RGD多肽修饰钙磷陶瓷支架材料对骨质疏松兔成骨能力及骨功能影响的机制研究

摘要 目的：探究RGD多肽修饰钙磷陶瓷支架材料对骨质疏松（osteoporosis, OP）兔成骨能力和骨功能的影响极其可能的作用机制。方法：选取40只雌性SPF级新西兰大白兔，随机分为A组（正常对照组）和B组（OP组），每组各20只，再将A组随机分为A1组：sham组、A2组：sham+HA组、A3组：sham+BCP组、A4组：sham+RGD-BCP组，每组5只；B组随机分为B1组：OP组、B2组：OP+HA组、B3组：OP+BCP组和B4组：OP+RGD-BCP组，每组5只。B组采用去势法制备OP模型，检测相关指标。结果：A组兔术前和术后3个月时BMD无变化（P>0.05），B组兔术后3个月时的BMD值较术前下降（P<0.05）。自第4 d开始，A组和B组RGD-BCP支架材料组细胞的OD值高于HA和BCP支架材料（P<0.05），且B组之间的差异较A组更大（P<0.05）。Western Blot分析显示，A、B两组中RGD-BCP中整合素avβ3的表达高于HA和BCP（P<0.05），且B组之间的差异较A组更大（P<0.05）。B4和A4组p38 MAPK蛋白的相对表达均低于、Wnt5a和β-catenin表达均高于B2、B3和A2、A3组(P<0.05)，此外，A4组p38 MAPK蛋白的相对低于、Wnt5a和?茁-catenin表达高于B4组(P<0.05)。结论：RGD-BCP对兔BMSCs具有良好的相容性和吸附作用，对OP模型兔更显著；且RGD-BCP的机制可能与调控p38 MAPK/Wnt5a/β-catenin信号通路有关，为OP合并骨缺损的修复提供了新的思路和理论依据。     

芝麻素抑制NMDA诱导的小鼠皮层神经元损伤

目的:研究芝麻素对NMDA所致原代培养小鼠皮层神经元损伤的保护作用及其机制。方法:体外培养原代皮层神经元;免疫荧光染色鉴定细胞纯度;MTT法测定细胞存活率;Hoechst/PI双染色观察细胞凋亡的形态学变化;激光共聚焦显微镜技术观察钙成像,检测细胞内钙离子浓度变化;Western blot检测各组细胞中Bcl-2、Bax、NR2A、NR2B蛋白的表达。结果:NMDA(200μM)60分钟能使神经元细胞存活率显著下降,细胞凋亡百分比明显增加(P0.01),芝麻素(0.1μM)能提高细胞存活率,减少细胞凋亡(P0.01)。与NMDA组相比,芝麻素能抑制钙超载;降低Bax和NR2B蛋白表达;增加和Bcl-2蛋白表达(P0.01)。结论:芝麻素具有神经保护作用,这种作用可能与抑制钙超载、下调NMDA受体亚型NR2B的表达以及调节Bcl-2家族蛋白有关。     

白色念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶在口腔扁平苔藓患者唾液中的表达

研究白色念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶(SAP)家族在扁平苔藓患者唾液中的表达,进而探讨白色念珠菌病与扁平苔藓的关系。选取白色念珠菌携带者、白色念珠菌病患者、携带白色念珠菌的扁平苔藓患者、伴有白色念珠菌病的扁平苔藓患者各20例,念珠菌培养阴性的扁平苔藓患者10例。从唾液标本中直接提取RNA,进行RT-PCR。白色念珠菌携带者唾液中有SAP2、SAP4-6、SAP7的不同表达,携带白色念珠菌的口腔扁平苔藓患者唾液中有SAP2、SAP4-6、SAP7、SAP8、SAP9的不同表达,所有携带者中均未表现SAP1、SAP3和SAP10的阳性扩增。白色念珠菌患病者及伴有白色念珠菌病的口腔扁平苔藓患者唾液中有SAP1-10的不同表达。念珠菌培养阴性的扁平苔藓患者均无SAP1-10的阳性扩增。SAP9与扁平苔藓密切相关。     

重组人红细胞生成素经PI3K/Akt途径对大鼠癫痫持续状态诱导的神经元凋亡的保护作用

目的观察重组人红细胞生成素(recombinant human epo,rHuEPO)对戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)点燃的癫痫持续状态(status epilepticus,SE)的SD大鼠海马神经元凋亡的影响,应用PI3K(phosphatidyl inositol 3 kinase磷脂酰肌醇3激酶)抑制剂LY294002进一步探讨rHuEPO作用的可能机制。方法采用PTZ点燃大鼠SE模型,将大鼠随机分为A组:正常对照组(生理盐水normal saline NS)、B组:PTZ组(PTZ+NS)、C组:rHuEPO组(PTZ+rHuE-PO)、D组:LY294002组(PTZ+LY294002+rHuEPO)、E组:LY294002溶剂DMSO(二甲基亚砜)对照组(PTZ+DMSO+rHuEPO),检测大鼠行为学和脑电图的改变及HE染色观察海马病理学的改变;用TUNEL方法检测海马神经细胞的凋亡情况;免疫组织化学法观察磷酸化蛋白激酶B、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase-9)、X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达。结果在PTZ点燃大鼠SE后rHuPO活化了磷脂酰肌醇3激酶/蛋...     

