工程大肠杆菌K99抗原蛋白的分离纯化及其特性的研究

本工作采用了快速、简便的方法从大量培养的基因工程菌E.coil 1548(pHK99)表面分离和纯化了K99抗原蛋白,纯化产物在SDS-PAGE上呈现-条蛋白带,该蛋白的分子量约为16500,PAS反应结果表明该蛋白为糖最白,等电聚焦证实该蛋白pI为9．5,用免疫学方法证实了该蛋白大量存在于细菌表面,并具有较好的热稳定性,文中还讨论了该蛋白在不同培养基中的表达。     

大肠杆菌生产的重组尿激酶的纯化及其特性

由大肠杆菌生产的重组尿激酶的高低分子量两种形式均已经重新折叠和提纯。对该蛋白质的低分子量形式作了比活性,氨基酸组成,氨基末端分析,羧基末端分析,胰蛋白酶图谱,抗体滴定,和色谱行为等特性描述。对高分子量形式作了比活性和色谱行为等特性描述。除缺少连接了天冬酰氨302碳水化合物外,在被试验的各个方面,重组尿激酶和天然尿激酶几乎完全相同。结果表明,由于大肠杆菌生产的可适当折叠,天然尿激 酶上连接的碳水化合物在酶的催化活性中不起作用。     

甜茶的毒理学实验研究

甜茶Rubus suavissimus S.Lee为一高甜度、低热能、低毒植物。实验研究证明动物服用安全范围大、对生长发育、造血系统、肝肾功能无妨碍,也未见对动物主要脏器(心、肝、脾、肺、肾、脑)有实质性损害及蓄积中毒反应。甜茶将作为我国新型的天然甜味剂。     

Characterization of transgene integration pattern in F4 hGH-transgenic common carp （Cyprinus carpio L.）

The integration pattern and adjacent host sequences of the inserted pMThGH-transgene in the F4 hGH-transgenic common carp were extensively studied. Here we show that each F4 transgenic fish contained about 200 copies of the pMThGH-transgene and the transgenes were integrated into the host genome generally with concatemers in a head-totail arrangement at 4-5 insertion sites. By using a method of plasmid rescue, four hundred copies of transgenes from two individuals of F4 transgenic fish, A and B, were recovered and clarified into 6 classes. All classes of recovered transgenes contained either complete or partial pMThGH sequences. The class I, which comprised 83% and 84.5% respectively of the recovered transgene copies from fish A and B, had maintained the original configuration, indicating that most transgenes were faithfully inherited during the four generations of reproduction. The other five classes were different from the original configuration in both molecular weight and restriction map, indicating that a few transgenes had undergone mutation, rearrangement or deletion during integration and germline transmission. In the five types of aberrant transgenes, three flanking sequences of the host genome were analyzed. These sequences were common carp β-actin gene, common carp DNA sequences homologous to mouse phosphoglycerate kinase-1 and human epidermal keratin 14, respectively.     

用基于"Neo/E"的技术构建重组质粒

根据重组工程原理,建立了一种用于构建重组质粒的“neo／E”(抗生素／单酶切位点)选择与反选择新方法。首先采用PCR方法扩增出线性打靶分子：然后进行两步体内同源重组,(1)neo／E基因敲入,重组子呈现neo抗性表型;(2)目的基因替换M／E基因。用限制酶E消化时,发生第二步重组的DNA分子不能被消化,能够转化大肠杆菌受体菌DH5α。应用该方法构建了重组质粒pGL3-Basic PC1900T。PCR及测序鉴定证明：外源片段重组率为20％,所建立的重组工程选择与反选择新技术为质粒构建提供了新的解决方案。     

天然紫杉烷类二萜化合物的核磁共振氢谱规律

紫极醇是一种结构新颖、抗肿瘤作用机理独特的新型抗肿瘤药,已成为当前全世界研究的热点。     

直接注射质粒DNA表达人G—CSF的研究

转基因动物研究发展至今,对于所构建煌表达载体有效性如何,一直缺乏一个验证体系。由于转基因动物的建立较为繁琐复杂,投资大,因而直接用转基因动物去验证所用元件是不明智的。为此,我们采用小鼠乳清酸蛋白（WAP）基因（2．6Kb)为调控序列,人G－CSF基因组基因为目的的自然,将WAP第一内含子置于G－CSF基因5’端,构建成转基因动物乳腺表达载体pINGG（Fig.1）。将表达质粒直接注射到怀孕小鼠乳腺。于分婉第8天取乳汗进行ELISA检测。在泌乳期小鼠乳汁中检测出人G－CSF,表达量达15－32ng/mL(Table1)。具有一定应用前景。实验中发现：增加注射次数可以提供转染效率,但最佳注射次数仍需摸索。另外,如果换用复制型载体,整合与表达效率有可能大大提高。     

应用Tn5—1uxAB—sacB基因盒对根瘤菌巨型质粒进行定向标记,缺失或消除

根瘤菌是农业生产实际中应用最多的微生物肥料。随着遗传工程技术的发展和农业生产实际的需求,遗传改良根瘤菌势必要进入田间应用（l）。如何对根瘤菌在田间的应用情况如占瘤率、与土著根瘤菌的竞争生存情况等进行监测,我们采用了发光酶基因工XXAB（2）对根瘤菌实行标记。考虑到发光酶基因在根瘤菌基因组中的不同标记位置,对根瘤菌的应用情况会产生影响,特别是对标记基因的活性强弱和标记基因的稳定性造成影响,从而影响监测结果和随后的安全性评价。因此我们首先对含发光酶基因的载体进行了改造（3）,以利于对根瘤菌的染色体和巨型…     

紫蓝红色素的研究进展

紫蓝红色素是一种有很大推广价值的天然色素。原料易栽培,见效快,色素年产量可达２．７ｔ／ｈｍ＾２,Ｅ１％１ｃｍ〉１３,关键在于水管理。色素具有醌类特性,热稳定性高,１００℃加热２ｈ,ＰＨ３－８下残存８８％以上,热降解符合一级反应动力学,光稳定性也较高,酸性溶液于自然光下９３天的残存率为６９．６％;Ｍｇ＾２＋、Ｚｎ＾２＋、Ｃａ＾２＋、盐、糖、淀粉、琼脂、明胶、苯内等无不良影响。用于酒类、饮料、冷饮、大     

带有sop基因稳定表达载体的构建

F质粒的第五个EcoRⅠ片段mini-F具有质粒的分配功能。其EcoRⅠ-BamHⅠ片段含有oriS、ccd、repD和sop基因(sopA,B和C)。该片段与pBR322重组,得到质粒pDMC32。pDMC32经SmaⅠ酶切,T4连接酶连接,得到衍生质粒pDMC311,消除了oriS、ccd和repD片段。MI32(pDMC32)和MI311(pDMC311),在液体限磷基础培养基中培养100代,质粒保持率分别为93％和100％。而对照MIR322(pBR322)培养55代时,质粒保持率仅为10％。带有色氨酸启动子质粒pDR720与pBR322重组,得到质粒pDMC40。pDMC40再与mini-F的sop基因重组,得到带有sop基因的稳定表达质粒pDMC48。MI48(pDMC48)在液体限磷基础培养基中培养100代,质粒保持率为100％。