利用CRISPR/Cas9技术构建基因编辑大鼠模型

RNA介导的CRISPR/Cas9基因编辑系统由单链引导RNA(sgRNA)与核酸酶Cas9构成。在细胞内,sgRNA能够按照碱基互补配对的原则引导Cas9与靶点结合,由Cas9切割目标DNA,造成双链DNA断裂(double stranded break, DSB)。在随后的DNA修复过程中,细胞主要进行非同源末端连接(non-homologous end joining,NHEJ)或在有修复模板存在的情况下进行重组修复(homology directed repair, HDR)。如果将CRISPR/Cas9系统以及修复模板通过显微注射的方式导入大鼠的胚胎内,就能借助细胞的修复机制实现大鼠胚胎的基因编辑,由此构建各种基因修饰大鼠模型。本文详细介绍了利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建大鼠模型的具体操作步骤,以期为相关领域的科研人员提供一种大鼠基因修饰模型的构建方法。     

应用大鼠G_0期淋巴细胞核异常测试法评价铬的诱变效应

本文应用大鼠外周血G0期淋巴细胞核异常测试法对铬的诱变效应进行了研究．实验结果表明,不同价太铬具有不同的诱变性。与常用的短期致突变测试法的实验结果相一致,本方法作为环境诱变剂的短期初筛试验有推广应用的价值。     

大鼠前列腺上皮细胞在无血清培养液中增殖的调节

本文报道了未成年大鼠前列腺上皮细胞的无血清培养模型的建立方法,并利用该模型研究了生长因子、催素及性激素对前列腺细胞增殖功能的作用。结果表明：胰岛素、表皮生长因子、转铁蛋白、霍乱霉素和牛垂体提取物对前列腺细胞的增殖有直接的促进作用,糖皮质激素对细胞的增殖无明显影响。催乳素刺激细胞的增值,但与双氢睾酮或雌二醇无协同作用。单独的双氧睾酮或雌二醇对细胞的增殖无显著作用。     

电刺激和低镁引起的大鼠内嗅皮层游离钙和钾离子浓度的动态变化

电刺激或降低细胞外的镁离子浓度,会引起Ｎ－甲基－Ｄ－天门冬氨酸受体通道的开放,造成胞内外离子浓度失平衡．使用离子选择性微电极结合脑片技术,对电刺激和低镁溶液引起的大鼠内嗅皮层游离钙和钾离子浓度及电位的动态变化的规律进行了研究。实验结果表明,电刺激和低镁溶液引起的内嗅皮层游离钙和钾离子浓度的改变,在细胞层Ⅳ－Ⅴ（皮层表面下９００－１１００μｍ）变化最大。低镁溶液引起游离钙离子浓度下降,同时钾离子浓度呈双相变化,即先增加后减少。低镁溶液灌流内嗅皮层脑片数小时后,胞外钙离子浓度持续地停留在低浓度水平,而钾离子浓度受影响较小．     

慢性缺氧大鼠肺动脉内皮依赖性舒张反应与内皮结构的动态…

本实验对慢性减压缺氧（５０００ｍ）过程中肺动脉ＡＣｈ内皮依赖性舒张反应作了动态观察,并结合分析了其与内皮超微结构和肺动脉压演变的关系。结果表明,缺氧３－２１ｄ,平均肺动脉压（ｍＰＡＰ）显著递增（Ｐ＜０．０５－０．００１）,而缺氧４０ｄ组基本与缺氧２１ｄ组持平,未再进一步升高。缺氧１ｄ组,各ＡＣｈ浓度（１０＾－１０,１０＾－９,１０＾－７,１０＾－６,１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ）引起的内皮依赖性舒张反应明     

脂类对盐酸,乙醇致大鼠胃粘膜损伤的保护作用

本实验用Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠胃内给予二山酰卵磷脂与三棕榈酰甘油酯１：４（ｗ／ｗ）混合物（每只鼠１ｍｌ,含５ｍｇ混合物）保护０．６ｍｏｌ／Ｌ盐酸致胃粘膜损伤,使溃疡指数及溃疡面积与胃总面积比分别降低了７６．２７％及８０．２４％（Ｐ＜０．０１）,胃粘膜表面疏水性及跨膜电位值显著增加（Ｐ＜０．０５）。该混合物对无水乙醇所致胃粘膜损伤无明显保护作用。提示脂类对盐酸致胃粘膜损伤的保护作用与其维持表面疏水性有关,但这种疏水表面对不同致损伤因子的作用是有差异的。     

缺氧性肺动脉高压大鼠肺组织中血小板源性生长因子和c—my…

本研究分析了大鼠肺组织中血小板源性生长因子Ａ链、Ｂ链和ｃ－ｍｙｃ原癌基因ｍＲＮＡ。正常肺组织可表达１．７ｋｂ的ＰＤＧＦ－ＡｍＲＮＡ和３．５ｋｂ的ＰＤＧＦ－ＢｍＲＮＡ,还有少量２．２ｋｂｃｍＲＮＡ．在缺氧过程中,ＰＤＧＦ－Ｂ链ｍＲＮＡ和ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ迅速增加,至缺氧１４ｄ时,分别为正常的３倍和５倍。而ＰＤＧＦ－ＡｍＲＮＡ在缺氧７ｄ时增高,而后又略有降低。结果表明：缺氧的肺组织局生成的ＰＤＧＦ激活     

大鼠内脏大神经电刺激后C－Fos在中枢神经系统中的表达

有关内脏痛的问题,已有不少学者进行了研究。但由于内脏痛本身的复杂性,至今其中枢传导途径还不太清楚。本实验刺激大鼠内脏大神经后,利用Ｆｏｓ的免疫组化技术在下列结构中可以发现Ｆｏｓ免疫组化阳性反应的神经元：隔外侧核、斜角带核、丘脑的菱形核、连接核、下丘脑室旁核、中缝背核、兰斑、中缝大核、网状外侧核、脊髓ＲｅｘｅｄⅠⅡⅢⅩ层等结构。而在对照组的上述结构中没有表达,只在耳蜗背核有较明显的表达。通过上述研究我们发现围绕脊髓中央管和各脑室的周围灰质系统与内脏伤害性刺激有关。这引起了我们极大的兴趣。关于这部分的工作我们正在进行中。     

电针和伤害性刺激条件下Fos在大鼠一些递质免疫阳性触液神经元中的表达

在电针和伤害性刺激条件下,分别可在大鼠的脑室和脑表面软膜部位的ＤｙｎＡ、Ｍ－Ｅｎｋ、Ｓｐ。ＮＴ、ＧＡＢＡ、ＤＢＨ及５－ＨＴ免疫阳性的接触脑脊液神经元中观察到ｃ－ｆｏｓ原癌基因蛋白的表达。这些触液神经元有的位于管膜上皮浅表,有的位于上皮之间或下方,构成管膜上、管膜间或管膜下触液神经元,在室管膜间虽然也能观察到典型的双极神经元,但占多数为多极神经元,并且也能观察到含纤毛的柱状管膜上皮受膨体状神经终末的支配。