D-天冬酰胺和D-高丝氨酸的制备研究

在以L-天冬氨酸为原料制备D-天冬氨酸的基础上,设计了D-天冬酰胺和D-高丝氨酸的合成新方法。即以L-天冬氨酸为原料,经酯化、消旋、拆分后得到D-天冬氨酸甲酯;D-天冬氨酸甲酯盐酸盐氨解、精制可得到D-天冬酰胺,总收率为49.9%,光学纯度达到99%以上;由D-天冬氨酸甲酯经还原、精制可得到D-高丝氨酸,总收率为64.7%,旋光纯度达到99%以上。     

Survivin反义寡核苷酸诱导SW620细胞凋亡过程中对caspase-3表达的影响

目的：观察survivin反义寡核苷酸（ASODN）对人结肠癌细胞株SW620增殖、凋亡的影响,并初步探讨其分子机制。方法：靶向survivin基因中与caspase-3结合的部位设计、合成反义寡核苷酸并通过脂质体将其转染至人结肠癌细胞SW620中。噻唑蓝（MTT）法观察survivinASODN对SW620细胞增殖的抑制作用,测定IC50;转染36h后,Hoechst33342染色荧光显微镜下观察检测SW620细胞核变化,RT-PCR检测survivinASODN处理后SW620细胞中caspase-3mRNA表达,分光光度法检测caspase-3酶活性．结果：转染8h后,SW620细胞中可见黄绿色荧光均匀分布：不同浓度survivinASODN处理SW620细胞44h后,SW620细胞增殖显著受到抑制,IC50为1×10^-6M。2×10^-7,4×10^-7,6×10^-7,8×10^-7 and1.2×10^-6M的survivinASODN处理后,细胞生长抑制率分别为15．38±0．022％、2404±0．023％、30．87±0．027％、45．02±0．018％和65．01±0．024％：Hoechest33342染色后荧光显微镜下可观察到染色质凝集并出现凋亡小体,RT-PCR检测到caspase-3mRNA表达上调,另外caspase-3酶活性显著升高。结论靶向survivin基因中与caspase-3结合的部位设计合成的survivinASODN可抑制显著结肠癌SW620增殖、诱导细胞凋亡,其机制与诱导caspase-3表达,提高caspase-3酶活性有关。     

铅对小鼠血液和肝肾影响的实验性初步观察

用全血细胞分析仪检测染毒小鼠新鲜血样,再用日立7020生化分析仪,配合试剂盒法对血清进行检测,研究铅对血液与肝肾功能的影响,结果表明：100mg／kg浓度的醋酸铅对小鼠的血液有显著影响,白细胞数目（WBC）,淋巴细胞数目（Lymph）,中性粒细胞数目（Gran）等指标显著增加（P〈0．05）,此外对血小板凝血系统功能显著影响,血小板数目（PLT）等指标下降极显著（P〈0．01）,对血红细胞（RBC）,血红蛋白（HGB）等指标影响不显著（P〉0．05）。肝肾功能性指标：谷丙转氨酶（AIJT）,谷草转氨酶（AST）尿素氮（UREA）肌酐（CREA）生化酶显著偏离正常值（P〈0．05）。表明铅对肝脏肾脏功能有显著的破坏。对检测结果做了进一步的分析讨论。     

铬(Ⅲ)-天冬氨酸螯合物合成与分析

研究了铬(Ⅲ)-天冬氨酸螯合物的合成方法,探讨了影响合成工艺的主要因素,确定了原料配比、pH值、最佳反应时间及温度,采用X射线衍射光谱对螯合物进行了表征,结果表明铬(Ⅲ)能与天冬氨酸形成螯合物。     

紫外-激光复合诱变选育天冬氨酸转氨酶高产菌株

对天冬氨酸转氨酶产生菌大肠杆菌XJ-1原生质体进行紫外-激光复合诱变筛选,结果表明,复合诱变对该菌的原生质体有明显的致死作用。以致死率和正突变率为指标,确定了紫外和He-Ne激光照射的最佳时间分别为45 s和40min。在此条件下对大肠杆菌原生质体进行紫外-激光复合诱变,得到3株高产菌株,分别命名为XJ-1-45、XJ-1-86和XJ-1-99,酶活较出发菌株XJ-1分别提高了12.82%、17.37%和26.27%。传代培养表明突变株生产性能稳定。     

Two sequence alterations,a 136 bp InDel and an A/C polymorphic site,in the S5 locus are associated with spikelet fertility of indica-japonica hybrid in rice

The rice indica/japonica hybrid shows strong heterosis.However,such inter-subspecific hybrid can't be directly used in rice production due to its low spikelet fertility.The S5 locus was proved to be associated with fertility of indica/japonica hybrid and its S5n allele from wide-compatibility variety(WCV)is capable to overcome fertility barrier.In the present study,we reported the causal sites in the S5 locus responsible for compatibility of indica/japonica hybrid.Fine-mapping of the S5 locus using the 11 test-cross families pinpoints a candidate S5 locus encoding aspartic protease(Asp).Intragenic recombination within the Asp gene happened in a number of recombinants,resulting in chimeric S5j-S5n alleles.Just like S5n,the chimeric s5j-S5n allele displayed higher spikelet fertility when combined with the S5i allele.In the complementary test,however,the S5n allele from WCVs failed to enhance fertilities of the indica/japonica hybrids.Compared to both indica and japonica varieties.all nine WCVs from different resources are characterized with a 136 bp deletion in the Asp N-terminus.which probably renders the S5n allele non-functional.Furthermore,an A/C polymorphic site is detected 1,233 bp downstream of the Asp start codon.The heterozygous A/C site of the Asp gene in indica/japonica hybrid is believed to be the casual factorto causc partial sterility.The functional makers based on the two polymorphic sites will be broadly used in developing wide-compatibility rice varieties.