不同潮气量机械通气对大鼠肺组织HMGB1表达的影响

目的观察不同潮气量机械通气大鼠肺组织高迁移率族蛋白1（HMGB1） mRNA及其蛋白的表达水平,探讨HMGB1在呼吸机相关性肺损伤（VILI）发病中的作用。方法24只雄性Wister大鼠随机分为对照组、小潮气量组和大潮气量组,分别采用原位分子杂交技术和免疫组织化学染色法检测肺组织HMGB1 mRNA及其蛋白的表达水平。结果与对照组和小潮气量组比较,大潮气量组大鼠肺组织HMGB1 mRNA及其蛋白表达水平明显升高（均P〈0.01）,小潮气量组与对照组各项指标比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论大潮气量机械通气可诱导肺组织HMGB1 mRNA及其蛋白高表达;HMGB1分泌增多导致肺组织炎症反应扩大,可能是呼吸机相关性肺损伤（VILI）发生的重要因素之一。     

大鼠实验性胃溃疡期间下颌下腺TFF3基因的变化

目的研究下颌下腺肠三叶因子(intestinal trefoil peptide,ITF即TFF3)基因在大鼠实验性胃溃疡自愈过程的变化,探讨其与胃溃疡自愈的关系。方法通过胃窦前壁黏膜下注射冰乙酸制备大鼠胃溃疡模型:⑴用免疫组织化学SABC法和RT-PCR检测42只溃疡组,21只盐水组,及6只正常组大鼠下颌下腺组织中TFF3肽和TFF3mRNA的表达情况。结果(1)免疫组化显示:溃疡组大鼠下颌下腺的TFF3肽主要表达于导管系统上皮,如闰管、颗粒曲管(granular convoluted tubule,GCT)以及纹状管、小叶间导管上皮细胞、黏液腺泡细胞也有少量分布,浆液腺泡细胞呈阴性。溃疡组手术后第1d时,下颌下腺TFF3表达明显强于盐水组和正常组(P0.01)。术后第2d,积分光密度明显低于1d溃疡组(P0.05),4、6d积分光密度逐渐增强并高于对照组(P0.05),到术后第10d达高峰(P0.01),23d积分光密度仍高于对照组(P0.05)。(2)RT-PCR显示:溃疡1、2、4、6、10、14、23dTFF3/GAPDH光密度比值分别为1.42±0.10,1.18±0.13,1.29±0.15,1.24±0.17,1.57±0.19,1.25±0.14,1.13±0.16明显高于相应盐水对照组的TFF3/GAP-DH光密度比值(P0.01)。结论大鼠胃溃疡时期,下颌下腺TFF3基因上调,推测下颌下腺TFF3通过外分泌或内分泌参与胃溃疡愈合过程     

大鼠视网膜色素上皮细胞分离的改良及其MMP表达

目的探索和优化大鼠视网膜色素上皮(RPE)细胞分离培养的方法,评价RPE细胞的存活状态及细胞基质金属蛋白酶(MMP)的表达,为相关眼底疾病的研究提供细胞来源。方法采用改良的三步酶消化法分离大鼠RPE细胞,并进行细胞体外培养。倒置显微镜观察细胞形态,细胞生长曲线评价不同培养代数的RPE细胞的增殖活力。免疫荧光检测CRALBP和角蛋白表达鉴定RPE细胞,并观察不同培养代数RPE细胞中多种基质金属蛋白酶的表达。结果分离培养的RPE细胞可呈梭形、六角形,并维持RPE细胞特征性蛋白CRALBP和角蛋白表达,但细胞内色素成分随着细胞分裂和传代次数的增多逐渐减少。基质金属蛋白酶MMP2、MMP3、MMP9和MMP10在第1代和第3代RPE细胞中均表达阳性,且表达强度未见明显改变。结论应用改良的三步酶消化法可以成功的分离培养大鼠RPE细胞,并在第1代和第3代RPE细胞维持基质金属蛋白酶MMP2、MMP3、MMP9和MMP10的阳性表达。体外培养的大鼠RPE细胞为研究视网膜相关疾病提供了细胞模型。     

慢性应激致肠易激综合征大鼠模型的建立与评价

目的建立一种模拟肠易激综合征临床症状的动物模型,为相关药物的研究提供实验基础。方法采用孤养附加慢性不可预见性刺激建立IBS模型,每只大鼠受到的刺激因子包括:24h禁水、24h禁食、昼夜颠倒、4℃冰水游泳15min、45℃高温5min、钳尾致痛1min、束缚制动5～8h、高速震荡15min等共8种,每种刺激因子出现5次,共40d。用腹部回撤反射压力阈值(AWR)和排便粒数检测动物的内脏感觉和胃肠运动功能变化;用敞箱行为评分和蔗糖水偏嗜度评价动物神经精神活动变化。结果造模2～3周腹部回撤反射压力阈值明显降低,排便粒数明显增加;造模3～4周模型组动物敞箱实验行为评分和蔗糖水偏嗜度明显降低。造模40d时,上述变化趋势仍存在。结论慢性应激加孤养可诱导动物胃肠运动亢进、内脏感觉致敏和神经精神活动的改变,模拟IBS患者的临床特征,可作为一种有效的IBS动物模型,用于评价相关药物。     

