Ca^2＋-Calmodulin is Involved in Betacyanin Accumulation Induced by Dark in C3 Halophyte Suaeda salsa

The C3 halophyte Suaeda salsa was used to investigate the roles of Ca^2＋, Ca^2＋ channels, and calmodulin （CAM） in betacyanin metabolism. Seeds of S. salsa were cultured in both the dark and light for 3 days. The fresh weight and betacyanin content were much higher in S. salsa seedlings formed in the dark than in seedlings formed in the light. The addition of Ca^2＋ to the half-strength MS nutrient solution promoted betacyanin accumulation in the dark, whereas Ca^2＋ depletion by EGTA suppressed the dark-induced betacyanin accumulation in shoots of S. salsa. The Ca^2＋ channel blocker LaCl3 also inhibited dark-induced betacyanin accumulation. The highest activity of CaM and the maximum betacyanin content decreased by 51% and 45%, respectively, in shoots of S. salsa seedlings treated with the potent CaM antagonist chlorpromazine in the dark. Furthermore, the other CaM antagonist N-（6-aminohexyl）-5-chloro-l-naphthalenesulfonamide （W-7） also inhibited the activity of CaM and dark-dependent betacyanin accumulation, whereas its less active structural analog N-（6-aminohexyl）- 1-naphthalenesulfonamide （W-5） had little effect on the responses to dark of S. salsa seedlings. These results suggest that Ca^2＋, Ca^2＋-regulated ion channels, and CaM play an important role in dark-induced betacyanin accumulation in the shoots of the C3 halophyte S. salsa.     

影响农杆菌介导的大豆子叶节遗传转化的因素

利用携带pCAMBIA1301质粒（含hpt和gus基因）的超毒根癌农杆菌菌株EHA105对大豆子叶节外植体进行遗传转化,研究了影响农杆菌介导的大豆子叶节遗传转化的因素。研究结果表明．农杆菌侵染液和共培养培养基中添加200μmok/L乙酰丁香酮和50mg／L抗坏血酸可以有效促进农杆菌对大豆子叶节的转化。农杆菌与子叶节共培养后羧苄青霉素（250mr／L）和头孢霉素（100mg／L）结合使用能有效抑制农杆菌过度繁殖并提高转化芽诱导频率;在转化细胞的分化和转化芽伸长过程中,改进的筛选策略可以明显改善对转化芽的筛选效果,从而提高转化频率。应用优化后的转化体系．获得了3个国内大豆主栽品种的转基因植株,PCR阳性植株频率为3．8％～7．6％。转化植株叶片总DNA的PCR和Southern blot实验表明,T-DNA上的外源基因已经整合到大豆基因组中。     

大豆低聚糖对肠道双歧杆菌和肠杆菌的促生长作用

目的:观察大豆低聚糖和所含糖对肠道菌群中双歧杆菌、肠杆菌体外促生长作用。方法:按1％大豆低聚糖、0．36％水苏糖、0．52％蔗糖、0．11％棉子糖含量配制培养液,分别接种各试验菌株,在0、12、24小时测定各培养液吸光度A值(分光光度计．550nm)和pH值。结果:经24小时培养,加大豆低聚糖的双歧杆菌标准株和临床分离株培养液A值分别为>1．5和1．307,大于肠杆菌标准株和临床分离株的1．1和1．173,而其pH值小于肠杆菌;加水苏糖的双歧杆菌培养液A值为1．47,大于蔗糖的1．4和棉子糖的0．53。结论:大豆低聚糖促双歧杆菌生长作用大于促肠杆菌生长,水苏糖是促双歧杆菌增殖生长的主要成分。     

嗜热泉生古细菌及其他泉古菌同义密码子使用偏向性分析

比较分析了嗜热泉生古细菌(Aeropyrum pernix K1)和其他两种系统发育相关的泉古菌[嗜气菌(Pyrobaculum aerophi-lumstr.IM2)和嗜硫菌(Sulfolobus acidocaldarius DSM 639)]的同义密码子使用偏向性。结果表明嗜热泉生古细菌(Aeropyrum pernix K1)的密码子偏向性很小,并且与GC3S成高度的相关性。这3种泉古菌的密码子使用模式在进化上很保守。与基因的功能对密码子使用的影响相比,这些泉古菌密码子的使用偏向性更是由其物种所决定的。嗜热泉生古细菌(A.pernix K1),嗜气菌(P.aerophilum str.IM2)和嗜硫菌(S.acidocaldarius DSM 639)生存在不同的极限环境中。推测正是这些极限环境决定了这些泉古菌的密码子使用偏向性模式。此外在这些泉古菌的基因组中并没有发现其正义链和反义链的密码子使用偏向性差别。嗜热泉生古细菌(A.pernix K1)和嗜硫菌(S.acidocaldarius DSM 639)的密码子偏向性程度与基因表达水平有高度的相关性,而嗜气菌(P.aerophilum str.IM2)的基因组并没有发现这种规律。     

