因的克隆,为后续开发酶法合成过氧乙酸工艺奠定了基础。     

头孢地尔:新型铁载体头孢菌素抗多重耐药革兰阴性杆菌感染北大核心CSCD

抗菌药物耐药是目前全世界面临的重要公共卫生问题之一,亟需开发有效的广谱抗菌药物以应对多重耐药革兰阴性杆菌的感染。头孢地尔是日本Shionogi公司开发的新型铁载体头孢菌素类抗菌药物。该药物对碳青霉烯耐药的肠杆菌目细菌(carbapenem resistant Enterobacterales,CRE)、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌等具有广谱强效的抗菌活性。该药物克服了革兰阴性杆菌因外膜孔道蛋白表达量下调和主动外排泵表达量上调产生的耐药性,并对丝氨酸酶和金属碳青霉烯酶具有较好的稳定性。该药可用于治疗由革兰阴性杆菌引起的复杂性尿路感染(包括肾盂肾炎)、院内获得性肺炎和呼吸机相关性肺炎。文中通过汇总头孢地尔的化学结构、抗菌作用机制、体外抗菌活性、药代动力学、药效学和临床治疗等信息,展现头孢地尔作为新型铁载体头孢菌素在治疗多重耐药革兰阴性杆菌感染中的应用前景。     

大肠杆菌头孢菌素C乙酰酯酶的敲除对头孢菌素C酰化酶应用的影响

7-氨基头孢烷酸(7-ACA)是合成头孢菌素类抗生素的重要中间体,工业上通常采用头孢菌素C酰化酶一步水解头孢菌素C制备,但在该反应产物中存在一个主要杂质3-去乙酰基-7-氨基头孢烷酸(D-7-ACA),该杂质的产生是由大肠杆菌中内源基因aes编码的头孢菌素C乙酰酯酶水解头孢菌素C或7-ACA引起的.为了防止D-7-AC...     

GL—7ACA酰化酶（C130）β亚基N端氨基酸残基的突变及功能

戊二酰 7 氨基头孢烷酸酰化酶 (即GL 7ACA酰化酶 ,EC .3.5 .1.11)的催化中心通常在 β亚基N端的第一个氨基酸 ,底物亲和标记的研究亦显示N端存在着结合靶点 ,因而该区域的结构可能与酶的功能密切相关。对C130 β亚基N端的 2～ 8位氨基酸残基分别进行了肽段置换和定点突变研究。将N端前 8位肽段置换为来源于Arthrobacterviscosus的青霉素G酰化酶 (PAC)的对应序列后 ,C130酰化酶活力丧失 ;而置换为来源于E .coli的青霉素G酰化酶 (PGA)的对应序列后 ,酰化酶活力仍然保留 ,但Km 值从 0 .44× 10 -3 mol·L-1增大为 0 .5 5× 10 -3mol·L-1,kcat值由 4.92s-1降低为 1.6 4s-1。另对C130 β亚基N端 2～ 4位氨基酸残基作了单点突变 :第 4位的Trp为可能的底物类似物结合位点 ,被变为Tyr后 ,它对底物GL 7ACA的结合能力略为减弱 ,kcat则降低为 2 .2 9s-1;而变为Leu后 ,Km 为 0 .34× 10 -3 mol·L-1,kcat为 3.15s-1;第 3位的Ser变为Met、Ala及Cys后 ,随着Km值逐渐降低 ,kcat也有所降低 ,而S3 M、S3 A突变体的kcat/Km 值比野生型的分别增加了 2 2 .3%和 39.3% ;将活性中心Ser(β1)邻位的Asn(β2 )变为Gln后 ,C130酶活大幅度下降 ,kcat减为 0 .47s-1。上述结果表明 ,C130 β亚基N端的前几个氨基酸残基均可对酶的功能