不同周龄自发性高血压大鼠的动态血压变化与心脏的组织学改变

目的测量不同周龄自发性高血压(SHR)的收缩压、舒张压、平均压、心率、血流量及血流速,为SHR及有关高血压方面的实验研究提供基础数据参考。方法采用CODATM无创血压仪,测量34只8～15周龄SHR的收缩压、舒张压、平均压、心率、血流量及血流速。在最后一周测量完血压值后,采用45mg/kg的戊巴比妥钠,腹腔注射麻醉动物,进行处死。采取胸主动脉、肺、肾、心脏和大脑,经10%的福尔马林溶液固定常规脱水,包埋,切片,进行HE染色。结果8～15周龄SHR的收缩压和心率值在各周之间均无统计学差异(P0.05)。舒张压的比较中,第8周与第15周之间存在显著差异(P0.05)。平均压的比较中,第8周与第15周之间存在显著差异(P0.05)。在组织学观察中,40%的心肌细胞变性。结论SHR的舒张压、收缩压及平均压随周龄的增加均有上升的趋势。而心率、血流速及血流量均有下降的趋势,但是在各周存在一定的波动。     

奥氮平诱导大鼠肥胖及其机制研究

目的建立奥氮平诱导的肥胖大鼠模型,并探讨其诱导肥胖的发生机制。方法 SD雌性大鼠20只,随机分为对照组和模型组,模型组大鼠每日黑暗时相前1h灌胃奥氮平(1.2mg/kg),对照组给予等容量蒸馏水。每周称体重1次,测饮水饮食量2次。给药7周时,利用SMART video-tracking system测定大鼠白天和黑暗时相的自主活动,然后处理大鼠,测体长,计算Lee's指数,称脂肪湿重,计算脂肪系数,采用高效液相色谱-电化学检测(HPLC-ECD)法测定大鼠下丘脑神经递质,用ELISA试剂盒测定血清瘦素(leptin)、脂联素(adiponectin,ADP)水平。结果模型组大鼠造模第2周至第7周时体重均明显高于对照组(P0.05或P0.01),饮食量明显增加(P0.01),黑暗时相平均速度、路程明显减少(P0.05),Lee's指数、脂肪湿重、脂肪系数明显升高(P0.05或P0.01),下丘脑5-HT、DA、DOPAC含量明显升高(P0.01或P0.05),血清leptin含量明显升高(P0.01),ADP含量明显降低(P0.01)。结论奥氮平(1.2mg/kg)增加动物摄食量,减少活动量而引起肥胖,此作用与下丘脑神经递质、瘦素和脂联素的调节有着密切联系。     

仙灵脾对2型糖尿病大鼠血糖及氧化应激的影响

目的:研究仙灵脾对2型糖尿病大鼠血糖及氧化应激的影响。方法:利用链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠动物模型,将wistar大鼠随机分为对照组、单纯造模组、仙灵脾组及二甲双胍组。治疗8周,观察治疗期间及治疗后大鼠的一般状况、血糖、胰岛素、MCP-1、8-iso-PGF2α及24h尿白蛋白排泄量,计算ISI。结果:仙灵脾能改善2型糖尿病大鼠基本状况,仙灵脾组大鼠的血糖、胰岛素、8-iso-PGF2α及24h尿白蛋白排泄量均较单纯造模组降低,ISI明显提高;降低尿白蛋白优于二甲双胍组(P0.05),改善ISI、降低血糖不及二甲双胍组明显,胰岛素、MCP-1、8-iso-PGF2α,两组无明显差异(P0.05)。结论:仙灵脾对2型糖尿病大鼠有降糖、改善氧化应激作用,其降糖作用可能与降低MCP-1、8-iso-PGF2α有关。     

大鼠低氧诱导因子-1α基因克隆和表达载体的构建

目的:对低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)基因进行克隆及载体构建,为进一步研究HIF-1基因转染骨髓基质细胞移植治疗脊髓缺血再灌注损伤提供实验依据.方法:制备大鼠脊髓缺血再灌注模型,提取脊髓组织mRNA,进行逆转录聚合酶链式反应(RT-PR)合成HIF-1α cDNA,并对其进行PCR扩增,对PCR产物进行纯化及连接T载体、转化感受态和双酶切鉴定,并将HIF-1α克隆入pcDNA3.1载体.结果:PCR扩增的片段长度为2472bp与预期结果一致;利用BamHI和XbaI双酶切能够切出大小约2472bP的目的片段,与PCR产物片段大小相等,经测序证实无碱基改变.结论:成功克隆HIF-1α,并被构建到载体pcDNA3.1中,为进一步研究基因转染奠定了基础.     

骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠肝损伤的实验研究

目的:了解肝损伤大鼠在输注骨髓间充质干细胞后肝功能生化指标和肝脏组织病理变化情况,为临床应用提供实验依据。方法:将大鼠随机分为正常组和造模组。造模组采用腹腔注射四氯化碳的方法构建,然后将造模组随机分为干细胞移植治疗组、模型对照组。干细胞移植组经门静脉输注标记的骨髓间充质干细胞。3周后处死大鼠。然后检测大鼠肝功能、肝脏病理改变分析干细胞移植治疗肝损伤效果。结果:干细胞移植治疗3周后,大鼠的肝脏与对照组比较,明显恢复,但是并没有恢复到正常水平。结论:骨髓间充质干细胞对肝损伤的大鼠有治疗作用。     

青藤碱抗大鼠肝脏缺血/再灌注损伤作用的机制探讨

目的:观察青藤碱时大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响,探讨其保护大鼠肝脏缺血再灌注损伤作用的机制.方法:通过建立大鼠全肝缺血再灌注损伤模型,应用硝酸酶还原法测定肝脏缺血再灌注后60min血清NO水平变化;测定再灌注60 min后肝组织内MDA和SOD含量变化;再灌注60min取肝组织完成肝组织显微结构的观察.结果:肝脏缺血再灌注损伤后血清NO水平降低;青藤碱能提高再灌注后血清NO水平,且能改善肝脏缺血再灌注损伤的微循环,减轻肝细胞内超微结构的损害程度.结论:青藤碱对大鼠肝脏缺血再灌注损伤有保护作用,其主要作用机制是清除氧自由基和改善微循环.