利用自裂解多肽T2A在牛耳皮肤成纤维细胞中实现多基因共同表达

目的:探讨利用自裂解多肽2A构建的多顺反子载体能否在牛耳皮肤成纤维细胞中实现多基因的有效表达。方法:利用来自一点褐翅蛾病毒(TaV)的2A元件(T2A)将GFP和Neo基因连接到同一载体中,构建pCMV-GFP-T2A-Neo质粒,将其转染牛耳皮肤成纤维细胞,以FACS检测GFP基因的表达,RT-qPCR检测GFP、T2A和Neo的表达。结果:由T2A连接的GFP和Neo基因在mRNA水平上都有显著表达,且表达水平相当。结论:以T2A连接的基因在转入细胞后能正常翻译和表达,显示T2A在牛耳皮肤成纤维细胞中具有自裂解功能,可作为一种构建多顺反子载体的有效工具用于牛耳皮肤成纤维细胞的基因转移,为其将来在转基因牛研制中的应用奠定了基础。     

Hsa-miR-663诱导型表达载体的构建及验证

为了研究hsa—miR-663在肿瘤细胞辐射应答通路中的功能,人工合成其前体并构建人表达载体pcD-NA^TM-6．2-GW／EmGFP—miR-663,进一步通过BP／LR重组反应将hsa—miR-663表达框转移至诱导型表达载体pTREx—DEST30中。然后将hsa—miR-663的诱导型载体转染构建的四环素操纵子稳定表达细胞系HeLa—TetR,通过定量反转录PCR及荧光蛋白的表达检测证实了hsa—miR-663在四环素诱导时表达水平升高。本载体的构建为深入研究hsa—miR-663的功能奠定了基础。     

MiR-33a抑制肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移北大核心CSCD

miR-33a参与许多肿瘤发展的调控。然而,其对肝癌的作用还未完全清楚。本研究探讨了miR-33a在肝癌细胞中的表达及其功能。实时荧光定量PCR显示,与永生化的正常肝细胞系LO2相比,miR-33a在SMMC-7721、Bel-7405、Hep3B细胞中表达量较高,在SK-Hep-1、HepG2、Huh7细胞中表达量较低。其中,在SMMC-7721中表达量最高,在Huh7中表达量最低。分别用miR-33a模拟物和抑制物转染表达量最高和最低的细胞系SMMC-7721和Huh7,实时荧光定量PCR显示,模拟物转染细胞后,36 h转染效率最高;cy3染色法显示,抑制物转染细胞后,各时间点被标记的细胞均大于60%;CCK-8法和Transwell法显示,miR-33a抑制SMMC-7721和Huh7细胞增殖、迁移和侵袭;Western印迹显示,miR-33a抑制SMMC-7721、Huh7细胞claudin-1表达,促进E-钙粘蛋白表达;balb/c裸鼠成瘤实验表明,皮下注射miR-33a拮抗剂能促进肿瘤生长。上述结果证明,miR-33a在不同的肝癌细胞系中表达水平高低不一,在SMMC-7721中最高,Huh7中最低;miR-33a可以抑制肝癌细胞增殖,并可能通过抑制claudin-1及促进E-钙粘蛋白表达,抑制上皮间质转化进程抑制肝癌细胞侵袭和迁移。     

阴道乳酸杆菌生物拮抗作用的研究进展

乳酸杆菌作为阴道微生态的一部分,控制并拮抗着阴道内其它细菌的生长。阴道内占优势的乳酸杆菌可通过竞争黏附、抑制病原体的生长、刺激免疫系统等机制拮抗大肠埃希菌、淋球菌、加德纳菌、白色念珠菌、阴道毛滴虫等多种致病微生物的感染。目前我们关于益生菌乳酸杆菌生物拮抗作用的知识仍不完整,需要更多的研究来揭示其中的矛盾现象,为新型微生态制剂的开发提供可靠依据。     

撤稿郑重声明

<正>我刊于2008年第28卷第4期539-543页发表的英文题名" Study of latex exploitation using depolymerizing compounds of microfilaments in rubber trees "(中文题名《使用微丝骨架解聚剂对橡胶     

tPA突变体在哺乳动物细胞中的表达

利用携带有二氢叶酸还原酶(dhfr)基因的pCI载体,实现tPA突变体(FrGGI)在CHO-dhfr^-细胞中的高效表达,获得高表达细胞株。采用分子克隆常规技术,将去除3’端非蛋白编码区的tPA突变体cDNA与pCI载体连接,构建真核表达载体pCI—tPA;采用阳离子脂质体转染法转染CHO-dhfr^-胞。经酶切及测序鉴定,证明所构建的质粒正确,转染CHO—dhfr细胞后,经过MTX加压筛选,得到了10株表达水平较高的细胞株,其活性可达每106细胞4000U／24h。以上结果为进行tPA突变体工程细胞株的筛选奠定了基础。     

阴道微生态与高危型人乳头瘤病毒感染及宫颈病变的相关性

目的 探究阴道微生态与高危型人乳头瘤病毒(HR HPV)感染以及宫颈病变之间的相关性,为后续研究提供参考。 方法 选择2018年1月至2019年6月就诊于石河子大学医学院第一附属医院妇科门诊,同时行爱必维(细菌性阴道病五项联合测定试剂盒)检测、HR HPV检测及宫颈组织病理检查的343名妇女作为研究对象,分析相关检测数据并探究阴道微生态与HR HPV感染以及宫颈病变的相关性。 结果 过氧化氢阳性、唾液酸苷酶阳性、白细胞酯酶阳性、乳杆菌数量减少及阴道清洁度3~4度的妇女感染HR HPV及发生宫颈病变的可能性显著大于过氧化氢阴性、唾液酸苷酶阴性、白细胞酯酶阴性、乳杆菌数量较多及阴道清洁度1~2度的妇女,差异均有统计学意义(均P结论 阴道微生态失衡与HR HPV感染以及宫颈病变有一定关联,纠正阴道微生态失衡可一定程度上预防HR HPV感染及宫颈病变。     

垂丝海棠花蕾和花挥发性成分研究

采用顶空固相微萃取和气质联用技术(HS-SPME-GC-MS),首次分析了垂丝海棠花蕾和花的挥发性成分。从样品中共分析鉴定出68种组分,其中花蕾63种组分,花中24种组分,有19种组分共有。烷烃类化合物是花蕾和花的主要成分(花蕾:34.87%;花:37.48%);酯类化合物在花蕾中的含量高于花(花蕾:2.34%,花:0%),而酸类、醇类化合物在花蕾中的含量却远低于花(花蕾:12.86%、7.19%,花:31.49%、7.76%),这说明在花的开放过程中,酯类化合物被相关的酶水解成相应的酸和醇。     

非小细胞肺癌ROS1及其融合基因CD74-ROS1逆转录病毒载体的构建

目的:利用逆转录病毒载体pBaba-puro构建携带ROS1基因及其CD74-ROS1融合基因的重组载体pBaba-puro-ROS1,pBaba-puro-CD74-ROS1。方法:设计与合成引物,提取组织标本RNA,反转录和PCR扩增,经BamHI和TaqI双酶切,琼脂糖凝胶电泳,切胶回收进行连接转化,并再次酶切鉴定,测序分析。结果:成功构建携带ROS1基因及其CD74-ROS1融合基因的重组载体pBaba-puro-ROS1,pBaba-puro-CD74-ROS1,并通过双酶切与测序鉴定。结论:利用逆转录病毒载体基因重组技术能够成功构建出携带相应基因的逆转录病毒,可用于后续研究。