慢病毒转染对鼻咽癌细胞5-8F增殖迁移的影响

目的:探讨慢病毒转染对鼻咽癌细胞株5-8F增殖、迁移的影响,以验证慢病毒转染是否能有效的应用于鼻咽癌细胞的增值及迁移相关研究。方法:以红色荧光标记的慢病毒为转染载体,选定不同的MOI值转染鼻咽癌5-8F细胞株,扩大培养后筛选纯化,流式细胞仪检测转染效率。以最佳MOI值转染后的5-8F(RFP-5-8F)细胞为实验组,未转染的亲代5-8F为空白对照组,取对数生长期未转染的亲代5-8F和红色荧光标记的慢病毒转染的5-8F(RFP-5-8F)细胞进行MTT、划痕实验,观察细胞镜下形态,了解细胞转染前后生长曲线,细胞迁移能力的变化。结果:流式细胞仪检测5-8F细胞慢病毒转染效率大于95%,转染最佳MOI值为30,镜下荧光强度适中。实验组与对照组比较,转染前后5-8F细胞光镜形态相似,生长曲线一致,差异无统计学意义(P=0.997),划痕实验显示5-8F与RFP-5-8F细胞迁移能力一致,差异无统计学意义(P0.05)。结论:慢病毒转染后鼻咽癌细胞能真实有效的的反应原细胞的增值及迁移能力,可以很好的应用于鼻咽癌增殖及其转移机制的相关研究。     

慢病毒介导的小鼠PINK1基因RNAi载体的构建及在NIH3T3细胞中的筛选

目的:构建筛选靶向特异PINK1-siRNA慢病毒表达载体,感染小鼠胚胎细胞(NIH3T3)验证该病毒载体的敲减效率,为研究帕金森病的发病机制奠定基础。方法:构建2对靶向小鼠PINK1-siRNA序列(KD1和KD2),将这2对序列连接在GV118上,将重组载体和病毒包装的辅助质粒共转染293 T细胞,获得慢病毒颗粒,再将该病毒颗粒转染入NIH3T3细胞,用qRT-PCR验证细胞内PINK1 mRNA表达水平以验证敲减效果。结果:筛选出可以用于后续实验的高效靶向KD2序列,并成功转染到小鼠NIH3T3细胞中,在感染复数(MOI)为50时,KD2的沉默效果最好,敲减率达到66.4%。结论:成功构建了高效靶向小鼠PINK1-siRNA慢病毒载体,其可稳定转染小鼠NIH3T3细胞,可高效抑制PINK1 mRNA的表达。为下一步利用其感染神经细胞或注入动物脑内,进一步研究PINK1基因在帕金森病发病过程中的作用环节和机制提供了分子生物学的技术基础。     

MYH9在肾脏纤维化中表达及作用研究

目的:探讨MYH9(非肌性肌球蛋白重链9)在肾脏纤维化过程中的表达变化以及这种异常表达在疾病发展过程所发挥的作用。方法:通过免疫组化染色,Western blot以及实时PCR检测了MYH9在肾脏纤维化组织中表达水平的变化。同时在慢病毒介导下构建稳定过表达MYH9的肾脏纤维化HK-2细胞,并通过MTT实验、流式细胞仪检测MYH9对HK-2细胞增殖和细胞周期的影响。结果:在小鼠肾脏纤维化组织中MYH9表达水平明显高于正常小鼠肾脏组织(P0.05)。上调MYH9对肾脏纤维化细胞HK-2的增殖水平和细胞周期都呈现出明显的促进(P0.05)。结论:MYH9在肾脏纤维化过程中发挥了重要的促进作用,针对MYH9为靶点的研究为肾脏纤维化的治疗提供新的思路。     

两种板栗网丛螟属幼虫记述（鳞翅目：螟蛾科：丛螟亚科）

记述了湖北省罗田县取食板栗叶片的大豆网丛螟 Teliphasa elegans (Butler, 1881) 和阿米网丛螟 Teliphasa amica (Butler, 1879) 的幼虫形态学特征,拍摄了幼虫生活特征图和外形、口器等形态结构图,并初步记述了在板栗叶片上的生活习性。     

接种S.fredii WGF03及突变体对大豆土壤微生物群落结构的影响

为了研究接种S.fredii WGF03及其exo D基因突变体对大豆结瘤及土壤的微生物群落影响,进一步了解exo D基因的功能,在大豆盛花期摘取每株大豆的根瘤并计数,利用PCR-DGGE电泳结合测序技术分析土壤的微生物群落。结果表明,大豆接种S.fredii WGF03后,根瘤数比不接种组增加191.67%。而大豆接种驻exo D突变体的根瘤数最少,比不接种组减少了16.67%。与空白相比,种植大豆后土壤细菌的种类和数量明显增加;接种不同根瘤菌后,细菌种类及细菌多样性也有变化;测序结果显示,土壤中细菌以Proteobacteria为主,占45.5%,土壤中土著根瘤菌为Bradyrhizobium。总之,S.fredii WGF03能够促进大豆结瘤,种植作物比接种根瘤菌对土壤细菌群落的影响更大。     

原位染色检测慢病毒载体转录通读方法的建立

慢病毒载体作为基因导入系统已被多次应用于基因治疗试验当中,近年来受到了广泛关注。转录通读是慢病毒载体应用过程中存在的潜在不安全因素之一。为了进一步完善慢病毒载体转录通读的检测方法,使检测结果更加直观准确,在已建立的在转录水平检测其转录通读的基础上,进一步模拟病毒载体整合入基因组的状态,于原病毒载体3'-LTR后插入经密码子优化的Lac Z报告基因。经转染细胞后进行原位染色,发生通读现象的细胞会被染成蓝色,从而在蛋白质水平直观地体现慢病毒载体的通读情况,说明所建立的方法是准确可行的。所得结论与q RTPCR方法在转录水平检测的结果是平行相一致。原位染色检测法的建立为慢病毒载体转录通读的检测、提高慢病毒载体生物安全性的研究提供了技术支持。